产胞外多糖菌的鉴定及多糖性质研究

从华南农业大学杀虫植物园土壤中筛选出一株胞外多糖高产菌株PS04,根据形态学、生理生化特征以及16SrD-NA核酸序列分析结果表明,该菌属于多粘类芽孢杆菌。采用察氏培养基,pH 6.0,于37℃摇瓶培养48h,多糖产量为13.3g/L。对其多糖性质研究表明,该多糖的性质与黄原胶类似,具有低浓度下高黏性、假塑性、耐盐性,同时对热及酸碱有较好的稳定性。     

一株产胞外多糖的大豆内生菌SE01的分离鉴定及生物学特性

微生物胞外多糖（Exopolysaccharide,EPS）是一种重要的生物资源,近年来内生菌的EPS备受关注。为探索更多产EPS的菌种资源,进一步挖掘大豆内生菌资源,本研究从大豆种子中筛选出EPS产量最高的菌株SE01,并对其进行形态学和分子学鉴定、生物学特性（温度、pH、转速、蔗糖耐受性、NaCl耐受性）以及生理生化研究。实验结果显示,在发酵48 h后,菌株SE01的EPS产量最高为0.63 g/L;菌株SE01菌落为圆形,呈乳白色,边缘光滑,表面有光泽且粘稠;在显微镜下观察革兰氏染色后的菌体呈粉红色的短杆状,为革兰氏阴性菌;生理生化实验和16S rDNA鉴定结果显示,菌株SE01为阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）,并命名为Enterobacter cloacae SE01;Enterobacter cloacae SE01最适生长条件为温度30℃、pH5、转速120 r/min,该菌株对蔗糖耐受高,但对NaCl耐受性较低,增大NaCl浓度能抑制其生长。本研究结果为大豆内生菌源EPS的开发和应用提供数据支持。     

多粘类芽孢杆菌PS04胞外多糖分子结构研究

采用丙烯葡聚糖凝胶S-200 HR对PS04多糖进行过滤层析,得到单一组分峰,且通过凝胶渗透色谱法分析测定,可知该多糖重均分子量为4009ku,峰位分子量为3174ku,分布宽度指数为1.348;结合红外光谱、高效液相色谱及核磁共振分析,确定该多糖由果糖与葡萄糖以7∶1的比例组成,在多糖结构中,果糖残基以呋喃环构型存在,且以β-2,6、β-1,2键连接,因PS04多糖与果聚糖最为接近,可初步判断该多糖是一种果聚糖。      

多粘类芽孢杆菌PS04胞外多糖分子结构研究

采用丙烯葡聚糖凝胶S-200 HR对PS04多糖进行过滤层析,得到单一组分峰,且通过凝胶渗透色谱法分析测定,可知该多糖重均分子量为4009ku,峰位分子量为3174ku,分布宽度指数为1.348;结合红外光谱、高效液相色谱及核磁共振分析,确定该多糖由果糖与葡萄糖以7∶1的比例组成,在多糖结构中,果糖残基以呋喃环构型存在,且以β-2,6、β-1,2键连接,因PS04多糖与果聚糖最为接近,可初步判断该多糖是一种果聚糖。     

一株产多糖芽孢杆菌的筛选与鉴定

从来源于面酱、燕麦、康乃馨等食品、天然物质的132株芽孢杆菌中,以胞外多糖产量为指标,筛选出一株来源于康乃馨的多糖高产菌株LPL061。采用LB培养基,发酵温度37℃,转速150r／min,发酵时间24h,多糖产量为1．751g／L。通过形态学、牛珲牛化鉴定、16SrDNA序列同源性分析和特异性基因序yrJPCR,鉴定目标菌株为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens LPL061）。     

一株高产胞外多糖乳酸菌的分离鉴定及其产胞外多糖的研究

该研究从自然发酵剁辣椒中分离筛选一株高产胞外多糖的乳酸菌,经形态观察、生理生化试验及分子生物学对其进行鉴定,并探索菌株产胞外多糖的最佳碳源和最佳培养时间。结果表明,筛选并鉴定得到一株高产胞外多糖的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）Y-20。菌株Y-20产胞外多糖的最佳碳源为麦芽糖,且在MRS培养基中培养16 h时,OD600 nm值达到最大（3.62）,胞外多糖产量达到最高,为242.95 mg/L。     

一株产胞外多糖枯草芽孢杆菌发酵条件的优化

多糖是广泛存在于动物、植物、微生物中的生物高分子聚合物,因其具有多种多样的生物活性及功能,并且安全无毒,近年来成为研究与开发的热点。本文对实验室保藏的一株产胞外多糖枯草芽孢杆菌进行了初步研究。通过单因素试验及正交试验得到枯草芽孢杆菌产胞外多糖(Exopolysaccharide)的最优发酵条件。结果表明:发酵温度为37℃,摇瓶培养转速为160r/min,接种量为3%,发酵时间为36h,在优化后的条件下胞外多糖的产量最大可达到4.135g/L,产量提高了2.87%。     

产胞外多糖罗汉果内生菌的筛选及其发酵条件优化

该研究利用α-萘酚-硫酸法和苯酚-硫酸法从罗汉果中筛选产胞外多糖的内生菌株,采用形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,并采用单因素和正交试验对其产胞外多糖的发酵条件进行优化。结果表明,筛选到一株产胞外多糖的罗汉果内生菌株,编号为LHG-3,并被鉴定为韦德曼尼芽孢杆菌（Bacillus wiedmannii）。菌株LHG-3产胞外多糖的最佳培养基为超级肉汤（TB）培养基,在此基础上,经优化得出最优发酵条件为蔗糖2.5%、尿素1.2%、氯化钙0.4%、pH值7.0、接种量8%,在30 ℃条件下培养42 h后,胞外多糖产量达到（1.59±0.03）mg/mL,是优化前的1.9倍。     

多黏类芽孢杆菌PS04产胞外多糖发酵条件优化

多黏类芽孢杆菌PS04所产胞外多糖,其性质在很多方面优于黄原胶,对其发酵条件进行研究,单因素实验结果表明,当碳源为蔗糖,氮源为NH4NO3,温度为37℃,初始pH为6.0,接种量为4%,装液系数为0.4有利于多糖的合成;进一步对影响多糖发酵的3个主要因素采用响应面设计进行优化,得到多糖发酵的最佳工艺条件为:蔗糖浓度154.44g/L、NH4NO3浓度1.06g/L、初始pH值8.22,在此条件下发酵48h,多糖产量可达到60.04g/L。     

沙漠生物结皮高产胞外多糖菌株的筛选与鉴定

采用传统的分离纯化方法从沙漠生物结皮中分离到27株产胞外多糖菌株,并通过苯酚-硫酸法从中复筛,筛选到一株产多糖量为7445.80mg/L的菌株XJ-27。根据菌株的形态学特征、生理生化鉴定方法初步鉴定为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis);通过16S rDNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定,PCR扩增得到1452bp的序列,PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过MEGA4.0软件绘制系统发育树,结果进一步确认了该菌的地位,XJ-27在细菌系统发育分类学上也归属为苏云金芽孢杆菌。     

一株产纳豆激酶菌株的分离筛选及鉴定

对能产生纳豆激酶的菌群进行了筛选,分离得到了1株具有较高纤溶活性的菌株N391,其纳豆激酶相当于1722.4U/mL尿激酶的酶活。利用细菌16S rDNA通用引物对其16S rRNA进行PCR扩增,得到1511bp的片段,该PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过DNA MAN和MAGE3.1软件绘制系统发育树,结果表明,菌株N391的16S rRNA序列(DQ906100)与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列的同源性在99%以上,在系统发育树中,菌株N391与Bacillus subtilis在同一分支,且遗传距离最短。结合常规的形态、生理生化鉴定,N391的形态及大部分生理生化特征与Bacillus subtilis极为相似,表明菌株N391属于Bacillus subtilis的1个菌株,由此初步确定该菌在微生物系统发育学上的地位。     

一株他克莫司产生菌的筛选及鉴定

添加75μg/mLK2Cr2O7和2μg/mL青霉素对土样进行预处理,采用抑菌圈法初筛得到71株能抑制白色假丝酵母生长的菌株,高效液相色谱法检测代谢产物复筛,获得一株他克莫司产生菌株。对菌株形态学特征、培养特征、生理生化特征、细胞化学组分和16SrDNA序列进行分析。结果表明:NJYH2618为革兰氏阳性菌,生长温度15～38℃,最适生长温度28℃,生长pH6.5～8.5,最适pH7.0,能利用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、木糖、果糖、乳糖、鼠李糖等常见碳源。细胞水解产物成分和16SrDNA序列分析表明,此菌株属链霉菌属,命名为Streptomyces sp.NJYH2618。     

产耐热普鲁兰酶菌株的分离、筛选与鉴定

从某火山口的土壤样品中分离筛选得到了一株产耐热普鲁兰酶菌株T-10,酶活力为1.22 U/m L。经形态特征观察、生理生化特征实验以及16S r DNA序列同源性分析,确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。酶学性质研究表明:该普鲁兰酶的最适温度是60℃,在70℃保温4 h后活力残留60%以上;最适p H值为6.0,p H 3.0~8.0在室温保存4 h后相对酶活力大约为70%。目前,鲜有发现产耐热普鲁兰酶的菌株为解淀粉芽孢杆菌,其具备良好的应用前景。     

β-甘露聚糖酶产生菌HDYM-04的分离鉴定及产酶条件优化

从实验室温水沤麻液中分离并筛选到了一株产β-甘露聚糖酶的细菌HDYM-04,经生理生化试验及16S rDNA序列分析鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。研究了HDYM-04菌株72h连续发酵过程中产酶及生长的动态变化,通过单因素及序贯正交试验优化得到其摇瓶发酵产酶的最佳培养基组分及条件：碳源60g/L魔芋粉,氮源30g/L蛋白胨,MgSO4•7H2O 0.2g/L,K2HPO4 5g/L,初始pH 8.0,装液量100ml/250ml三角瓶,接种量2%,37℃振荡培养48h。在研究条件下发酵液酶活力4890U/ml,比优化前提高了3.2倍。     

高产环糊精葡萄糖基转移酶的枯草芽孢杆菌选育、产酶与酶学特性

选育了一株高产环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的芽孢杆菌Sx菌株,经16S rRNA测序分析,结合菌体及菌落的形态特征,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).对其产酶条件与酶学特性进行了研究.结果表明,以l g/dL玉米淀粉和2 g/dL豆粕粉为碳氮源,pH 6.5,30℃,220 r/min,60 h的条件下,菌株所产CGTase酶活性可达5 596 U/mL;该酶在30～50℃,pH 5.5～9.0下保持稳定,在50℃,180 r/rain,pH 6.5,CGTase酶活力为1 107 U/mL的条件下对20 mg/ml,甜菊甙转化48 h,甜菊甙溶液中的昂莱鲍迪甙与甜菊甙的比值(RA/SS)从转化前的0.45上升到0.53.     

一株好氧反硝化细菌的分离与鉴定

为研究活性污泥中的反硝化细菌，从实验室驯化培养的活性污泥反应器中，分离获得1株反硝化细菌P7，进行了菌株形态观察及生理生化测定，并在此基础上，经PCR扩增后测定该菌株的16SrRNA基因序列，由16SrRNA基因序列比较可知，菌株P7与睾丸酮假单胞菌（Comamonas testosteroni）和稻草假单胞菌（Pseudomonas straminea）亲缘关系最为接近，16SrRNA基因相似性达到99．65％。可初步判定其为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）。结合生理生化实验结果，综合分析后，将其鉴定为丛毛单胞菌属（Comamonas sp．）的睾丸酮假单胞菌（Comamonastes tosteroni）。     

发酵香肠用菌种的分离、筛选及鉴定

为了筛选出适合发酵香肠的优良菌株,从具有良好风味的自然发酵香肠中分离、纯化出优势菌7株,研究其主要发酵特性,并分别对7株优势菌进行了耐盐性试验、耐亚硝酸盐试验和产酸试验.结果表明:S2和S7对食盐和亚硝酸盐具有良好的耐受性,S2对蛋白质和脂肪具有一定的分解作用,S7对蛋白质和脂肪无明显的分解作用,2菌株都具有较好的抑制大肠杆菌、金黄色葡萄糖球菌以及沙门氏菌的效果.依据形态特征和生理生化特征,初步鉴定S2为肉糖葡萄球菌(Staphylococcus carnosus),S7为植物乳杆菌(Lactobacillu splantarum).通过16S rRNA序列分析进一步证实了鉴定结果.鉴于菌株S2和S7良好的生长发酵特性,可以将其作为发酵香肠的优良发酵剂.     

产纤溶酶菌株的分离和鉴定及纤溶酶基因在酿酒酵母中的表达

目的:从豆豉中分离具有强纤溶活性的菌株,实现纤溶酶基因在酿酒酵母中的表达.方法:通过纤维蛋白平板法从豆豉中分离具有强纤溶活性的菌株,结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定该菌株;通过PCR扩增豆豉纤溶酶基因,构建pYES2-DFE重组质粒,转化酿酒酵母H158感受态细胞,经β-半乳糖诱导表达后,用纤雏蛋白平板法分别检测发酵液上清和菌体破碎上清的纤溶酶活性.结果:鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);活性检测结果是酿酒酵母发酵液上清具有纤溶酶活性,而菌体破碎上清没有活性.结论:豆豉纤溶酶基因在酿酒酵母中实现了分泌表达.     

四川泡菜中植物乳杆菌的筛选与鉴定

该研究旨在从四川泡菜中筛选植物乳杆菌,为益生菌筛选提供来源。经MRS琼脂培养基筛选,采用革兰氏染色法,生化鉴定法,结合分子生物学方法,对筛选的菌株进行鉴定。VITEK 2棒状杆菌鉴定卡（CBC）共涉及到41个生化反应,能够鉴定到种属水平,该方法能够很好的筛选植物乳杆菌。经CBC卡鉴定,20个菌株中筛选到12个菌株,可鉴定为植物乳杆菌。这些菌株经16S rRNA PCR扩增测序后,在NCBI网站上进行同源性比对,确定为植物乳杆菌。由邻接法构建的系统进化树可知,该12个菌株与已知植物乳杆菌序列聚为一簇,6号菌株与Lactobacillus plantarum 3356聚为一支,亲缘关系更近;4号、5号、14号、15号、23号和38号菌株与Lactobacillus plantarum NCU116,Lactobacillus plantarum MBEL2169,Lactobacillus plantarum AN7等序列相似性极高,无遗传距离。综合所有的鉴定结果,这12个菌株都被鉴定为植物乳杆菌。CBC鉴定卡是初筛植物乳杆菌较好的方法。