利用鲫鱼加工下脚料酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

以鲫鱼加工下脚料为原料,用酶解法制备ACE抑制肽,并以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中筛选出最佳酶解蛋白酶为胃蛋白酶;以单因素试验为基础,应用Box-Benhnken中心组合设计原理和响应面分析法,探讨各自变量及其交互作用对ACE抑制率的影响,通过模拟得到的二次多元式方程预测模型,确定最佳酶解条件为:料液比14.4(mV)、加酶量[E]/[S]=521U/g、酶解时间5.3h。以优化条件制备的酶解产物ACE实际抑制率可达75.79%,与理论预测值76.17%相差不大。     

酶解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽工艺参数优化

采用碱性蛋白酶Alcalase 2.4L对鳙鱼鱼肉蛋白进行水解,制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽。以酶解物ACE抑制率为指标,先进行单因素实验,确定底物浓度([S])、温度、pH、酶用量及水解时间5个因素的最适水平范围,再通过响应面分析法(RSM)对加酶量、温度和水解时间3个酶解工艺参数进行优化。结果表明:Alcalase水解鳙鱼鱼肉蛋白制备ACE抑制肽的最佳酶解条件为:[S]6%、加酶量2.2%、温度57℃,pH9.0及水解时间6.4h,此条件下酶解物ACE抑制率理论值为81.77%,验证实验结果ACE抑制率为81.52%,与理论值相符合。     

酶解法制备榛子粕ACE抑制肽工艺研究

以榛子粕为原料,利用中性蛋白酶酶解制备ACE抑制肽。以酶解产物的ACE抑制率为指标,采用单因素试验分别考察底物质量分数、酶用量、酶解温度、pH和酶解时间的影响。在单因素试验基础上设计响应面Box-Behnken中心组合试验对酶解条件进行优化。结果表明:榛子粕最佳酶解工艺条件为底物质量分数5%、酶用量0.3%、酶解温度40℃、pH7.5、酶解时间1.5h,在此条件下榛子粕酶解产物的ACE抑制率达到91.76%。     

采用控制酶解法从罗非鱼肉中制备血管紧张素转化酶抑制肽

实验以罗非鱼肉为材料,利用Trypsin、Alcalase2.4L、Protamex、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、Flavourzyme和Kojizyme酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽(ACEIP)。以ACE抑制率(Ⅰ值)、氨基酸态氮含量(Cn值)和TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp值)为指标对酶解过程进行分析,说明了酶法水解以及不同酶水解生成产物的特点,指出控制酶解的方法,其中Trypsin、Alcalase2.4L、Protamex对罗非肉控制酶解制备ACEIP的效果较好,酶解产物(稀释20倍)的最大Ⅰ值分别为酶解1hⅠ值91.2%、酶解3hⅠ值90.9%,酶解产物对ACE的抑制率比较高。     

虾头酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽的研究

实验以虾头为材料,利用Trypsin、Alcalase 2.4L、Protamex、Flavourzyme、Kojizyme、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、与虾头蛋白酶复合酶解制备血管紧张素转化酶抑制肽.以ACE抑制率(I值)、氨基酸态氮含量(Cn值)、和TCA可溶性蛋白(短肽)含量(Cp值)为指标对酶解过程进行分析,说明了酶法水解以及不同酶水解生成产物的特点;在此基础上选择控制酶解的方法以达到较高的产量,其中Protamex与虾头蛋白酶复合后效果最好,酶解3h,最大I值达到83.6%(稀释20倍),Cp值于酶解2h达到最大值为6.35mg/mL.     

分步酶解法制备菜籽降血压肽

以菜籽蛋白为原料,用两种蛋白酶将其分步水解制备降血压肽。从4种酶的两两组合中筛选出了最佳酶组合碱性蛋白酶和中性蛋白酶,采用紫外检测法对酶解产物中血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽活性进行测定。对酶解工艺进行优化,在单因素试验的基础上采用Box-Behnken模型响应面设计试验,运用Design-Expert软件处理,建立制备菜籽降血压肽的三元二次回归正交模型。结果确定最佳酶解条件为:碱性蛋白酶和中性蛋白酶为分步水解的酶、底物的质量浓度5.65g/100mL、加酶量6.5%、酶解温度54.9℃,ACE抑制率理论值为50.303%,在此条件下进行验证实验制备出ACE抑制率为50.12%的菜籽降血压肽。     

酶解牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的研究

目的利用酶技术制备酪蛋白源ACE抑制肽.方法以ACE抑制活性为指标,筛选最佳用酶,优化酶解反应条件,并研究酶解过程中水解度和游离氨基酸含量的变化.结果通过对5种蛋白酶的筛选,最终确定AS1.398中性蛋白酶为水解用酶,制备酪蛋白源ACE抑制肽,其最佳反应条件为pH 7、温度45℃、底物质量分数7.5%、酶用量([E]/[S])5%,水解6 h.在酶解过程中,随着时间的延长,水解度略有增加,而游离氨基酸含量大幅度增加.酪蛋白ACE抑制肽的半抑制浓度(IC50值)为0.68mg/mL.结论牛乳酪蛋白用蛋白酶水解可制备高活性的ACE抑制肽,是获得ACE抑制肽的良好来源.     

酶法制备乳源ACE抑制肽

利用酶技术制备乳源ACE抑制肽。以ACE抑制活性为指标,筛选最佳水解酶。优化酶解反应条件,并研究酶解过程中水解度和游离氨基酸含量的变化。通过对4种蛋白酶的筛选,蛋白酶A是制备乳源ACE抑制肽的最佳酶,最佳反应条件为:pH7、温度52℃、底物质量分数4.5%、酶用量3%,水解9.5 h。在酶解过程中,随着时间的延长,水解度略有增加,而游离氨基酸含量大幅度增加。它的半抑制浓度(IC50值)为1.206 3 mg/mL。     

分步酶解法制备黄浆水活性肽

黄浆水是传统豆制品点脑成型过程压榨出的废弃物,富含低聚糖、蛋白质等营养成分。该研究通过比较酶种类及用量、酶解温度、酶解时间对黄浆水蛋白质水解度的影响,采用正交试验优化获得黄浆水短肽最佳分步酶解工艺：（1）酸性蛋白酶加酶量2 000 U/g,pH 4.0,温度55 ℃,水解2 h;（2）中性蛋白酶8 000 U/g,pH 6.0,温度50 ℃,水解6 h。在此条件下进行验证,水解度可达25.95%,血管紧张素转化酶体外抑制活性达92.0%。采用酸性蛋白酶和中性蛋白酶分步酶解黄浆水制备短肽,制备条件温和,水解度高,可为豆制品加工废弃物的高值化利用奠定基础。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

酶解魔芋飞粉蛋白制备ACE抑制肽

目的：用魔芋飞粉制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽,以开发魔芋飞粉资源。方法：以体外ACE抑制率为指标筛选最佳用酶并确定酶解条件。结果：碱性蛋白酶为酶解魔芋飞粉用酶,其最佳酶解条件为：底物浓度2.25%(净蛋白),酶用量3500U/g 底物蛋白,温度50℃,pH8.0,酶解时间270min,此时酶解液的ACE 抑制率为95.69%,多肽得率为12.70%;制得的魔芋多肽为淡黄色粉末,蛋白质含量为62.30%,多肽含量为52.67%,其抑制ACE 活性的IC50 为0.80mg/mL。结论：魔芋飞粉经蛋白酶酶解可制备高活性的ACE 抑制肽。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

双孢菇边角料制备ACE抑制肽

以工厂生产的双孢菇菇柄、异形菇等边角料为原料,利用碱溶酸沉法提取双孢菇蛋白,超声波处理后,分别选用胰蛋白酶、碱性蛋白酶和复合蛋白酶对其进行酶解,通过测定蛋白水解度和ACE抑制率确定最佳的蛋白酶种类。采用响应面设计方法,优化蛋白酶酶解工艺条件,以期获得更高ACE抑制率的活性肽。结果表明,碱性蛋白酶酶解双孢菇蛋白产生的ACE抑制率最大,其最优酶解工艺参数为:碱性蛋白酶添加量6.25 mg/100 m L,酶解温度40.47℃,酶解时间92.97 min,酶解pH值8.04,此时ACE抑制率可达43.75%,在该条件下的验证试验测得水解液的ACE抑制率为43.4%,与预测值相近。经真空冷冻干燥,制得具有抑制ACE活性的肽样品,得率为24.36 mg/g,工业化生产前景良好,可为双孢菇产业边角料高值利用提供新途径。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺优化及其抑制机制

为优化酶解法制备绵羊乳酪蛋白ACE抑制肽的工艺条件以及筛选和鉴定一种新的ACE抑制肽,选用5种蛋白酶水解酪蛋白,以水解度、分子质量分布和ACE抑制率为指标筛选最适蛋白酶,采用单因素和响应面试验优化工艺,采用三合一质谱仪(Orbitrap Fusion Lumos Tribrid MS)方法鉴定分子质量小于3 ku组分的氨基酸序列,筛选潜在ACE抑制肽,进行人工合成,测定其IC50值。采用Linewaver-Burk作图确定酶抑制动力学,结合分子对接解析肽段的抑制机制。结果表明:碱性蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件为pH 6、底物含量8%、酶添加量4%、温度55 ℃、水解时间90 min,此时酪蛋白水解液ACE抑制率为99.1%。验证具有ACE抑制活性的肽段10条,筛选出一条新颖的降血压肽——LFRQFY(源自αs1-酪蛋白),其ACE抑制活性的IC50为(7.9±1.7)μmol/L,酶抑制动力学为混合抑制模式。分子对接结果表明:LFRQFY能与ACE的氨基酸残基Ala354(活性口袋S1)、His353(活性口袋S2)形成氢键,具有显著的体外降血压活性。     

血管紧张素转换酶抑制肽RLSFNP脂质体的制备工艺优化

本实验以脂质体作为包埋载体,研究血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽Arg-Leu-Ser-Phe-Asn-Pro(RLSFNP)脂质体的制备工艺。以包封率为考察指标,采用单因素试验和响应面试验优化RLSFNP脂质体的制备工艺。得出最优制备条件为:大豆卵磷脂用量120.0 mg、胆固醇用量24.6 mg、RLSFNP用量15.3 mg、乙醚用量15.0 m L、磷酸盐缓冲液(p H 7.4)用量5.8 m L、探头超声时间5.2 min。在此条件下制备的脂质体平均粒径在168 nm左右,电位为-31.2 m V,实际包封率为(67.5±0.8)%,由脂质体包埋后的RLSFNP具有一定的缓释效果。     

大鲵肌肉ACE抑制肽的制备及其稳定性

以大鲵肌肉为原料,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率为评价指标,通过单因素试验筛选得到3种效果较佳的单酶。在此基础上,借助混料试验,对三酶复合的配比进行优化。当风味蛋白酶、中性蛋白酶与菠萝蛋白酶质量比为0.54︰0.23︰0.23时,产物具有最高的ACE抑制率,IC50值为0.55 mg/mL。探究金属离子和体外模拟胃肠消化道酶系对对产物ACE抑制率稳定性的影响,结果显示,Zn^2+、Al^3+、Fe^2+离子能显著降低大鲵多肽的ACE抑制率,胃蛋白酶系对大鲵多肽的ACE抑制率影响较小,但胰蛋白酶系能显著降低ACE抑制率。     

响应面优化米曲霉固态发酵豆粕制备A C E抑制肽条件

以多肽得率和血管紧张素转化酶(Angiotensin I-converting enzyme,ACE)抑制率为指标,考察发酵时间、发酵温度、接种量和含水量单因素对米曲霉固态发酵豆粕制备ACE抑制肽的影响,确定发酵时间为60 h。在此基础上通过响应面分析法进行优化,得到最优发酵条件为:发酵温度30℃,接种量7%,含水量56%,该条件下ACE抑制率达到56.03%。