氨基甲酸乙酯降解酶的基因克隆

提取氨基甲酸乙酯降解菌株基因组DNA,以27f和1492r为引物PCR扩增并测定目的菌株16Sr DNA序列,基因组DNA以Mbo I进行酶切,与BamH I酶切的pUC18连接形成重组载体,将载体转化入大肠杆菌BL21中,构建基因组文库。利用溴麝香草酚蓝筛选培养基上筛选含有氨基甲酸乙酯降解酶基因的重组菌。通过本实验,鉴定出氨基甲酸乙酯降解酶菌株属于蜡样芽孢杆菌。阳性重组菌株可通过含有1%溴麝香草酚蓝的培养基(pH=6.5)筛选出来。     

自然发酵腐乳中芽孢杆菌的分离与鉴定

从自然发酵腐乳中筛选芽孢杆菌并研究其作用。根据菌株产蛋白酶能力大小,对自然发酵腐乳中细菌进行分离纯化获得四株芽孢杆菌,经纯化培养后观察其个体形态和菌落形态,利用Biolog微生物自动鉴定系统和16S r DNA序列分析对其精确鉴定。结果显示四株菌株分别为:一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis B),两株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus B),一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens B)。     

生物降解呕吐毒素的肠杆菌筛选与鉴定

呕吐毒素,又名脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）,主要污染小麦和大麦等作物。为了筛选得到具有呕吐毒素降解能力的菌株,实验搜集了50份土壤,通过菌株的富集、筛选和纯化得到一株白色菌株,命名为W-D,该菌株能在无机盐培养基中以DON（20 μg/mL）作为唯一碳源进行生长。对分离得到的菌株进行DON毒素降解能力检测发现,在37 ℃、180 r/min下作用于60 μg/mL的DON,经过7 d反应降解率可达40.40%。对该菌株进行相关鉴定,发现该菌株为革兰氏阴性菌,显微镜下呈短杆状,扫描电镜观察菌株为形状不一的杆状结构,大小约为0.5×(1.0~3.0) μm。生理生化鉴定结果表明W-D基本符合肠杆菌的特征。对W-D的DNA进行PCR扩增16S rDNA得到一段长度约为1500 bp的片段,测序后进行同源性分析表明该菌株属肠杆菌Enterobacter,与阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae的亲缘关系最近。     

降解呕吐毒素微生物的筛选鉴定及其应用

目的 筛选高效降解呕吐毒素（Deoxynivalenol,DON）的微生物并鉴定其种类。方法 分离培养出高效降解DON的微生物,鉴定该微生物种类,分析微生物各组分降解DON的效率,并在DON超标的小麦麸皮中开展应用。结果 筛选到高效降解DON的菌株MB-1,该菌株能降解82.3%的DON。鉴定结果表明菌株MB-1被命名为Bacillus aryabhattai MB-1,中文名为阿氏芽孢杆菌MB-1。各组分降解DON的结果表明菌株MB-1产生至胞外的活性物质主导DON的生物降解。菌株MB-1可降解小麦麸皮中80.4%的DON。结论 本研究筛选到降解DON的阿氏芽孢杆菌MB-1,这是首次报道阿氏芽孢杆菌可高效降解DON,为降解去除小麦等谷物中的DON提供了菌种资源。     

鸡汤中一株耐热菌的分离与鉴定

实验室自制肉制品(鸡肉汤)中分离得到一株耐热菌,进行菌落形态、生理生化特征鉴定,并采用Biolog快速鉴定结合16S r DNA序列分析两种方式鉴定,16S r DNA序列分析结果表明此菌株属于芽孢杆菌属,Biolog快速鉴定结果显示此菌株属于芽孢杆菌属中的枯草芽孢杆菌。因此导致鸡汤高温加热后仍腐败变质的菌株为枯草芽孢杆菌。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的筛选与鉴定

以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为唯一碳源,通过平板分离纯化,经高效液相色谱(HPLC)检测,对降解效果较高的菌株进行分子鉴定.最终筛选得到的菌株对DON的降解率达56.61％,通过16S r DNA序列分析,鉴定为假单胞杆菌,为更进一步的研究提供了菌株材料.     

降解黄曲霉毒素M1菌株筛选方法的建立与菌株鉴定

为实现对黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)的生物降解,建立从环境中筛选AFM1降解菌株的方法并得到降解菌株。结果表明:对采自农田、粮库、牛场的300个土壤或粪便样品,初筛选出能在以香豆素为唯一碳源的培养基上生长的菌株37株;用液相色谱法测定降解率进行复筛,得到3株降解率在50%以上的菌株;进而对复筛菌株进行生长条件和耐受性实验,筛选出降解率为78.6%,生长速度快、长势好、稳定期长,且降解过程中热稳定性好的菌株102807。经过菌落细胞形态学、生理生化特征及16S r DNA序列系统发育分析,鉴定为纤维纤维微菌(Cellulosimicrobium cellulans)。首次发现了纤维纤维微菌对AFM1的生物降解功能。     

一蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的表型与基因型

目的对2003年发生在云南的一起蜡样芽胞杆菌呕吐型食物中毒案例中的分离株YN0303进行表型和基因型分析研究。方法采用16S r DNA序列分析和16S/23S r DNA ITS特征图谱分析结合形态、生理生化和基因型进行菌种鉴定;PCR检测呕吐毒素和肠毒素合成相关基因,高效液相和质谱联用(HPLC-MS)化学定量分析呕吐毒素合成情况,测试部分生理生化特性和生长温度范围,进行了pan C分型和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)。结果确认了该菌株确为蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus,虽然该食物中毒是典型的呕吐型案例,但是发现该分离株呕吐毒素相关合成基因ces呈阴性,呕吐毒素化学定量分析结果为阴性;其生理生化特性(水杨苷发酵、淀粉水解和溶血特性)与典型呕吐型菌株也不相同。pan C分型并非呕吐型蜡样芽胞杆菌所属的Ⅲ型,而是属于细胞毒性强的IV型,而且其肠毒素基因hbl、nhe和cyt K2也均呈阳性;多位点序列分析显示该菌是一个新型别ST753,是区域性相对独立进化菌株。结论在该呕吐型食物中毒案例中可能有多个蜡样芽胞杆菌参与,该分离株YN0303并非主要致病株—呕吐型菌株,但可能作为细胞毒性强的菌株参与了共感染。     

黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选鉴定

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。     

低糖腌制韭菜根中优势腐败菌的分离与鉴定

以胀袋变质的低糖腌制韭菜根为材料,对贮藏过程中的主要腐败微生物进行分离筛选与鉴定。利用纯培养法共筛选出菌落形态差别较明显的优势细菌菌株4株,经形态学观察、革兰氏染色、生理生化鉴定及16S rRNA序列分析鉴定确定了各菌株的种属。结果发现,腌韭菜根中的主要致腐菌由1株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、1株巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、1株解淀粉芽孢杆菌(Paenibacillus amylolyticus)和1株莴苣不动杆菌(Acinetobacter lactucae)构成。     

产角蛋白酶植物内生菌的筛选与鉴定

以不同植物的内生菌为出发菌株进行产角蛋白酶菌株的筛选,通过脱脂牛奶平板、高压蒸煮后的羽毛摇瓶实验及未经处理鸡毛摇瓶实验筛选到一株能够在48h内降解未经高压蒸煮的鸡毛的内生菌,该菌株来源于樟树叶片。通过形态学观察、生理生化实验结合16S rDNA基因序列分析的方法确定该菌株为蜡样芽孢杆菌,命名为Bacillus cereus Z-3。以不同的角蛋白为底物进行发酵培养,酶活力测定结果显示该酶降解角蛋白能力由强到弱的顺序为鸡毛、羊毛、头发。     

米曲霉Aspergillus oryzae As-W.6对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的降解效果

研究米曲霉Aspergillus oryzae As-W.6对脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）的降解作用。经高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）检测,不同初始质量浓度的DON经菌株As-W.6发酵7 d后,降解率均在35%以上;发酵14 d后,降解率均在90%以上;同时该菌株中提取的降解酶对不同初始质量浓度DON的降解率均达70%以上。对降解产物采用高效液相色谱-质谱（HPLC-mass spectrometry,HPLC-MS）分析检测,结果显示DON经该降解菌降解后,相对分子质量从原来的295.1变为281.2,减少了13.9,说明DON确实被该菌降解成为另一种物质。     

武汉市售茶中2 种食源性致病菌的检测与分析

为了解市售茶叶中菌落总数和2 种食源性致病菌（蜡样芽孢杆菌和克罗诺杆菌）的检出情况,根据国标对武汉地区市售的46 份茶叶样品进行菌落总数和2 种食源性致病菌的初步分离和鉴定,分别用16S rDNA内转录间隔区-聚合酶链式反应方法鉴别蜡样芽孢杆菌,用16S rDNA和fusA序列分析对疑似克罗诺杆菌的分离株进行鉴定,进而比较和分析不同产地和类别间微生物的检出情况。结果发现,蜡样芽孢杆菌在市售茶叶中检出率极高,达97.9%,而且其数量约占细菌总数的6.0%。鉴定出3 株阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter）,其检出率达6.5%,仅占细菌总数的0.1%～3.2%。花草茶中细菌总数最高,也是唯一检出克罗诺杆菌的茶类;发酵茶中蜡样芽孢杆菌数量最高,均超过1 100 MPN/g。不同产地茶叶在这3 个微生物指标上有显著差异。当茶及其深加工产品和其他食品原辅料混搭成新产品时,这2 种食源性致病菌可能带来风险隐患。     

柑橘皮渣降解菌的筛选及特性

为有效处理柑橘皮渣,筛选高效降解柑橘皮渣的菌株。本实验从堆肥中分离得到5 株菌株,测定其香精油耐受性,选取两株耐受性较好的菌株测定纤维素酶和果胶酶活力,并进行柑橘皮渣降解实验。结果表明,菌株L207和L702在65 ℃条件下可正常生长,属于耐高温菌株;对柑橘香精油具有较好的耐受能力,其最大耐受体积分数为25.0%;2 株菌株的纤维素酶活力和果胶酶活力分别是对照菌株（Bacillus subtilis L520）的1.31、2.08 倍和12.68、7.30 倍。柑橘皮渣降解实验表明,菌株能快速高效分解纤维素和果胶。16S rDNA基因序列分析鉴定表明菌株L207和L702均属于地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）。     

广谱抗菌乳酸菌的分离鉴定及细菌素的提取和纯化

本研究从黑龙江传统自制酸菜中分离到1 株产抑菌活性物质的乳酸菌HLJ-174,其发酵产物排除有机酸、H2O2等干扰因素后对大肠杆菌、荧光假单胞菌、蜡样芽孢杆菌和藤黄微球菌等食品中常见的致病菌有广谱抑菌活性。通过形态学、生理生化和16S rRNA序列分析鉴定该菌株为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,命名为Lactobacillus plantarum HLJ-174。研究了利用有机溶剂萃取的方法提取细菌素,发现正丁醇、乙酸乙酯萃取效果较好,正己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、丙酮、乙醇等没有效果。使用不同体积的正丁醇和乙酸乙酯（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 倍发酵液体积）萃取,发现1.5 倍发酵液体积的正丁醇效果最好。利用Sephadex LH-20对萃取产物进行了进一步分离,得到的活性物质对大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌等具有较强的抑菌活性。     

高效降亚硝酸盐乳酸菌的驯化复筛及菌株鉴定

目的：筛选出高效降亚硝酸盐乳酸菌,为今后益生乳酸菌的开发提供一定的理论依据。方法：从地方特有食品及动物肠道中分离纯化出13 株乳酸菌,采用盐酸萘乙二胺法对13 株乳酸菌的体外降亚硝酸盐能力进行测定,并对降亚硝酸盐效果最强菌株进行驯化培养和抑菌实验,通过生理生化及16S rDNA法对所分离的降亚硝酸盐能力最强菌株进行鉴定。结果：获得1 株编号为JS3的乳酸菌,该菌对亚硝酸盐降解率为83.39%,经过驯化复筛及培养条件优化得到：培养基中蛋白胨添加量15 g/L、接菌量5%、培养温度30 ℃、培养时间48 h,其降解率达到93.47%,同时菌株对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌还具有抑制性能。经鉴定菌株为玉米乳杆菌（Lactobacillus zeae）,将其命名为L. zeaeJS3。结论：菌株JS3具有高效降解亚硝酸盐能力,能够成为今后降解亚硝酸盐微生态活性菌的优良菌种。     

不同盐质量浓度四川泡菜腐败前后微生物的分析比较研究

研究不同盐质量浓度四川泡菜正常发酵后与发生腐败后盐卤中微生物的数量、分布及变化。利用不同的选择培养基对3 个盐质量浓度四川泡菜腐败前后盐卤中的微生物进行分离纯化,得到168 株菌株,并经16S rDNA和18S rDNA分子生物学鉴定其种属。结果表明：在不同盐质量浓度泡菜正常发酵过程中,以植物乳杆菌和戊糖乳杆菌为主的乳酸菌主导了泡菜发酵过程。泡菜腐败时,不同盐质量浓度泡菜中的腐败微生物以芽孢杆菌和酵母为主,其中枯草芽孢杆菌和塔克斯假丝酵母在不同盐质量浓度泡菜腐败时均占一定比例;40 g/L盐质量浓度泡菜盐卤以甲级营养型芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、库德里阿兹威毕赤酵母和热带念珠酵母为主,60 g/L盐质量浓度泡菜盐卤以短小芽孢杆菌、克鲁维毕赤酵母和热带念珠酵母为主,80 g/L盐质量浓度泡菜盐卤以奇异变形杆菌、解淀粉芽孢杆菌、白地霉、地衣芽孢杆菌、库德里阿兹威毕赤酵母以及克鲁维毕赤酵母为主。腐败泡菜盐卤表层的膜璞由细菌和真菌共同形成,且盐质量浓度越低,细菌所占的比例越高。     

产蛋白酶菌株的鉴定及其对虾壳的脱蛋白研究

从虾塘沉积物中分离到一株产蛋白酶的菌株C1，采用菌落形态、生理生化特征和16S rDNA基因序列分析相结合的方法进行鉴定，进一步探究其在提取虾壳甲壳素工艺中脱蛋白的应用，并与枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）对虾壳蛋白脱除效果进行比较分析。结果表明，菌株C1被鉴定为一株蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus），其对虾壳的脱蛋白能力高于枯草芽孢杆菌。当发酵培养基中葡萄糖添加量为50 g/L，虾壳粉添加量为20 g/L，酵母膏添加量为1 g/L时，枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌发酵5 d的蛋白酶活力分别为145.7 U/mL、220.8 U/mL，脱蛋白率分别达到80.4%、90.8%。     

降解类胡萝卜素产香细菌的筛选及鉴定

本实验从常年落花的土壤中分离到了6 株能降解类胡萝卜素并且产生香味的菌株。形态学观察和16S rDNA序列分析表明,其中有3 株与Bacillus subtills和Bacillus tequilensis聚在一起,2 株与Bacillusmethylotrophicus和Bacillus pumilus相似性最高,1 株菌与Bacillus licheniformis亲缘关系最近。通过透明圈观察和OD495 nm判定培养基中的类胡萝卜素明显被降解,并且通过气相色谱-质谱法初步分析了其降解产物,产物中主要为2-庚酮、棕榈酸、邻苯二甲酸酐等物质。