龙牙百合腐败菌的分离鉴定、生物学特性及抑制剂筛选

利用常规组织分离法对湖南隆回地区龙牙百合鳞茎优势腐败菌进行分离纯化,并应用科赫法则验证了分离菌株的致病性,运用形态学和分子生物学技术对腐败菌进行鉴定,同时,探究了9种食品级防腐剂对优势腐败菌的抑制效果。结果表明:引起隆回百合鳞茎腐烂的优势菌是尖孢镰刀菌,该菌菌丝生长和产孢的最适温度分别为30,25℃,菌丝致死温度为66℃处理10min;菌丝在pH 7,8时生长最快,在pH为7时产孢量最大;可利用多种碳氮源,其中,在以葡萄糖和D-果糖为碳源,牛肉膏为氮源的培养基上生长最块;在以D-木糖为碳源、牛肉膏和L-苯丙氨酸为氮源的条件下更利于产孢;光照有利于菌丝生长和产孢。采用9种食品级防腐剂对该优势菌的抑菌试验结果表明,纳他霉素、脱氢乙酸钠和焦亚硫酸钠对该菌具有显著抑菌效果(P0.05),最低抑菌浓度(MIC)分别为150,125,100mg/L。     

哈密瓜(Cucumis melo L.)致腐真菌的鉴定

研究从哈密瓜表面分离出引起其腐败的菌株A和菌株B,并采用显微镜形态学观察、表型特征和分子生物学三种方法对其进行鉴定。结果发现菌株A可利用碳源包括杏苷、糊精、D-半乳糖、D-葡萄糖酸、麦芽糖、肝糖、L-鼠李糖、L-山梨糖、L-乳酸等72种碳源,其ITS rDNA序列与尖孢镰刀菌甜瓜转化型(Fusarium oxysporum f.sp.melonis)的同源性为99%,分支长度为0.00。菌株B可利用碳源包括L-阿拉伯糖、D-果糖、丙三醇、蔗糖和木糖醇等54种碳源,其ITS rDNA序列与链格孢菌(Alternaria alternata)的同源性为100%,分支长度为0.00。因此,推断菌株A为尖孢镰刀菌甜瓜转化型,菌株B为链格孢菌。     

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25 ℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25 ℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。     

贵州望谟板栗冷藏期致腐真菌鉴定及其生物学特性研究

板栗腐烂由多种真菌协同侵染造成,尤其冷藏期栗果腐烂率可达15%～20%。该研究以贵州望谟主产区板栗为实验对象,对其冷藏期进行致腐真菌分离纯化、柯赫氏法则致腐性测定、形态学和分子生物学鉴定。结果表明,分离鉴定出的3株致腐真菌分别为层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)、皮落青霉(Penicillium crustosum)和链格孢菌(Alternaria alternata)。生物学特性试验表明,层出镰刀菌菌丝生长和产孢最适pH值分别为7.0和8.0,最适菌丝生长和产孢碳源为乳糖,氮源为甘氨酸,温度为25℃,光照条件为24 h黑暗;皮落青霉菌丝生长最适碳源为乳糖、pH值为8.0,最利于产孢的碳源为大豆多糖、pH值为7.0,菌丝生长和产孢最适温度为25℃、氮源为尿素、光照条件为24 h黑暗;链格孢菌分别以蔗糖、麦芽糖为碳源时菌丝生长最快、产孢量最大,菌丝生长和产孢最适温度为25℃、氮源为蛋白胨、pH值为9.0、光照条件为24 h黑暗。贵州望谟板栗冷藏期主要致腐真菌的确定,可为板栗腐烂有效防控及致腐机制研究提供科学依据。     

致病性尖孢镰刀拮抗菌的筛选与鉴定

该研究从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）拮抗效果最好的拮抗菌株,采用形态观 察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,并绘制该菌株生长曲线、考察其培养液中的蛋白类及脂肽类物质的抑菌效 果。 结果表明,从清香型白酒大曲中筛选出一株对致病性尖孢镰刀菌拮抗效果最好的拮抗菌株,编号为P9,其抑菌圈直径达到20 mm 左右。 经鉴定,拮抗菌P9为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;生长曲线结果表明,拮抗菌P9在第9小时生长速率达到最大;抑菌物 质提取实验表明,拮抗菌P9能分泌具有抑菌作用的蛋白类物质及脂肽类物质。     

一株芝麻枯萎病菌的鉴定及其生物学特性

为明确发生在南阳芝麻田块的芝麻枯萎病病原物,以有效防治病害,从南阳市采集枯萎病显症芝麻植株,用常规组织分离法获得一株镰刀菌ZY-2,依据柯赫法则确定ZY-2对芝麻幼苗的致病性,显微观察形态特征,检测生物学特性,并依据核糖体基因内转录间隔区（rDNA-ITS）序列和翻译延伸因子1α基因（tef）序列对该菌进行分子鉴定。在基于rDNA-ITS序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与2株尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：AF69310和EU285553）在自举值98%相聚一群。基于tef基因序列构建的系统发育树中,菌株ZY-2与3株F.oxysporum的参比菌株（GenBank登记号：KF030591、KF301636和FJ985299）在自举值100%相聚一群。该菌适宜生长温度为22~31℃,最适为28℃;pH2.0~10.0范围内均可生长,最适为pH6.5~7.5;能利用多种碳源和氮源进行营养生长,但在以葡萄糖和L-脯氨酸分别作为唯一碳源和氮源的培养基上不产生分生孢子。     

傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术对稻谷中常见有害霉菌的快速鉴别

本研究利用傅里叶变换衰减全反射红外光谱技术(ATR-FTIR)结合化学计量学方法,对稻谷中7种常见有害霉菌(尖孢镰刀菌Pr、尖孢镰刀菌Po、尖孢镰刀菌M23、黄灰青霉Pe、扩展青霉3.7898、灰绿曲霉3.3975和亮白曲霉)进行了快速鉴定。结果显示,运用主成分分析法(PCA)能够有效区分七种不同类别的菌株样品。建立的线性判别分析(LDA)和偏最小二乘判别分析(PLS-DA)模型,对7种不同类别菌株的留一交互验证整体正确率分别达到87.1%和87.3%。说明运用ATR-FTIR技术对稻谷侵染霉菌的种类实现快速鉴别具有一定可行性。     

一株农用拮抗放线菌的分离与鉴定

为烟草土传病害生物防治研究提供菌株资源,采用稀释平板法分离洛阳地区烟草根际土壤样品中的优势拮抗放线菌,平板对峙培养法与抑制菌丝生长速率法测定放线菌菌株的拮抗作用,16S rDNA分析鉴定菌株种类。结果表明:从烟草根际土壤中共分离、纯化获得108个放线菌单菌落,其中22株对瓜果腐霉、烟草疫霉、尖孢镰刀菌的至少一种有拮抗作用,菌株SA74对3种病原真菌的抑菌率均大于50 %。根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,该菌株被鉴定为金黄垂直链霉菌（Streptomyces aureoverticillatus）。      

河南烟草镰刀菌的分子鉴定及致病性分析

为明确河南省不同烟叶产区危害烟草的镰刀菌种类,以河南省烟叶产区典型镰刀菌根腐病烟株及烟田土壤为供试样品,采用组织分离法和土壤分离法获得纯化菌株,根据菌株形态和rDNA-ITS序列分析对病原菌进行鉴定,并采用无创接种法测定病原菌对烟草的致病性。结果表明,获得的98个菌株在PDA培养基上均产生白色菌丝,大型分生孢子呈镰刀形或马特形,无色、多孢;小型分生孢子呈肾形、椭圆形或卵形,无色、多无分隔。序列比对结果显示,所分离的98株菌分属尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、茄病镰刀菌（Fusarium solani）、层出镰刀菌（Fusarium proliferatum）、木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）和Fusarium nematophilum。致病性分析结果表明,尖孢镰刀菌、茄病镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌对烟苗具有致病性;48株致病菌中豫南烟区烟草镰刀菌根腐病致病性病原菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和木贼镰刀菌,以尖孢镰刀菌为主;豫中为尖孢镰刀菌;豫东、豫西为茄病镰刀菌和尖孢镰刀菌。因此,尖孢镰刀菌为全省烟区重点防控对象,豫南烟区还需加强层出镰刀菌和木贼镰刀菌的防控,豫东、豫西需防范茄病镰刀菌的发生。      

川秋葵1号采后菌核病病原菌鉴定及其生物学特性研究

为明确引起川秋葵采后菌核病的病原菌种类及其主要生物学特性,从自然发病的川秋葵上分离到1株丝状致病真菌,经形态学特征观察及r DNA ITS序列分析确定为腐皮镰孢霉菌(Fusarium solani),并对其进行了生物学特性研究。结果表明:该菌生长的最适温度为28℃,最适为p H7,最适生长Na Cl浓度为0.5%;所考察的碳源、氮源、微量元素中,乳糖、天冬酰胺、柠檬酸铁能显著增加(p0.05)腐皮镰孢霉菌的菌落直径,表明其对腐皮镰孢霉菌的生长有益。     

碳源对鼠李糖乳杆菌生长特性的影响研究

目的研究不同鼠李糖乳杆菌菌株对不同碳源的利用及生长特性。方法在600nm波长处测定12株鼠李糖乳杆菌在不同碳源条件下的吸光度,幵采用差异分析法和分类主成分分析法对其迚行分析。结果利用特定时间点的差异分析,在葡萄糖作为主要碳源时,各菌株之间的生长情况均没有显著差异(P0.05)。12株菌在乳糖作为主要碳源时可以分为4个生长型,在蔗糖作为主要碳源时可以分为5个生长型。主成分分类法在葡萄糖作为主要碳源时,能将12株菌分为7个生长型,在乳糖作为主要碳源时可分为8个生长型,在蔗糖作为主要碳源时可分为10个类型。结论不同鼠李糖乳杆菌菌株对不同碳源的利用存在差异,表明菌株在碳源利用上具有菌株特异性,同时不同菌株利用碳源的特异性会受到碳源种类的影响。     

污水中具有絮凝作用丝状菌的分离鉴定及性能研究

目的:为了阐明污泥中丝状菌的种类和特性,利用常规培养技术从山东省临淄区金岭回族镇的污水水渠中分离絮凝菌。方法:利用马铃薯葡萄糖培养基、麦芽汁琼脂培养基和查氏培养基分离出的丝状菌经絮凝率测定和多次富集筛选得到3株絮凝性能稳定且活性良好的菌株,对各菌株进行形态学鉴定,通过单因素实验和正交试验分析各因素对菌株絮凝能力的影响情况。并对其中一株絮凝率高的菌株SP进行了分子生物学鉴定及絮凝率特性分析。结果:经形态学鉴定SQ为青霉属真菌,SR为丛梗孢科某丝状菌,SP经分子生物学鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)。SP在麦芽汁培养基,pH 6.0,150 r/min,培养温度28 ℃,摇床培养72 h后对5 g/L高岭土悬浮液的絮凝率可达67.7%。结论:分离出的草酸青霉菌等菌株在微生物絮凝剂研究及水体治理方面具有一定的理论和实际意义。     

不同凝结芽孢杆菌在单一及混合碳源下的发酵特性

本文研究了凝结芽孢杆菌BH1、HL5和36D1在木糖、海藻糖、葡萄糖、低聚异麦芽糖、蔗糖和麦芽糖等单一碳源和葡萄糖分别加其他五种碳源(即混合碳源)下的底物利用和代谢情况,对三株菌以葡萄糖和低聚异麦芽糖作为混合碳源进行5 L罐发酵,进一步考察三株菌发酵特性,以期确定一株菌株作为后续高效乳酸发酵菌株筛选的出发菌株。结果显示:单一碳源发酵下,凝结芽孢杆菌36D1可以完全利用海藻糖、木糖和葡萄糖,而BH1和HL5对木糖和海藻糖几乎无利用,同时三株菌对蔗糖均无明显利用;混合碳源发酵下,凝结芽孢杆菌36D1发酵过程中表现出明显的葡萄糖阻遏效应,BH1和HL5对其他糖(尤其是麦芽糖和异麦芽糖)的利用几乎不受影响;5 L罐发酵结果表明,HL5对异麦芽糖的利用能力较优。凝结芽孢杆菌HL5对麦芽糖、异麦芽糖以及葡萄糖的利用能力较高,最终确定HL5作为后续菌株筛选的出发菌株。     

玉露香梨采后病原菌分离鉴定及其生物学特性研究

真菌侵染造成的腐烂是影响玉露香梨采后贮藏的主要因素。为明确导致玉露香梨采后腐烂的病原菌种类及其生物学特性,对其采后病原菌进行分离纯化,结合形态学和分子生物学特征确定其种类,并明确在不同温度、pH、碳源和氮源条件下病原菌的生长情况。结果表明:Alternaria alternata、Aspergillus、Penicillium polonicum和Fusarium是导致玉露香梨采后腐烂的主要病原菌。Alternaria alternata和Fusarium的最适生长温度为25~30 ℃,而Aspergillus和Penicillium polonicum最适生长温度分别为25~35 ℃和20~25 ℃;Alternaria alternata和Aspergillus的最适生长pH分别为6~10和7,而Penicillium polonicum和Fusarium最适生长pH则均为5~7;Alternaria alternata和Penicillium polonicum的最适生长碳源分别为葡萄糖和甘露醇,Aspergillus和Fusarium最适生长碳源为麦芽糖;Alternaria alternata、Aspergillus和Fusarium最适生长氮源为牛肉膏,而Penicillium polonicum最适生长氮源为蛋白胨。     

一株SOD生产菌的分离、初步鉴定和产酶条件优化

为得到高产超氧化物歧化酶(SOD)的菌株,通过稀释平板法从土壤中进行SOD生产菌株分离和筛选,利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和氯化硝基四氮唑蓝(NBT)染色法鉴定SOD,采用抑制剂实验分析SOD类型,利用生理生化性质分析和16S rDNA亲缘关系分析进行种属鉴定,并进一步研究碳源、氮源、碳氮比、接种量和装液量对发酵产酶的影响。结果表明：SOD活性染色显示一条条带,说明只产一种SOD同工酶。该SOD对氯仿-乙醇敏感,对H2O2不敏感,为Mn-SOD。理化性质和16S rDNA序列分析初步鉴定该菌为肠杆菌科沙雷氏菌属。发酵条件优化结果表明产酶最佳条件为：最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为蛋白胨,碳氮比4:1,接种量8%,250mL三角瓶装液量70mL。     

5株非酿酒酵母的耐受性及发酵特性研究

以陆生伊萨酵母（Issatchenkia terricola）、浅白隐球酵母（Cryptococcus albidus）、葡萄汁有孢汉逊酵母（Hanseniaspora uvarum）、美极梅奇酵母（Metschnikowia pulcherrima）、戴尔有孢圆酵母（Torulaspora delbruecki）为试材,分析了5株非酿酒酵母的生长特性、耐受性和碳源氮源同化能力及发酵速率。结果表明,戴尔有孢圆酵母的生长量较大,耐受的葡萄糖质量浓度为500 g/L、酒精体积分数为18%、SO2质量分数为420 mg/L,可同化氮源3种、碳源11种;陆生伊萨酵母的生长量较小,耐受的葡萄糖质量浓度为350 g/L、酒精体积分数为6%、SO2质量分数为120 mg/L,可同化氮源4种、碳源10种;其余3株非酿酒酵母的耐受及发酵特性优于陆生伊萨酵母低于戴尔有孢圆酵母;陆生伊萨酵母发酵速率在第2天达到最大值,其余4株酵母均在第3天达到发酵高峰。     

菌株传代及葡萄糖浓度对回复突变实验的影响

目的 探讨菌株传代培养、不同葡萄糖浓度对回复突变实验的影响。方法 实验菌株选择鼠伤寒沙门氏菌TA型菌株, 分别为TA97、TA98、TA100和TA102菌株, 分别使用原代、传代一次、传代二次菌株进行自发回变实验检测。选取TA97菌株分别在标准底层培养基和低糖顶层培养基进行突变的检测。 结果 4种菌原代组、F1组、F2组的自发回变菌落数差异有统计学意义(P<0.05), 且TA97和TA98的F1组、F2组, TA100的F2组不符合国标GB 15193.4-2014《食品安全国家标准 细菌回复突变试验》对回变菌落数的要求; 标准底层培养基与低糖培养基TA97回复突变数有统计学差异(P<0.05), 但均达到国家标准要求。 结论 菌株的传代及葡萄糖浓度对回复突变实验均有影响。     

寒地黑土中产γ-氨基丁酸乳酸菌筛选及发酵培养基优化

利用MRS培养基分别从牡丹江、漠河、五常的寒地黑土中筛选产γ-氨基丁酸(GABA)的乳酸菌菌株,对其做形态学观察和生理生化鉴定,并进行了发酵培养基组成的优化实验,分析比较不同碳源、氮源、碳氮比、初始pH和L-谷氨酸浓度对产GABA的影响。结果表明:共筛出五株菌株,分别编号为SbO001、SbO002、SbO003、SbO004、SbO005,可以将五株菌株初步鉴定为链球菌科(Streptococcaceae)。当发酵培养基组分碳源为葡萄糖,氮源为硫酸铵,碳氮比1:1,初始pH为5.5,底物为1%的L-谷氨酸时,菌株产GABA的能力较好,为1.112 g/L。本实验将为寒地黑土中产GABA乳酸菌的筛选提供一定的理论依据。     

Effect of prebiotic carbohydrates on the growth and tolerance of Lactobacillus

Resistance to gastrointestinal conditions is a requirement for bacteria to be considered probiotics. In this work, we tested the resistance of six different Lactobacillus strains and the effect of carbon source to four different gastrointestinal conditions: presence of α-amylase, pancreatin, bile extract and low pH. Novel galactooligosaccharides synthesized from lactulose (GOS-Lu) as well as commercial galactooligosaccharides synthesized from lactose (GOS-La) and lactulose were used as carbon sources and compared with glucose. In general, all strains grew in all carbon sources, although after 24 h of fermentation the population of all Lactobacillus strains was higher for both types of GOS than for glucose and lactulose. No differences were found among GOS-Lu and GOS-La. α-amylase and pancreatin resistance was retained at all times for all strains. However, a dependence on carbon source and Lactobacillus strain was observed for bile extract and low pH resistance. High hydrophobicity was found for all strains with GOS-Lu when compared with other carbon sources. However, concentrations of lactic and acetic acids were higher in glucose and lactulose than GOS-Lu and GOS-La. These results show that the resistance to gastrointestinal conditions and hydrophobicity is directly related with the carbon source and Lactobacillus strains. In this sense, the use of prebiotics as GOS and lactulose could be an excellent alternative to monosaccharides to support growth of probiotic Lactobacillus strains and improve their survival through the gastrointestinal tract.