玉米芯固定化单宁酶的工艺条件优化

探讨改性玉米芯固定化单宁酶的工艺条件。采用Box-Behnkens试验设计和响应面分析方法,对改性玉米芯固定化单宁酶的条件进行优化,得出其最佳工艺条件为：单宁酶酶液与玉米芯载体比26:1(V/m)、pH 6.8、时间8.0h、温度36℃,在此条件下固定化酶活力达到(16085±5)U/g,酶活力回收率为44.68%。对最佳条件下制备的固定化单宁酶的酶学特性进行研究,发现该固定化酶的最适反应pH值为4.5～5,最适反应温度为60℃。     

LX-1000HA树脂固定化单宁酶的工艺优化

优化LX-1000HA树脂固定化单宁酶的工艺条件。采用Box-Behnken试验设计和响应面分析方法进行优化,得出最佳工艺条件为酶液/载体比17.6(V/m)、pH 6.9、时间24h、温度36.5℃,该条件下固定化酶活力达到(18 495±200)U/g,酶活回收率为45.25%。     

响应面法优化柠檬苦素降解酶的固定工艺

目的 采用响应面法优化柠檬苦素降解酶的固定工艺。方法 采用海藻酸钠-聚乙烯醇固定柠檬苦素降解酶，通过单因素和响应面实验对固定化条件进行优化，确定最佳的工艺参数。结果 优化后的工艺参数为：以聚乙烯醇(0.2 g/100 mL)-海藻酸钠(5.0 g/100 mL)为载体，戊二醛（2 mL/100 mL）为交联剂，采用包埋法固定柠檬苦素降解酶，其中粗酶液浓度0.06 mg/mL、CaCl2浓度6 mg/mL、固定化时间22 h。此条件下的柠檬苦素降解率为(97.87±0.32)%。结论 经优化后的工艺生产出的酶降解率高并且易于分离，具有很好的实际应用价值。     

固定化对动植物酯酶性质的影响

比较了离子交换法得到的固定化小麦酯酶和固定化鸡肝酯酶的主要性质与相应的游离酶的性质。结果表明 ,固定化小麦酯酶的最适pH在 5 5附近 ,比游离小麦酶的最适 pH增加了0 8个 pH单位 ;固定化鸡肝酯酶的最适pH在 8 0附近 ,比游离鸡肝酯酶的最适 pH增加了 0 5个pH单位 ;固定化小麦酯酶的最适温度与游离酶的相当 ,但酶活力 温度曲线的峰形变小 ;固定化鸡肝酯酶的最适温度比游离鸡肝酯酶的下降了 5℃ ,酶活力 温度曲线的峰形也略变陡峭。这 2种固定化酯酶对有机磷类农药 (敌敌畏 )抑制的响应明显高于游离酶对农药抑制的响应     

Ni2+螯合的琼脂糖凝胶载体用于重组酶SUMO-Hep I-His的固定化

以Ni~(2+)螯合的琼脂糖凝胶(GLK-Gel Ni)作为固定化载体,对融合肝素酶Sumo-Hep I-His的固定化进行了研究,实现了融合酶的一步纯化和固定化。通过对固定化条件的优化,得到较优的固定化体系:载体与粗酶质量比为30∶1,固定化pH为7.0,吸附时间为6 h,该条件下获得的固定化酶酶活10.07±0.35 IU/mL载体。酶学性质研究结果表明:固定化酶在30℃的热稳定性相对于游离酶显著提高,固定化酶半衰期是游离酶的8倍,最适反应温度提高了3℃,反应pH的耐受性也有了明显的提高。此外,与游离酶相比,固定化酶的储藏稳定性和可重复利用性良好,在4℃下放置60 d能保持76%的初始活性;固定化酶重复使用8次后,酶活仍剩余75.8%;而且GLK-Gel Ni载体本身具有良好的重复利用性,重复固定5次Sumo-Hep I-His后,载体对酶的活性吸附仍能达到88.9%。整体而言,固定化Sumo-Hep I-His显现了较好的工业应用潜能。     

壳聚糖固定瑞士乳杆菌蛋白酶的条件研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对瑞士乳杆菌蛋白酶的固定化条件进行研究。在单因素试验基础上,以固定化酶活力为主要指标,研究凝结液、壳聚糖质量浓度、酶用量、交联时间、戊二醛质量浓度对瑞士乳杆菌蛋白酶固定化的影响。运用响应面对固定化条件进行优化,确定瑞士乳杆菌蛋白酶的最优固定条件：凝结液为4g/100mL NaOH-甲醇(体积比3:1)、壳聚糖质量浓度2.89g/100mL、酶用量2.95mg、交联时间1h、戊二醛质量浓度0.40g/100mL,此时固定化酶活力为28.67U。     

漆酶最佳固定化条件研究

以聚乙烯醇(PVA)为载体,戊二醛为交联剂制备凝胶态PVA,继而以二甲基亚砜为溶剂,环氧氯丙烷为反应物制备环氧化PVA,利用该产物进一步与漆酶进行反应,从而实现漆酶的固定化.实验控制二甲基亚砜与环氧氯丙烷配比(体积比)为1∶1,固定化温度T=35℃,环氧化PVA载体(g)∶漆酶(mL)∶HAc-NaAc缓冲溶液(mL)=1∶1∶2的条件下对漆酶进行固定化,固定化时间为5h,可得到相对酶活较高的固定化漆酶.用该固定化漆酶深度处理草浆二沉池出水,在反应体系pH值4.0、反应时间为6h条件下,色度去除率可达62.9％,BOD浓度升高47.6％,但COD浓度下降不明显,该固定化漆酶在放置36 h后降解能力显著降低.     

磁性固定化漆酶在苹果汁除酚中的应用研究

以磁性聚苯乙烯微球为载体，戊二醛为交联刑，制备出了磁性固定化漆酶。研究表明：固定化酶的Km值较游离酶小，最适温度与游离酶相同，最适pH较游离酶下降0．4个单位，热稳定性、pH稳定性和贮存稳定性均较游离酶有所提高。Fe^2 、Hg^2 、Cr^3 对固定化酶有抑制作用，Cu^2 对固定化酶有激活作用。抑制刑EDTA、DMSO对磁性固定化酶的抑制作用明显较游离酶小。固定化漆酶在40℃条件下处理2h后，苹果汁中多酚含量减少20％，而酶活力没有变化。     

菠萝蛋白酶固定化技术及其应用研究

用脱乙酰甲壳质为载体,戊二醛为偶联剂将菠萝蛋白酶进行固定化．用0.35%(v/v)戊二醛在4-6℃下处理载体8小时,加溶液酶(0.918mg蛋白质/ml)在20-25℃下固定8小时,固定化效果最佳,固定化酶活力回收达40%,相对活力为64%,每克载体偶联蛋白质量达0.560mg．固定化酶的表现Km值(酪蛋白)为0.022%(w/v),溶液酶Km值为0.033%;它们的最适pH合别为7.8和6.8;最适温度均为50℃,当底物酪蛋白浓度在0.4%以上时,固定化酶活力受到抑制,溶液酶则在1.4%以上时才产生抑制．用固定化菠萝蛋白酶处理啤酒,浊度比对照下降了1.5l-5.3倍,蛋白质含量下降了73%,冷藏120天无冷浊现象发生;同时不改变啤酒原有风味和各项理化指标．     

脂肪酶固定化工艺优化及其酶学性质研究

以D-101、AB-8和S-8三种大孔树脂为载体,进行黑曲霉脂肪酶的固定化研究。根据脂肪酶的固定化率及活力回收率,确定D-101为固定化载体。经响应曲面法优化得脂肪酶的固定化工艺:以5 g经预处理的D-101为载体,加入9.0 m L酶液(20 mg/m L),p H 7.6,39℃下吸附4.3 h,脂肪酶固定化率为95.11%,固定化脂肪酶活力回收率为101.36%。固定化酶最适反应温度升高2℃,最适p H不变,固定化脂肪酶的酸碱稳定性和热稳定性均优于游离酶。     

响应面法优化离子交换法固定化β-D-呋喃果糖苷酶

以大孔阴离子树脂D311 为载体,对日本曲霉来源的β-D- 呋喃果糖苷酶进行离子交换法固定化。研究温度、pH 值、时间、游离酶液酶活力对固定化效果的影响,并在此基础上运用响应面法对固定化条件进行优化。结果表明,最佳固定化条件为：室温、pH6.6、固定化时间4h、游离酶液酶活力为900U/mL,在此条件下,固定化β-D- 呋喃果糖苷酶生产的低聚果糖产量可达58.16%。     

蛋白酶固定化条件优化及在酱醪发酵中的应用

本文以海藻酸钠浓度、氯化钙浓度、酶液与载体溶液体积比及固定时间为因素,优化中性蛋白酶固定化工艺,并将固定化中性蛋白酶凝胶颗粒应用于传统高盐稀态酱醪发酵,以缓解高渗透压环境对酶的胁迫作用,提高蛋白质利用率,缩短酿造周期。结果显示:当采用0.007 M海藻酸钠、0.27 M氯化钙,酶液与载体溶液体积比为12:30,固定2 h,固定化凝胶颗粒最稳定,相对酶活力最高;另外,酱醪发酵数据显示,酱醪总重17.5 kg,添加总酶量5.80 g(1000 U/g酶粉)时,外源游离蛋白酶和固定化蛋白酶试验组均能显著改善发酵过程各指标含量,平均缩短发酵时间20 d左右;与外源游离组相比,固定化试验组效果更加显著,蛋白质转化率较空白对照组与游离组分别提高达6.08%和1.88%。因此,在酱醪发酵过程添加固定化外源蛋白酶能有效提高高盐稀态酱油发酵蛋白质转化率,同时缩短发酵周期。     

单宁酸功能化Fe3O4磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶的工艺条件优化

该研究探讨单宁酸功能化Fe₃O₄磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶的工艺条件。以单宁酸功能化磁性纳米粒子(TA-MNPs)作为固定化酶的载体,通过测定固定化酶的活力和酶活回收率优化微泡菌褐藻胶裂解酶的固定化条件,并利用傅里叶变换红外光谱和透射电镜对固定化酶的结构进行了表征。结果表明,固定载体量为10 mg时,微泡菌褐藻胶裂解酶的最佳固定化条件如下:戊二醛浓度为1.00%,交联时间为2 h,固定化温度为5℃,固定化时间为8 h,固定化pH为8.00,加酶量1.20 U,在此条件下固定化酶的活力和酶活回收率达到最大,分别为36.56 U/g和30.55%。傅里叶变换红外光谱分析显示,微泡菌褐藻胶裂解酶成功固定在TA-MNPs表面。透射电镜结果显示,TA-MNPs分散性良好,呈规则球状;固定化酶有明显的聚集现象,粒径变化不大。与游离酶相比,固定化酶的温度稳定性、pH稳定性和存储稳定性提高。微泡菌褐藻胶裂解酶的固定化条件优化研究为该酶的固定化酶制备及应用打下良好的基础。     

磷脂酶A1(Lecitase Ultra)大孔树脂固定化研究

选用9种树脂对磷脂酶A1(Lecitase Ultra)进行固定化,比较得出最适合的固定化载体为D101型号的大孔树脂.对其固定化条件进行优化,得到了固定化最优的条件为:酶液和树脂液料比1∶1(mL/g),磷酸盐缓冲液pH为6.5,室温下固定化时间60 min.在此条件下的得到的固定化酶的酶活力为750.0 U/g.通过扫描电子显微镜观测了固定化前后,树脂表面特征的变化.     

酶固定化载体材料的研究进展

酶固定化的载体材料必须与酶的非催化活性基团发生有效结合方能使固定化酶发挥其催化酶解作用,载体材料的确定是酶的固定化技术关键。随着化学工业的不断进步,研发出众多具有特殊结构且功能各异的新材料,推动了载体固定化酶技术的发展。结合目前固定化酶技术的研究现状和应用情况,本文介绍了酶的固定化载体常用的高分子材料、磁性材料、纳米材料和介孔材料的研究现状,比较了上述材料与酶的结合机制。简述了固定化酶的制备方法和应用形式,并对固定化酶载体材料的研究进展进行了总结,以期对酶的固定化材料研究提供参考。     

柔性固定化木瓜蛋白酶的制备及在酶解波纹巴非蛤中的应用

在壳聚糖膜的表面接上分子链较长的双醛淀粉作为柔性固定化酶的载体,将木瓜蛋白酶固定在该载体上制成柔性固定化木瓜蛋白酶,并应用于酶解波纹巴非蛤制备小分子肽。通过考察温度、pH 值、加酶量和固定化时间等条件对柔性固定化木瓜蛋白酶的酶活、酶活回收率的影响,确定最优固定化条件。结果表明：双醛淀粉用量0.8mg/g 壳聚糖、柔性固定化酶温度25℃、柔性固定化酶时间20h、加酶量40mg/g 壳聚糖、pH8.0 条件下所得的固定化酶酶活最高,酶活回收率63.35%。将该柔性固定化酶在酶解温度40℃、pH7.0、加酶量1.0%、酶解时间4h条件下制备波纹巴非蛤小分子肽,产率为3.4055%。     

双醛氧化纤维素固定化木瓜蛋白酶及酶学性质的研究

以双醛氧化纤维素为载体固定化木瓜蛋白酶,研究了固定化酶的制备条件、微观结构及酶学性质。结果表明:固定化时间4h,固定化温度4℃,酶/载体=1:3000(g:g)时,固定化酶的活力最高为50.9U/g。红外光谱和扫描电镜对固定化酶的微观结构研究表明,双醛氧化纤维素的醛基与木瓜蛋白酶的氨基发生共价反应形成固定化酶。与游离酶相比,木瓜蛋白酶经过固定化后,热稳定性和耐酸性增强,与底物酪蛋白的亲和力降低,固定化酶重复使用5次后,相对酶活力为55.1%。     

磷脂酶固定化载体材料的研究进展

游离磷脂酶价格昂贵且稳定性差限制了其应用,固定化技术使酶稳定性增强,可以反复使用,降低了成本,极大地拓宽了酶的应用范围。性能优良的固定化酶应具备成本低、稳定性高和催化活性高等特性。载体材料不仅是固定化酶的重要组成部分,还是影响固定化酶性能的因素之一。对磷脂酶固定化载体材料主要从无机材料、有机材料、复合材料以及无载体4个方面进行综述,并对磷脂酶固定化载体材料发展方向予以展望,为固定化磷脂酶研究在载体材料上的选择提供了参考依据。     

Fe3O4磁性纳米粒子固定化微泡菌褐藻胶裂解酶AlgL17的研究

本论文旨在优化微泡菌褐藻胶裂解酶AlgL17固定化条件,以期探索出高效的固定化条件。以单宁酸功能化的四氧化三铁磁性纳米粒子作为载体,对褐藻胶裂解酶AlgL17进行固定化条件优化。测定固定化酶的最适反应温度和最适反应pH,并对固定化酶进行傅里叶变换红外光谱(FTIR)和扫描电镜(SEM)检测。结果表明,褐藻胶裂解酶AlgL17最佳固定化条件为:加酶量2.7 U、载体量25 mg、固定时间5 h,固定化酶的最适反应条件为:温度35℃、pH8.5。FTIR和SEM结果显示,褐藻胶裂解酶AlgL17固定在载体表面。四氧化三铁磁性纳米粒子可以成功固定褐藻胶裂解酶AlgL17,固定化后的褐藻胶裂解酶具有工业应用的前景。     

转谷氨酰胺酶在尼龙网上的固定化及其酶学性质的研究

以硫酸二甲酯活化后的尼龙网为载体,戊二醛为交联剂固定转谷氨酰胺酶,并对固定化条件及固定化酶的酶学性质进行研究。结果表明固定化的最适条件为：1cm2 处理后的尼龙网与20ml 7% 的戊二醛交联5h 后,在4℃条件下固定10ml 1.5mg/ml 的转谷氨酰胺酶溶液6h,此条件下酶活回收率达到46%。固定化转谷氨酰胺酶相对于游离酶具有更好的热稳定性,并具有良好的储存性及操作稳定性。