烟草上马铃薯Y病毒的提纯与检测

本文是关于制备马铃薯Ｙ病毒抗血清及ＥＬＩＳＡ检测技术的实验结果。采用垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提纯ＰＶＹ,纯化的ＰＶＹＯＤ２６０／ＯＤ２８０为１．５６,将提纯的病毒制品免疫家兔,制备抗血清,经微量沉淀及环状沉淀试验,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１／２０４８,并对制备的ＰＶＹ—ＩｇＧ作灵敏度及特异性测定。     

基于叶片光谱分析的烟草马铃薯Y病毒病严重度诊断

为利用光谱分析方法实现马铃薯Y病毒(PVY)病的有效监测预警,采用ASD非成像光谱仪获取了感病后不同严重度烟草叶片的光谱数据.分析结果表明,随着马铃薯Y病毒病严重度的增加,叶片光谱反射率在可见光波段(400～700 nm)内呈现逐渐升高的趋势,在近红外波段(700～1300 nm)内呈现逐渐降低的趋势.利用一元线性回归...     

烟草马铃薯Y病毒病流行规律的初步研究

根据1996~2002年有关气象因素的数据,建立了气温、降水量与PVY病情指数的相关方程。选用几种模型对PVY的流行规律进行拟合检验,确定Gompertz模型为短期流行过程的最优拟合方程,并建立了流行速率与有翅蚜量关系的模型。根据田间病情调查的结果,初步得出模拟病害近距离传播的时空动态模型。     

马铃薯Y病毒与介体蚜虫传毒的关系研究进展

对蚜虫的传毒特性、影响传毒效率的因素、传毒机制、蚜虫传播与马铃薯Y病毒病发生流行的关系、蚜虫带毒的检测方法、治蚜与防病的关系等方面的研究进展进行了综述。     

黑龙江烟区烟草马铃薯Y病毒株系的分子鉴定

为明确黑龙江烟区烟草马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)株系种类及其分布状况,采用多重PCR技术及测序手段,对采集黑龙江省烟叶产区的107份疑似PVY样品进行了鉴定分析。结果表明:4个有代表性的PVY分离物HLJ-SH8、HLJ-SC2、HLJ-SC6和HLJ-MDJ4的基因组序列全长分别为9 698、9 702、9 702和9 698 bp,都包含一个由9 186 bp组成的开放读码框(ORF),编码一个由3 061个氨基酸组成的多聚蛋白。系统进化树分析结果表明这4个PVY分离物分别为PVYNTN、PVYN、PVYNW和PVYNTN-NW株系,其中PVYNTN-NW株系是侵染黑龙江烟草的优势株系。      

烟草马铃薯Y病毒综合防治技术试验报告

试验表明，该病来源于烟田邻近的马铃薯地块的感病马铃薯植株。烟田离马铃薯地近发病率高，反之则低。蚜虫是主要传毒媒介。作业不科学也可传毒。综合预防措施：远离马铃薯地，及时消灭蚜虫，科学进行田间作业等；发病初期喷药物“病毒Ａ”控制该病有较好效果     

病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究

  背景  病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）是植物抗病毒侵染的一种自然机制。  方法  以马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）脉坏死株系（PVYN）的外壳蛋白（coat protein, CP）基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV: : CP（OD₆₀₀ 0.4~0.6）喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV: : CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。  结果  ① 与TRV: : 00相比,接种PVY 35 d时,TRV: : CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV: : CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。  结论  研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。      

过氧化物酶活性与烟草对马铃薯Y病毒抗性关系的研究

本文测定了接种马铃薯Y病毒脉坏死株系后烟草抗病转基因品系9608(转PVY-NIb的NC89)和非转基因NC89叶片组织透性和过氧化物酶活性,并对过氧化物酶同工酶带谱进行了分析。结果表明,抗病转基因9608和感病NC89叶片的组织透性与叶片内过氧化物酶活性的变化趋势一致,两者在接种后均呈增高趋势,但感病NC89的增高幅度明显高于抗病转基因9608;接种后,转基因9608和非转基因NC89的过氧化物同工酶均出现了一条新酶带,9608的新酶带在接种后第2d开始出现,而NC89的新酶带则在接种后第6d开始出现,且明显强于9608。      

烟草马铃薯Y病毒病病株的空间分布

为了确定马铃薯Y病毒病(PVY)病株空间的分布型,对田间病害的11次调查结果进行了聚集度指标计算,对不同发病率下丛生指数I、Ca指标、聚块性指标m*/m、扩散系数C等进行了分析,并根据Iwao理论抽样数公式计算出不同病株密度下的理论抽样数.结果表明:病株密度在4.32653株/样方以下(发病率<17.31%)时,PVY田间病株呈聚集分布,病株个体问相互吸引,分布的基本成分为个体群;当病株密度为5.48148-7.96296株/样方(发病率21.93%～31.85%)时,病株呈均匀分布.病株为聚集型分布的,其理论抽样数应大于均匀分布,在田间发病率1.143%～9.061%时,理论抽样数可相应选定2950-425株.     

酶标记羊抗兔间接法检测烟草马铃薯Y病毒的研究

本文是对辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG间接法检测浸染烟草的马铃薯Y病毒(PVY)的报导。试验证明该方法检测烟草植株内的PVY具有特异性,健株对照及非PVY病毒均为阴性,检测烟草植株汁液的稀释度可达1/1000,在我们的测试条件下,第一抗血清浓度1/2000,测试抗血清(酶标记羊抗兔)浓度1/140为好。      

烟草品种对马铃薯Y病毒抗性遗传分析

选用6个对PVY抗性有差异的烟草品种,采用完全双列杂交方法,研究了烟草对PVYN抗性遗传规律。结果发现:烟草PVYN抗性符合加性-显性遗传模型。参试品种间一般配合力(GCA)和特殊配合力(SCA)存在极显著差异,V.SCR的GCA最高,其次是VAM,是对PVYN抗性的高值亲本,K326的GCA最低,其次是NC95,是对PVYN抗性的低值亲本。通过V.SCR×K326和VAM×TN86组合证明了V.SCR和VAM两个亲本的SCA均表现较高,有进一步研究利用的价值。参试品种的显性基因和隐性基因数量不同,V.SCR的抗性和NC95的感病性是由显性基因控制的,TN86的抗性和K326的感病性是由隐性基因控制的,环境对显性基因的表达有较大影响。狭义遗传力较高(h_N2),2003年为81.7%,2004年为74.43%,表明抗性基因可以通过基因累加的方式在后代中表现出来,宜早代选择。      

抗马铃薯Y病毒(PVY)和烟草花叶病毒(TMV)单联弱毒疫苗的研制及防效测定

为防治烟草马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）,筛选PVY和TMV基因组中保守且高效表达siRNA的片段,连接到烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）弱毒侵染性克隆,制备成单联弱毒疫苗,获得TVB-PVYF1、TVB-PVYF2、TVB-PVYF3和TVB-TMVF1、TVB-TMVF2、TVB-TMVF3共6个单联弱毒疫苗。室内筛选后选取保护效果最好的TVB-PVYF2和TVB-TMVF3两个单联弱毒疫苗在山东临沂、潍坊和黑龙江哈尔滨等地进行了田间防效测定,TVB-PVYF2对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草PVY的相对防效分别为66.88%、76.46%和60.71%,TVB-TMVF3对黑龙江哈尔滨、山东临沂和潍坊烟草TMV的相对防效分别为80.74%、87.34%和74.40%。      

TMV、PVY福建分离物分子鉴定及末端区域变异分析

为及时准确地鉴定出病毒病原和追踪了解病毒病流行变异趋势,使用特异性引物对福建烟区病毒烟叶样品进行RT-PCR分析,分别鉴定出病毒病原为TMV和PVY.序列测定结果表明PCR扩增产物为预期的TMV 5'末端和PVY 3'末端序列,大小分别为959和646个核苷酸,均包含末端非编码区和部分病毒功能基因蛋白编码区.将所获得的病毒末端序列与国内外报道的主要病毒分离物的同一区域进行比较,分析结果显示TMV 5'端非编码区保守性极强,不同分离物之间部分126 kDa或183 kDa编码蛋白N端编码区表现出一定程度的变异(突变),PVY外壳蛋白编码区与3'末端非编码区变异数量差异不大,变异(突变)均主要为碱基转换,环境自然选择压力对病毒基因组变异(突变)具有一定的影响.     

接种PVY^N后烟草叶片SOD活性和MDA含量变化研究

对接种马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性及其同工酶谱带和丙二醛含量进行了分析。结果表明,接种ＰＶＹＮ后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性发生明显变化,接种后１４ｄ内其活性值均较对照增高,其中接种后第８ｄ达高峰值,约比对照增加７２．３％,１４ｄ后超氧化物岐化酶活性开始下降,至接种后１６ｄ约低于对照２８．０％。接种后ＳＯＤ同工酶谱带与对照相比差别不大,仅在接种后第８ｄ出现了一条新带。接种后烟草叶片内丙二醛含量逐渐增加。     

黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的分子鉴定

为了揭示贵州省黔南烟区马铃薯Y病毒(PVY)株系分布及分子变异规律,先利用血清学方法初步鉴定PVY株系,再选择19个PVY分离物进行分子鉴定.结果表明,克隆的19个PVY cDNA片段全长均为1074 nts,包含1个801 nts的完整cp基因,编码266个氨基酸.序列比对发现,19个黔南PVY分离物cp基因核苷酸序列相似性为87.0％ ～ 99.9％,与GenBank登录的其他17个PVY株系cp基因序列相似性为86.6％ ～ 99.9％.系统进化树分析表明,黔南烟区19个PVY分离物中,有3个PVY分离物与PVYN株系和PVYNTN亲缘关系较近,而其他16个PVY分离物与PVYNN:O株系的亲缘关系最近.     

烟草抗PVY育种材料的筛选与应用

马铃薯Ｙ病毒对东北烟区烟草生产危害日趋严重。通过病圃发病情况调查和温室接种鉴定,初步筛选出ＣＶ９１、８７４１４、８０２１三份常规抗马铃薯Ｙ病毒材料,其中ＣＶ９１在田间调查和温室接种鉴定中表现为高抗马铃薯Ｙ病毒;转基因抗马铃薯Ｙ病毒材料８５－２、８６－１,８７－２,８９－１、９４－１、９５－１、９８－１温室接种鉴定结果为对ＰＶＹ免疫,利用ＣＶ９１育成了中抗ＰＶＹ的新品系９１１１－２１。     

烟草黄瓜花叶病毒一步法RT-PCR检测试剂盒的研制与初步应用

为快速准确地检测烟草黄瓜花叶病毒(CMV),根据黄瓜花叶病毒基因组序列相对保守区域设计了一对特异性引物,整合了反转录和PCR反应所需酶和缓冲液,通过反应条件的优化,建立了基于一步法RT-PCR检测烟叶感染CMV的方法,在此基础上组装了检测试剂盒.进一步分析了该试剂盒的特异性、稳定性和检测灵敏度.结果表明,该试剂盒具有很强的特异性、良好的重复性和较高的灵敏度(模板RNA浓度最低达到10 ng量级).初步应用结果显示,在多个烟区采集的病叶样品检测结果均与ELISA检测结果一致,能够成功检测出CMV.