纤维素酶活力测定方法

用DNS为显色剂，分别以滤纸和CMC为底物，以滤纸糖酶活性（FPA）和羧甲基纤维素酶活性（CMCase)表征纤维素酶活力，确定酶活测定用波长为530nm，参比溶液应为失活酶，底物和DNS等共热的反应物；比较了两种底物的酶活力测定方法，结果表明，CMCase比FPA高，说明酶对水溶性底物有较高的活力，也表现吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响，对于不同牌号的纤维素酶，织物的酶减量率与CMC酶活力关系密切。     

蔗渣纤维素分解菌的筛选、鉴定及酶活的测定

为充分利用蔗渣,筛选高效降解蔗渣的菌株,本文从堆肥中分离得到有显著透明圈、可产纤维素酶的真菌8株,选其中3株测定了羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)活性。结果表明,菌株SC8的透明圈直径、CMCase和FPA活性均最大。经菌落形态特征分析,初步鉴定菌株SC8属于曲霉属(Aspergillus)。相关性分析表明,所筛选菌株在纤维素透明圈直径的大小与CMCase、FPA酶活性成极显著正相关(p0.01)。     

纤维素酶的滤纸酶活和CMC酶活的测定

采用3，5-二硝基水杨酸（DNS）为显色剂、滤纸或CMC为底物，测定纤维素酶的滤纸酶活（FPA）和CMC酶活（CMCA）。分析确定了酶活测定用波长为530nm，参比溶液应为失活酶、底物和DNS等共热的反应物，比较了两种底物的酶活测定方法，结果表明：纤维素酶的CMC酶活比滤纸酶活高，酶对水溶性底物有较高的活力，吸附对酶的活性部位与纤维素分子链段的结合及催化均有很大影响。     

巴里坤草原西伯利亚蝗虫肠道内高产纤维素酶菌株筛选

从采集到的新疆巴里坤草原西伯利亚蝗虫活体标本肠道内分离筛选高产纤维素酶细菌菌株并对其进行初步鉴定。采用常规方法分离肠道菌；利用羧甲基纤维素钠刚果红（CMC-Na）改良培养基初筛分解纤维素菌株，选取透明水解圈较大的菌株测其纤维素酶活力进行复筛；利用VITEK-32生化鉴定仪（法国梅里埃公司）对复筛菌进行鉴定。实验结果表明以羧甲基纤维素钠刚果红（CMC-Na）培养基作为初筛培养基效果较好，初筛到30株菌，选取水解圈较大的10株菌进行复筛，复筛得到4株产纤维素酶活性较高的菌株。经初步鉴定其中一株菌可能是干燥棒杆菌；另一株菌可能是耳葡萄球菌，两株菌未鉴定出。     

产纤维素酶菌株产酶条件的研究

主要研究了绿色木霉固态发酵培养基的酯比、接种量、氮源、培养时间和培养温度等条件，通过测定其所产纤维素本科的CMC和FPA酶活，找出该菌株最佳的产酶条件，即：秸秆粉：麸皮为2：1，固液比为1：3，添加（NH4）2SO4为氮源，添加量为2%，接种量5%，30℃培养84h左右为宜。CMC、FPA酶活分别达到372IU/g和69IU/g。     

产纤维素酶霉菌筛选及发酵条件优化

从江苏淮安清江浦区柳树湾树林获取土样为菌种来源,以羧甲基纤维素钠（carboxymethyl cellulose sodium,CMC-Na）为唯一碳源,通过富集培养、初筛、复筛获得3株产纤维素酶能力较强的菌株（Strain-1、Strain-2、Strain-3,S-1、S-2、S-3）,其中S-2产纤维素酶能力最强,其滤纸酶（filter paper enzyme,FPA）酶活力可达0.21 U/mL。对 S-2菌株进行紫外（ultraviolet,UV）诱变,筛选获得菌株SUV2-1。通过单因素试验和响应面试验设计,对该菌株进行发酵培养基优化,得到该菌株产纤维素酶培养基配方：秸秆粉11.63 g/L,蛋白胨2.33 g/L、吐温-80 2.71 mL/L。利用上述培养基在摇瓶发酵条件下得到的FPA酶活力为0.45 U/mL,与优化前菌株的FPA酶活力相比,提高了51.15%;与诱变前的出发菌株相比,酶活力提高了113.00%。     

垃圾降解过程中纤维素酶测定条件优化

以土壤纤维素酶的测定方法为基础,通过正交试验对垃圾中纤维素酶的测定条件进行优化.结果表明,垃圾降解过程中纤维素酶活性测定最优条件为:垃圾样品风干温度25℃,甲苯2 mL,1%的羧甲基纤维素溶液5 mL,磷酸缓冲液5 mL,培养温度及培养时间分别为37℃和72 h.优化后的测定条件RSD小于2.02%,说明该分析方法结果可靠,精密度高.     

超高压处理对蛹虫草汁纤维素酶活性的影响

为了明确超高压加工技术对纤维素酶活性的影响,分别研究了压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、加压次数和pH值等对蛹虫草汁中纤维素酶的羧甲基纤维素酶活性(CMC)和滤纸酶活(FPA)的影响。结果表明,纤维素酶的最适压力、保压时间、温度、乙醇体积分数、pH值和加压次数分别为:400MPa、10min、35℃、30%,pH4.0~7.0,加压1次,在最适条件下,CMC酶活比处理前分别提高了82.07%、52.41%、87.22%、54.48%、67.52%和66.67%;FPA酶活比处理前分别提高了97.37%、61.4%、69.4%、61.4%、1.31%和33.91%。因此,利用超高压处理能有效提高蛹虫草汁中的纤维素酶活性。     

桑皮微生物脱胶机理的初步研究

通过对桑皮微生物脱胶过程中微生物数量、果胶酶活性、木聚糖酶活性、纤维素酶活性以及桑皮脱胶液的pH值、还原糖、COD的动态变化进行测定,研究微生物数量、脱胶酶活性、脱胶液性质在桑皮微生物脱胶过程中的动态变化规律。结果表明,脱胶微生物的数量在脱胶前期迅速增加,中期基本平稳,后期有所下降;果胶酶活性、木聚糖酶活性、还原糖随着脱胶的进程逐渐上升,60 h后缓慢下降;纤维素酶活性在整个脱胶过程中一直呈上升趋势;pH值在脱胶前期逐渐下降,60 h后趋于稳定;COD随着脱胶的进程不断增加,前期增长迅速,后期增长减缓。     

不同时期PGRs对大豆花荚脱落率及纤维素酶活性的影响

在大田条件下,以合丰50大豆（Glycinemax）为材料,比较研究了在V3、R1和R3期叶面喷施三碘苯甲酸（TIBA）、烯效唑（S3307）和2-N,N-二乙氨基乙基己酸酯（DTA-6）三种植物生长调节剂（Plantgrowthregulators,PGRs）对大豆花荚脱落率纤维素酶活性的影响。结果表明：在V3、R1和R3期叶面喷施植物生长调节剂降低了大豆花荚脱落率;V3期叶喷TIBA、S3307、DTA降低了大豆花荚和脱落花荚纤维素酶活性,但对花的作用效果不显著;R1期PGRs显著降低了大豆花荚及脱落花荚的纤维素酶活性,以DTA调控效果最佳,S3307次之;R3期叶喷PGRs降低了大豆荚及落荚的纤维素酶活性,以TIBA调控效果最佳,S3307次之。综合分析表明,V3、R1和R3叶面喷施植物生长调节剂能够降低大豆花荚脱落率和纤维素酶活性,促进大豆花荚的建成,有利于提高产量,综合调控效果为V3期：S3307〉DTA〉TIBA〉CK;R1期：DTA〉TIBA〉S3307〉CK;R3期：TIBA〉S3307〉DTA〉CK。S3307最佳喷施时期为V3期;DTA最佳喷施时期为R1期;TIBA最佳喷施时期为R3期。     

微波诱变筛选纤维素酶高产菌株

利用透明圈法和刚果红染色法从堆肥中分离出产纤维素酶活力较高的霉菌7株。通过测定其羧甲基纤维素(CMC)酶活力和滤纸(FPA)酶活力,筛选出酶活力较高的5株菌,分别命名为D_2、D_(12)、D_(13)、D_(21)、D_(23),其中菌株D_2产酶能力最强,CMC酶活和FPA酶活分别为252.3U/mL和104.4U/mL。根据D_2菌株的菌落、菌丝、分生孢子梗、孢子的形态等特征,初步鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger)。为了进一步提高菌株D_2的产酶能力,对其进行了微波诱变,得到产酶活力最高的突变株W_(41),其滤纸(FPA)酶活达到128.7U/mL,比D_2菌株提高了23.3%。经连续传代,其性能稳定。     

N~+离子注入-紫外复合诱变选育纤维素酶高产菌株

对产纤维素酶菌株Rhizopus sp.TY1原生质体进行N+离子注入-紫外复合诱变,以期获得高产菌株。以原生质体形成率和再生率为指标,确定最佳酶解时间3h;以致死率和正突变率为指标,确定最佳N+离子注入剂量为2.0×1015ions/cm2、最佳紫外照射时间为90s。实验筛选得到一株高产菌株Rhizopus sp.TY1.2,液态发酵终点时滤纸酶活力(FPA)和羧甲基纤维素酶活力(CMC)分别达到5.1、20.9U/mL,与出发菌株相比,FPA和CMC分别提高了75.9%和175.0%。传代实验结果显示Rhizopus sp.TY1.2产纤维素酶性能稳定,该结果表明N+离子注入-紫外复合诱变所产生的变异是可遗传的变异。     

纤维素酶耐高温高产菌株的选育

该文以绿色木霉N0为出发菌株，经紫外线、亚硝基胍诱变处理，采用刚果红透明圈法，在含有制霉菌素浓度为20U的平板上挑取Hc值(透明圈直径与菌落直径之比)比N0大的菌株分别在不同温度下进行固态发酵复筛，得到耐高温(38℃)高酶活菌株110。     

绿色木霉产纤维素酶菌种诱变

该文对绿色木霉进行了硫酸二乙脂(DES)诱变和微波诱变,结果表明,经硫酸二乙脂诱变得到DES8菌株FPA酶活力比出发菌株提高了27.67％,该菌株进行微波诱变得到WB8菌株FPA酶活力比DES8菌株提高了14.88％.与出发菌株相比,WB8菌株FPA酶活力提高了46.67％,CMC酶活力提高了42.37％.遗传稳定性研究表明,该菌株遗传性能稳定.     

一株纤维素降解菌的分离及其应用的初步研究

从牛粪中分离到一株降解纤维素的真菌ZJ(Trichoderma.sp),对其进行了FPA酶活、CMC酶活的测定以及固态发酵试验。结果表明,ZJ的FPA和CMC酶活分别达到2.86U和15.62U。将ZJ进行固态发酵试验,发酵4d,产物中粗蛋白含量由发酵前的4.3%增加到22.3%,粗纤维含量由发酵前的32.5%减少到21.4%。     

裂褶菌产纤维素酶条件的研究

对一株裂褶菌(Schizorhyllum commune ATCC38548)进行液态发酵生产纤维素酶。通过单因素试验考察发酵时间、碳源、碳源质量浓度和接种量等因素对菌株产酶的影响,用二硝基水杨酸法(DNS法)对羧甲基纤维素酶(CMC)、滤纸酶(FPA)和微晶纤维素酶(AVI)进行酶活测定。结果表明:3种酶的分泌高峰不一致,但在第6天时纤维素酶总酶活达到最高。滤纸是诱导裂褶菌产纤维素酶的良好碳源,且质量浓度为20g/L时产酶效果最佳;接种量为5mL时,总酶活相对最高。不同的培养条件对裂褶菌产CMC、FPA和AVI的影响各异。     

马铃薯渣高效降解菌的紫外诱变选育及发酵试验

以选育马铃薯渣高效降解菌为目的,对康宁木霉进行紫外诱变,以致死率在80%~90%之间的菌株进行初筛,通过羧甲基纤维素钠刚果红筛选平板复筛,选育出两株具有较高酶活的菌株,并命名为P12、P13。通过诱变,完全培养基中P12的纤维素酶活(CMCA)及滤纸酶活(FPA)分别提高了1.45倍、1.738倍,P13的羧甲基纤维素酶活(CMCA)及滤纸酶活(FPA)分别提高了1.4倍和1.667倍。并通过发酵试验,发酵培养基中CMC酶活分别是初始菌株的1.72倍和1.84倍。P12和P13具有良好的降解马铃薯渣的能力。     

纤维素酶酶活力测定方法的校正

探讨了测定条件对纤维素酶酶活力测定的影响．研究表明,测定条件对测定结果影响较大,因此进行纤维素酶酶活力测定时,必须对测定条件作出规定．纤维素酶是一种复合酶,底物纤维素不溶于水,底物的不饱和程度对纤维素酶酶活力测定的影响较大．底物的不饱和程度越高,所测得酶活力就越低．利用酶液稀释率、蛋白质浓度和酶活力之间的关系建立一校正方程,得出一种纤维素酶酶活力测定的校正方法．