碱蓬多糖SSP1-1的分离纯化及其抗肿瘤活性

目的:本实验对水溶性碱蓬(Suaeda salsa)多糖SSP1-1进行分离纯化并对其抗肿瘤活性进行初步研究。方法:采用水提醇沉法提取碱蓬粗多糖,通过DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱分离纯化碱蓬粗多糖,得到单一碱蓬多糖SSP1-1,利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)对其纯度及分子量进行分析,利用MTT、Hoechst 33342染色,Western blot方法对碱蓬多糖SSP1-1的抗肿瘤活性进行研究。结果:SSP1-1分子量为60.32 kDa;SSP1-1具有时间-剂量依赖性抑制肿瘤细胞增殖作用,当SSP1-1浓度为500 μg/mL时,HepG2细胞在24和48 h的细胞活力分别为52.8%和50.2%,Hoechst 33342染色实验观察到SSP1-1可引起HepG2细胞核出现典型的细胞凋亡特征;Western blot证明SSP1-1可以降低Bcl-2的蛋白表达,提高Bax和Caspase-3的蛋白表达,各组蛋白含量与对照组相比均具有显著性(P<0.05)。结论:SSP1-1为均一组分多糖,并对肿瘤细胞具有显著的抑制作用,为进一步开发利用碱蓬多糖奠定了基础。     

罗非鱼头蛋白质的提取及性质研究

以罗非鱼头为原料,采用加热浸提、酶法水解、酸/碱溶解-等电点沉淀法提取鱼蛋白,冷冻干燥得到4种鱼蛋白粉,分别记为热提鱼蛋白(HFP)、酶解鱼蛋白(EFP)、酸溶鱼蛋白(AFP)和碱溶鱼蛋白(ALFP),并探讨了4种鱼蛋白的营养特性、溶解性和乳化性。结果表明:ALFP和AFP的蛋白含量分别为89.97%和85.87%,必需氨基酸占总氨基酸的比例达到49.72%和48.63%,而脂肪和灰分含量以及白度值均低于HFP和EFP,且差异显著(P<0.05)。溶解性和乳化性的研究显示,EFP和HFP在pH 2.0～10.0内溶解度均高于93%,但体系的乳化活性和稳定性较差;而AFP和ALFP的溶解度随pH值的变化非常明显,在pH 4.0～6.0内,体系的溶解性和乳化性极差,而在pH值低于4.0或高于6.0时,溶解度大大增强,乳化活性和乳化稳定性随之提高,且乳化活性和稳定性明显高于HFP和EFP。酸/碱溶解-等电点沉淀法可用于制备营养价值高,乳化特性相对较好的鱼分离蛋白。     

罗非鱼肠道蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

目的:以罗非鱼加工下脚料肠道为原料,分离提取其中的蛋白酶,并对其部分性质进行研究,旨在提供一种简便的食品级蛋白酶制备方法.方法:用茶多酚络合沉淀,Sephadex G-50分离纯化蛋白酶,SDS-PAGE检测分离效果及相对分子质量;以酪蛋白溶液为底物,采用Folin-酚法测定蛋白酶活力.结果:经茶多酚络合沉淀,得到一种复合蛋白酶,命名为TP-肠道蛋白酶;经Sephadex G-50凝胶层析除去茶多酚,得到游离肠道蛋白酶.TP-肠道蛋白酶的最适温度50℃,pH7.2～9.6,米氏常数Km=1.125×103mg/L;游离肠道蛋白酶的最适温度50℃,pH7.2～10.0,米氏常数Km=8.5×102mg/L.结论:TP-肠道蛋白酶和游离肠道蛋白酶均为复合蛋白酶,有望开发成食品级蛋白酶制剂.     

罗非鱼头磷脂对RANKL诱导RAW264.7细胞分化的抑制作用及其对破骨细胞凋亡作用的机理

目的:探讨罗非鱼头磷脂(tilapia head phospholipid,TH-PL)对破骨细胞生物活性的影响。方法:首先采用溶剂法提取罗非鱼头总脂,通过硅胶柱层析分离得到TH-PL,采用薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)、傅里叶红外变换光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)和气相色谱分析其性质与部分结构。其次利用核因子κB受体活化因子受体的配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞,建立破骨细胞模型,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色法评价TH-PL对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,荧光染色法、流式细胞仪测定法和蛋白免疫印迹法检测TH-PL对破骨细胞凋亡的影响。结果:制备的TH-PL占罗非鱼头干质量的1.52%,TLC和FTIR法确定所得样品为TH-PL,且含有丰富的不饱和脂肪酸,约占38%。TR...     

罗非鱼骨骼肌中胶原蛋白分解酶的提取纯化及活性

新鲜罗非鱼肉匀浆离心后经硫酸铵分级沉淀、SephadexG-100凝胶柱层析、DEAESephadexA-50阴离子交换后,得到经SDS-PAGE证实的纯品.650g罗非鱼骨骼肌可制备总活力14835U,比活力526.4U/mg的胶原蛋白分解酶,纯化倍数为111.53倍.     

罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分(肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白)进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析.结果表明:罗非鱼肌浆蛋白酶解物(tilapia sarcoplasmi...     

裙带菜多糖的分离纯化及抗肿瘤活性

目的:对自提精制裙带菜粗多糖(UPPS)进行分离纯化及体外抗肿瘤活性研究。方法:实验首先对裙带菜粗多糖进行Sevage法除蛋白、H2O2法脱色素、透析法除去小分子;然后运用DEAE-52、Sephadex G-200柱层析对裙带菜多糖半纯品进一步纯化;最后采用MTT法测定了UPPS-B1对肿瘤细胞SGC-7901和HepG-2生长、增殖的抑制作用。结果:裙带菜粗多糖通过脱蛋白、脱色、透析后运用DEAE-52、Sephadex G-200柱层析进行分离纯化,得到一个组分UPPS-B1。其对SGC-7901和HepG-2均具有一定的抑制作用并具有剂量依赖性。结论:UPPS-B1是均一度较好的多糖组分,具有抗肿瘤活性。     

代代花总黄酮对3T3-L1细胞增殖活性的影响

本文研究了代代花总黄酮抑制3T3-L1细胞增殖及诱导其凋亡的作用。不同浓度的代代花总黄酮作用于3T3-L1细胞24 h之后,采用MTT法检测代代花总黄酮对细胞增殖的抑制作用;使用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;Annexin V-EGFP/PI标记检测细胞凋亡率;PI标记法检测了代代花总黄酮对细胞周期的影响;活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平;荧光定量PCR检测了凋亡相关基因的m RNA水平表达。结果表明,高浓度(300μg/m L和400μg/m L)的代代花总黄酮可显著抑制3T3-L1细胞增殖,细胞的抑制率分别为38%和63%,且细胞形态发生了明显变化,并显著升高了细胞内ROS浓度。细胞凋亡实验结果显示,代代花总黄酮可诱导3T3-L1细胞早期凋亡和晚期凋亡,100μg/m L、200μg/m L和300μg/m L代代花总黄酮处理组的细胞早期凋亡率分别为4.6%、15.7%和22.5%;晚期凋亡率分别为14.4%、8.3%和32.2%。而细胞周期实验则表明,处理后3T3-L1细胞G0/G1期细胞数比例从58.9%下降到51.4%,而相应的S期细胞数比例呈小幅度增加,G2/M期细胞数比例变化不明显。凋亡相关基因p21及p53的m RNA表达明显升高及促凋亡基因bax与抗凋亡基因bcl-2比例的升高使3T3-L1进入细胞凋亡程序。     

pH值对碱溶法罗非鱼鱼糜制备及凝胶性质的影响

在pH0.5~12.5的范围内,采用碱溶法制备了罗非鱼鱼糜(TS)。研究表明,随着pH值的升高,TS蛋白回收率得到显著提高,但在pH值由11.5升至12.5时,得率仅提高11.56%,而碱液耗费却增加了77.65%;pH值的升高使溶解蛋白的ATP酶活性急剧降低(51.80%→0%),而表观疏水性则表现出增强趋势,表明pH值的升高促进了肌球蛋白的构象展开。电泳结果显示,pH值升高并未使等电点处可溶性蛋白及TS中蛋白组分发生明显变化。pH值的升高使TS白度先升高(75.40→80.50),之后下降(→76.20);TS凝胶破断力也表现出先升高后下降的趋势(290.00→335.20→278.80g),表明极端的碱性条件(pH12.0)会对TS凝胶品质产生负面影响。TS凝胶的电泳结果表明,不同pH值条件下提取的TS所制备的凝胶蛋白组分之间没有明显差别,并且TS凝胶形成过程中没有显著的肌球蛋白交链发生,意味着TS中内源谷氨酰胺转胺酶(TG酶)活性相对于传统鱼糜变得很低,这可能是由于在等电点处离心时TG酶与TS发生了分离。     

乳菇菌素D体外抗肿瘤活性及对细胞周期和凋亡的影响

目的：研究来源于绒白乳菇菌的新型倍半萜类化合物——乳菇菌素D的抗肿瘤活性及对细胞周期和细胞凋 亡的影响。方法：运用噻唑蓝法检测乳菇菌素D对A549、HCT-8、Bel-7402、SMMC7721、HeLa细胞增殖的抑制作 用并计算半数抑制率（half maximal inhibitory concentration,IC50）,并以顺铂作为阳性对照;选择对该化合物敏感 的A549细胞株,观察其作用后细胞的形态学改变、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果：乳菇菌素D能够有效抑制 A549、Bel-7402、SMMC7721和HeLa细胞的增殖,作用72 h后的IC50分别为2.46、19.09、18.21、17.05 μg/mL;乳菇 菌素D可引起A549细胞显著的形态学改变,出现凋亡小体;诱导A549细胞凋亡（100 μg/mL作用72 h 时的凋亡率为 32.14%）、使细胞阻滞于S期。结论：该化合物能够抑制多种组织来源的肿瘤细胞增殖,其中A549细胞最敏感;其 作用机制是通过干扰细胞增殖周期而诱导肿瘤细胞凋亡。本实验为乳菇菌素D的开发提供实验依据。     

藻胆蛋白提取纯化及生理活性研究进展

藻胆蛋白是一类结构相似的色素蛋白,它们是由藻胆色素与相应的脱辅基蛋白中保守性半胱氨酸残基的巯基以硫醚键共价结合而成,藻胆蛋白由于其荧光特性广泛应用在医药行业。本文综述藻胆蛋白的种类和结构,藻胆蛋白的提取过程尤其是细胞破碎、纯化的方法,并详细比较其优缺点;阐述藻胆蛋白的抗氧化、抗炎及抗癌作用,并对其部分作用机制进行综述。     

茼蒿叶中总黄酮的提取纯化及抗氧化活性分析

采用二次回归正交旋转组合设计法优化茼蒿叶总黄酮的提取条件,并利用制备色谱对粗黄酮进行纯化,最后通过不同的方法从4 个方面评价总黄酮的抗氧化活性。结果表明,茼蒿叶总黄酮的最佳提取工艺条件为：微波温度73 ℃、乙醇体积分数68%、液料比30∶1（mL/g）、微波功率400 W和微波时间8 min。在此条件下实际总黄酮提取率为0.554%。优化后的总黄酮提取物在总抗氧化活性、羟自由基和DPPH自由基的清除作用,以及对卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制作用方面表现出较高的活性。     

虾头类肝素的制备、理化性质及抗凝血活性评价

本研究以虾头为原料,通过酶解、阴离子交换树脂、醇沉的方法提取并分离纯化了虾头中的类肝素;采用乙酸纤维素薄膜电泳初步鉴定了纯化后类肝素的种类,通过紫外吸收光谱、高效凝胶渗透色谱分析其纯度和分子质量,通过傅里叶变换红外光谱分析其官能团结构,采用柱前衍生化高效液相色谱分析其单糖组成;并通过体外凝血实验研究了其抗凝血活性。结果表明：组分F1.1和F1.5的类肝素质量分数均达83%,纯度较高,分子质量分别为7.8、19.8 kDa;F1.1的电泳迁移率与硫酸软骨素相似,F1.5接近肝素标准品的迁移速率;F1.1和F1.5均具有羧基、乙酰氨基、硫酸基团等吸收峰;单糖组成为不同比例的葡萄糖醛酸、艾杜糖醛酸、N-乙酰半乳糖胺、半乳糖和岩藻糖;F1.1和F1.5通过内源凝血途径和共同凝血途径发挥抗凝血作用,其中F1.5的抗凝血活性优于F1.1,可以作为潜在的抗凝血治疗剂。     

牡蛎活性肽体外诱导HeLa细胞凋亡及其作用机制

采用复合酶法水解制备牡蛎活性肽,并运用Sephadex G-25柱层析法对酶解液中的肽类进行分离纯化与鉴定;以磺基罗丹明B(SRB)比色法,台盼蓝计数法,Hochest/PI双荧光染色法和DNA Ladder等检测牡蛎活性肽诱导HeLa细胞凋亡的方式,并采用流式细胞术和实时定量PCR分析牡蛎抗活性肽诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。经分离纯化得到牡蛎活性肽(bioactive peptide of oyster,BPO),并测得其分子质量为751D;BPO能有效抑制HeLa细胞增殖,并阻止HeLa细胞G1期向S期的转换,促使凋亡基因表达上调。BPO的作用机制与诱导凋亡基因表达上调和细胞周期阻滞有关。     

小麦粉中植物酯酶提取、纯化及应用研究

从小麦粉中提取植物酯酶,用70%饱和硫酸铵对植物酯酶进行纯化,酶催化反应温度在45℃、pH4.5~5.5时酶活性最大,酶催化反应动力学显示10m in内反应呈线性关系。利用有机磷农药能抑制植物酯酶酶促反应的机理,建立了快速测定粮食中有机磷农药残留的方法。测定有机磷农药残留反应体系最大吸收峰是在480nm之间,最适乙酸-β-萘酯用量为1.0mL;在农药浓度在0.1~1.0mg/kg之间时,所到之处得到的吸光值与农药浓度呈线性相关;在青菜汁、茶叶汁和大米提取液回收率分别为89%、84%和93%。     

桑叶总黄酮提取纯化工艺及抗氧化性研究

本文通过单因素实验和响应面分析优化得到超声辅助提取桑叶总黄酮最佳工艺,并通过过氧化氢清除试验测定了桑叶总黄酮的抗氧化活性。结果表明,最佳提取工艺参数是:乙醇浓度80%,料液比1:30 g/mL,超声时间75 min,超声温度40 ℃,得率达2.7%。桑叶总黄酮的含量经过AB-8大孔树脂处理后由12.3%提高至33.8%。抗氧化实验结果表明,桑叶总黄酮的抗氧化能力大于抗坏血酸,是一种潜在的天然抗氧化剂。