太湖蓝藻水华胰蛋白酶抑制剂和凝血酶抑制剂的测定

为配合太湖蓝藻的收集处理 ,研究了蓝藻水华的资源化可能 ,在前期工作的基础上 ,通过层析分离并结合活性测定 ,发现太湖蓝藻水华中有多种胰蛋白酶和凝血酶抑制剂     

瓠瓜胰蛋白酶抑制剂的提取

采用水提法从瓠瓜中提取胰蛋白酶抑制剂,以瓠瓜提取液对胰蛋白酶的抑制率为指标,研究了提取温度、液料比、提取时间、pH四个主要影响因素,优化选出最佳提取方案。从瓠瓜中提取胰蛋白酶抑制剂的最佳条件为：温度70℃、pH=8、液料比4∶1（mL/g）、提取时间1h。     

豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究

对豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了调查 ,发现水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白、水豆腐、干豆腐中胰蛋白酶抑制剂活性均被钝化了 90 %以上 ;对腐乳、豆酱中胰蛋白酶抑制剂活性进行检测 ,结果未检出。无糖豆粉、×××豆粉、豆浆以及内酯豆腐中胰蛋白酶抑制剂钝化率低于90 %。比较了 3种热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果 ,得到巴氏杀菌可钝化胰蛋白酶抑制剂1 4 0 7% ;高压杀菌可钝化 91 1 0 % ,超高温灭菌可钝化 6 5 90 %。     

红小豆栽培品种胰蛋白酶抑制剂的含量及特性研究

我国17个红小豆栽培品种胰蛋白酶抑制剂(TI)含量范围为236.0 ～ 541.1 TIU/g,平均含量为410.8TIU/g;京农21、辽引红豆、XD1含量最高,分别为541.1、531.5、528.3TIU/g.明胶-PAGE活性染色表明红小豆有7种TI(A1～A7),主要组分为A4、A2和A6;品种间TI种类、丰度存在一定差异,产地北京的京农21有A2、A3,产地吉林白城的A2、A3含量低.红小豆TI提取液经沸水煮30 min或pH 1.5处理8h可以保持92.2％以上的活性.该研究结果表明我国有丰富的高产TI的红小豆资源,经烹煮或酸性条件处理仍可以保持很高的生物活性.     

酶法钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶，在其最适pH值和最适温度下水解低温脱脂豆粕1h，分别检测水解前后胰蛋白酶抑制剂活性的变化。结果表明，4种酶都可在不同程度上降解大豆胰蛋白酶抑制剂，但降解程度差异较大，碱性蛋白酶降解作用显著优于其它酶。按照四种酶水解胰蛋白酶抑制剂相对活力的大小排序为：碱性蛋白酶＞酸性蛋白酶＞中性蛋白酶＞木瓜蛋白酶。     

固定化胰蛋白酶壳聚糖树脂的制备及其对大豆胰蛋白酶抑制剂的吸附性

通过反向悬浮交联法制备了壳聚糖树脂,采用环氧氯丙烷活化,对树脂固定胰蛋白酶进行研究。通过正交设计实验,优化了壳聚糖树脂的活化、偶联条件;结果表明,4.0g壳聚糖树脂,加入1.6mL环氧氯丙烷,8.0mL1.0mol/LNaOH,活化温度60℃、偶联温度30℃时,胰蛋白酶可达到较大偶联量,偶联量为24.63mg/g壳聚糖树脂;添加硼氢化钠4.0mg,1,4-二氧六环6.0mL时,可将壳聚糖树脂的活化效果分别提高2倍、1倍。固定化酶活性检测表明,胰蛋白酶已成功地偶联到壳聚糖树脂上,并具有亲和吸附胰蛋白酶抑制剂活性,对大豆胰蛋白酶抑制剂的清除率约为33.3%。此固定化胰蛋白酶树脂可作为一种新型、廉价的亲和载体材料。     

固定化胰蛋白酶壳聚糖树脂的制备及其对大豆胰蛋白酶抑制剂的吸附性

通过反向悬浮交联法制备了壳聚糖树脂,采用环氧氯丙烷活化,对树脂固定胰蛋白酶进行研究。通过正交设计实验,优化了壳聚糖树脂的活化、偶联条件;结果表明,4.0g壳聚糖树脂,加入1.6mL环氧氯丙烷,8.0mL1.0mol/LNaOH,活化温度60℃、偶联温度30℃时,胰蛋白酶可达到较大偶联量,偶联量为24.63mg/g壳聚糖树脂;添加硼氢化钠4.0mg,1,4-二氧六环6.0mL时,可将壳聚糖树脂的活化效果分别提高2倍、1倍。固定化酶活性检测表明,胰蛋白酶已成功地偶联到壳聚糖树脂上,并具有亲和吸附胰蛋白酶抑制剂活性,对大豆胰蛋白酶抑制剂的清除率约为33.3%。此固定化胰蛋白酶树脂可作为一种新型、廉价的亲和载体材料。      

Alcalase蛋白酶降解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

研究了不同酶解条件下 (pH值、温度、时间、加酶量和添加巯基还原剂 ) ,碱性内切蛋白酶Alcalase对大豆蛋白和大豆胰蛋白酶抑制剂的降解作用。研究结果表明 ,Alcalase可同时降解大豆蛋白和胰蛋白酶抑制剂。该酶解反应的最适条件为 :pH 8 0、温度 6 0℃、最适加酶量 10 μL/g蛋白 (约 0 0 2 832AU/ g蛋白 ) ,添加Na2 SO3为ω(Na2 SO3) =0 3% ,水解时间 4h。在此条件下 ,残留胰蛋白酶抑制活性为对照的 2 0 % ,可溶性蛋白含量可达 2 7mg/mL ,游离氨基酸含量为 7 1mg/mL ,大豆蛋白的水解度为 8 9%。还讨论了Alcalase蛋白酶降解大豆蛋白生成小肽的最佳反应条件     

不同制油工艺过程中大豆胰蛋白酶抑制因子活性变化比较研究

本研究分别对压榨、预榨－浸出和直接浸出三种大豆制油工艺进行工艺测定,通过测定各工序大豆样品的胰蛋白酶抑制因子（ＴＩｓ）活性,研究比较不同制油工艺过程对大豆ＴＩｓ活性的影响。结果表明：压榨和预榨－浸出工艺中的蒸炒工序对ＴＩｓ活性影响最大,ＴＩｓ活性率分别在９０％和９５％以上;而直接浸出工艺因各厂家现行操作条件差异较大,ＴＩｓ活性变化趋势不一,成品粕中ＴＩｓ活性亦有较大差异。以预榨－浸出工艺成品粕的Ｔ     

两种大豆胰蛋白酶抑制剂的抑制活性及二级结构分析比较

研究了I型Kunitz大豆胰蛋白酶抑制剂(I-KSTI)和Bowman-Birk大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)对胰蛋白酶的抑制活性及其二级结构的组成差异。发现I-KSTI及　BBTI对胰蛋白酶的抑制曲线分为两部分:活性急剧下降部分和缓慢下降部分。使胰蛋白酶的活性降为原来的一半时的I-KSTI和BBTI浓度为1.5μg/ml　和1.2μg/ml。使胰蛋白酶活性趋向于零(完全钝化)时的I-KSTI浓度为13.5μg/ml,而BBTI则为9μg/ml。两种抑制剂的存在不改变胰蛋白酶的Km值,但其Vmax随抑制剂浓度的增加而下降。表明其对胰蛋白酶的抑制作用是一种非竞争性抑制作用。远紫外圆二色谱的研究发现I-KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,I-KSTI的克分子椭圆度[θ]200nm=-2545deg·cm2/d　mol,其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm=-797deg·cm2/d　mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。     

Heat Inactivation Kinetics of Trypsin Inhibitors During High Temperature-Short Time Processing of Soymilk

Heat treatment of soymilk was studied in the conventional batch boiling process and under High Temperature-Short Time (HTST) conditions. Reduction in total trypsin inhibitor was assayed enzymatically, and individual inhibitors, the Kunitz and the Bowman-Birk inhibitor, were assayed by ELISA technique. Standard first-order reaction kinetics and thermodynamics were applicable for inactivation, and results indicated that the mechanism was not protein unfolding, because entropy changes were zero or negative. The two inhibitors were inactivated at the same rate around 137°C. Therefore, a simple first-order kinetic model which gave a good, slightly conservative estimate of residual anti-trypsin activity under HTST conditions could be established.     

速冻毛豆钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间研究

以不同成熟度的毛豆为试材,研究了钝化过氧化物酶及胰蛋白酶抑制因子的安全烫漂时间。结果表明,6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2.5min,7～8成熟度的为3min;烫漂液含有3.5%的食盐的6～7成熟度的带荚毛豆烫漂时间为2min,7～8成熟度的为2.5min。     

超声波对大豆胰蛋白酶抑制剂活性及二级结构的影响

研究了Kunitz型大豆胰蛋白酶抑制剂(KSTI)和Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(BBTI)经超声波处理后的活性、巯基含量、远紫外圆二色谱的变化。发现KSTI和BBTI的单一吸收负峰在200nm波长处,KSTI的[θ]200nm=-2545deg·cm2·d/mol,, 其二级结构由22.5%β折叠,16.25%β转角和61.4%无规卷曲组成;BBTI的[θ]200nm= -797deg·cm2·d/mol,由52.6%β折叠和47.4%无规卷曲组成。用65%振幅的超声波场处理11 min 后,KSTI 的[θ]200nm值变为-1827 deg·cm2·d/mol,处理20min后,其β转角和无规卷曲的含量分别下降至10.8%和54%,而β折叠的含量则增加至35.2%,同时有约71.5%的二硫化键转变成巯基,对胰蛋白酶的抑制活性则被钝化55%;而BBTI的二级结构则表现稳定,65%振幅的超声波场处理20min后,[θ]200nm值只改变为-700 deg·cm2·d/mol,其β折叠、无规卷曲结构以及对胰蛋白酶的抑制活性基本上不受影响,仅有5.29%的二硫键转化成巯基。超声波可能是通过影响KSTI的二硫键,使其二级结构发生变化,从而影响其活性。     

马来酸单酯的合成及其含量测定方法的研究

合成了马来酸单乙酯、马来酸单丙酯及马来酸单丁酯,建立了利用紫外分光光度法对马来酸单酯含量测定的方法,马来酸单酯浓度在50-100 mg/ml范围内服从朗伯-比尔定律,得到相应的回归方程及相关系数。     

苦瓜中胰蛋白酶抑制剂活性的测定方法研究

目的用一种改进的测定方法,测定从苦瓜籽中提取分离的胰蛋白酶抑制剂的抑制活性。方法通过稳定性、重复性和专属性实验,分析和考察此测定方法。结果苦瓜籽中的胰蛋白酶抑制剂的相对分子质量1×10~3,比活1 153 U/mg;配制的抑制剂在2 h内测得的活性变化小于2%;RSD 2．5%;0．05 mg/mL牛血清白蛋白对测定体系没有干扰。结论此方法适用于苦瓜胰蛋白酶抑制剂活性的测定。     

紫外分光光度法测定红曲中酸式Lovastatin的含量

研究紫外分光光度计测定红曲中酸式Lovastatin的方法。将内酯型Lovastatin全部转化为酸式形式后用硅胶柱层析进行分离，再用双波长紫外分光光度法测定样品中总Lovastatin（以酸式存在）含量，同时用本室报道的实验方法测定内酯型Lovastatin的含量，二之差为红曲样品中酸式Lovastatin的含量。实验探索了样品中Lovastatin转化和洗脱的最佳条件，对总Lovastatin测定方法的准确度、精密度及最低检测限进行了研究，并且运用这一方法实测了五种红曲样品中酸式Lovastatin的含量。结果表明该方法具有良好的实用性，适用于中小企业对Lovastatin产品的科研开发及质量控制。     

Heat Inactivation of Trypsin Inhibitors in Soymilk at Ultra-High Temperatures

Soymilk samples at pH 7.5, 6.5 and 2 were subjected to heat treatment at 93°C and indirect ultra-high temperature. When heated at 93°C, 121°C and 132°C, trypsin inhibitor activity (TIA) in soymilk was more heat-labile at high pH than at lower pH. However, the effect of pH on rate of thermal inactivation was less pronounced when the holding temperature was increased to 143°C and 154°C. The point on a curve relating holding temperature and holding time, indicating inactivation of 90% of the TIA in soymilk at pH 6.5 in the range 93–154°C, coincided with the thermal-death-time curve of the organism putrefactive anacrobe 3679 at about 125°C.