铁皮石斛不同部位多糖含量及其抗氧化活性研究

目的测定铁皮石斛茎、叶、花中多糖含量,并对多糖的体外抗氧化活性进行比较,为更充分地开发利用铁皮石斛资源提供实验依据。方法采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛不同部位多糖含量,分别采用DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法和超氧阴离子清除法测定铁皮石斛不同部位多糖的体外抗氧化活性。结果铁皮石斛茎、叶、花中多糖含量分别为34.61%,23.51%,13.47%。茎多糖对DPPH自由基的清除率最高,达87.41%;叶中多糖对羟基自由基的清除率最高,达85.39%;茎、叶、花中多糖对超氧阴离子的清除率均不高。结论铁皮石斛茎、叶、花多糖含量丰富,其多糖有良好的抗氧化活性,具有一定的开发价值。     

铁皮石斛茎、叶、花功能性成分、抗氧化活性及其相关性

目的：探索铁皮石斛茎、叶、花主要功能性成分的差异性、抗氧化能力大小及抗氧化活性的主要贡献成分。方法：以铁皮石斛茎、叶、花为试验材料,分别采用苯酚—硫酸法、NaNO₂-Al₃+NaOH法、福林酚法和酸性染料比色法对其多糖、总黄酮、总多酚和总生物碱含量进行测定比较,研究茎、叶、花的抗氧化能力,并通过相关性分析确定其主要抗氧化活性成分。结果：铁皮石斛茎、叶、花中均含有多糖、黄酮、多酚和生物碱类成分,但含量差异极显著（P<0.01）,其中多糖含量为茎（31.00%）＞叶（15.04%）＞花（8.11%）;总黄酮和总多酚含量均以花中最高,分别为2.133%和15.71%,叶中次之;总生物碱含量以花中最高,达0.022 3%,为茎中的近4倍;铁皮石斛茎、叶、花均具有较高抗氧化活性,且随着浓度的增大,其对DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力逐渐增强,其中花的水提物和醇提物清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC₅₀均最小,说明其氧化活性最大,较接近于维生素C的。相关性分析发现,铁皮石斛茎、叶、花抗氧化活性与总黄酮、总多酚和总生物碱含量呈正相关,与多糖含量无明显相关性,说明总黄酮和总多酚含量对铁皮石斛茎、叶、花的抗氧化活性贡献最大,总生物碱含量的贡献显著。结论：铁皮石斛叶和花同样具有广阔的应用价值和开发前景。     

三个不同种源的铁皮石斛多糖比较及其初步的药理活性评价

本文通过对云南、丹霞、浙江三个不同种源的铁皮石斛多糖进行了同样的提取、分离、纯化,分别对其分子量、单糖组成、红外光谱进行比较,以及初步的药理活性评价,来讨论不同产地的铁皮石斛差异。采用高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography,HPGPC）对纯化的多糖片段进行分子量测定、利用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）测定单糖组成、红外光谱（Infrared Spectroscopy, IR）测定多糖结构,应用MTT法观察多糖片段对两种肿瘤细胞（Hela细胞和HT-29细胞）增殖作用的影响。结果表明,云南种铁皮石斛多糖片段分子量为757623 u;浙江种铁皮石斛多糖片段分子量为605958 u;丹霞种铁皮石斛多糖片段分子量为663240 u。铁皮石斛多糖的单糖组成主要为甘露糖和葡萄糖,其中甘露糖与葡萄糖比值大小为云南种>丹霞种>浙江种,且多糖进行纯化后比值会进一步升高。红外光谱吸收及特征峰提示,铁皮石斛多糖主要含有甘露糖和葡萄糖,且所含糖为β型。铁皮石斛多糖纯化可以改变单糖组成比例,提高甘露糖含量,不同种源的铁皮石斛多糖在分子量、单糖组成及红外光谱吸收存在一定差异,且对HT-29肿瘤细胞具有一定的抑制作用,其中丹霞种的铁皮石斛多糖片段对两种肿瘤细胞均有较好的抑制增殖作用（48 h）,具体关联性有待进一步研究。     

不同栽培模式下铁皮石斛多糖提取及抗氧化活性研究

铁皮石斛——中国传统药材，多糖作为铁皮石斛最重要的初生代谢产物，在抗肿瘤、抗氧化、降血糖以及解酒护肝等方面具有良好的功效，在食品药品添加剂方面拥有广阔的市场前景。本研究以晋产苗床和树桩栽培的铁皮石斛为原材料，以水作为溶剂，对铁皮石斛中的多糖采取浸泡式提取法，比较两种栽培模式下的多糖提取率。详细分析提取温度、料液比、提取时间对提高多糖提取率的影响，并在此基础上采用BoxBehnken中心组合设计和响应面法建立预测模型，优选出多糖提取最佳参数条件。结果显示：苗床栽培的铁皮石斛的多糖含量略大于树桩栽培的铁皮石斛。料液比1∶35，提取时间2 h，提取温度80℃时，苗床栽培铁皮石斛多糖的提取率达65.52%±0.1%；当料液比为1∶45，提取时间为2 h，提取温度为80℃时，树桩栽培铁皮石斛多糖的提取率为52%±0.24%。两种栽培模式提得的多糖抗氧化性检测结果表明：铁皮石斛多糖清除DPPH及羟基自由基的活性均较好，苗床栽培的铁皮石斛多糖抗氧化性优于树桩栽培。     

铁皮石斛多糖的低共熔溶剂提取工艺优化

为提高铁皮石斛的综合利用率,建立一种绿色高效的铁皮石斛多糖提取方法。本研究以铁皮石斛多糖提取率为指标,通过单因素考察了低共熔溶剂浓度、提取温度及液料比对铁皮石斛多糖提取率的影响,采用响应面设计优化铁皮石斛多糖的提取工艺,并对纯化后的多糖进行结构分析。结果表明：响应面优化后得到最佳工艺为低共熔溶剂（deep eutectic solvent,DES）浓度40%、提取温度80℃、液料比110:1(mL/g),在此条件下实际提取率为33.2%±0.28%,与预测值33.5%接近,多糖的纯度为56.95%±1.2%。多糖经阴离子交换柱及葡聚糖凝胶柱纯化后,纯度可达90.8%,其单糖主要由葡萄糖和甘露糖构成,质量比约为43:37,此外还含有少量的木糖、鼠李糖、核糖等,结构中同时含有α糖苷键和β糖苷键。本研究提供了一种低共熔溶剂提取铁皮石斛多糖的高效绿色提取方案,具有多糖提取率高及绿色的特点,为后续铁皮石斛多糖的开发提供了借鉴。     

铁皮石斛花化学成分及抗氧化活性研究

通过HPLC-MS/MSQQQ液相色谱串联质谱联合仪检测分析了铁皮石斛花中的氨基酸组成,并分别采用苯酚硫酸法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色体系、Folin-Cioealteau显色法测定铁皮石斛茎和花的多糖、总黄酮、总酚含量;结合清除DPPH自由基能力、还原力评价铁皮石斛花的抗氧化作用,并与铁皮石斛的茎条进行比较。研究结果表明:铁皮石斛花的氨基酸中主要以精氨酸为主、其次为脯氨酸;铁皮石斛茎条的多糖含量高于铁皮石斛花,而铁皮石斛花的总酚和总黄酮高于铁皮石斛茎;铁皮石斛花的还原力强于铁皮石斛茎。铁皮石斛花有广阔的开发前景。     

超高压提取铁皮石斛多糖工艺优化及其抗氧化活性分析

目的:优化超高压提取铁皮石斛多糖工艺条件,并分析其基本性质及体外抗氧化活性。方法:以铁皮石斛干粉为原料,优化超高压技术提取铁皮石斛多糖工艺条件,分析传统热水浸提法、超高压法两种提取方法下的铁皮石斛多糖的相对分子量与单糖组成,并比较其体外抗氧化活性。结果:超高压提取铁皮石斛多糖的最佳工艺条件为超高压压力200 MPa,料液比1:25 (g/mL),保压时间5 min,此时铁皮石斛多糖得率为33.3%,比传统热水浸提法提高了128%,且超高压法提取的多糖蛋白含量和相对分子量下降,甘露糖含量提高,对DPPH自由基的清除能力提高。结论:超高压提取的铁皮石斛多糖得率高,体外抗氧化活性较好。     

铁皮石斛花多糖的复合酶解法提取及生物有效性研究

研究一种新型有效的铁皮石斛花多糖提取方法,并对铁皮石斛花多糖、黄酮和多酚的生物有效性进行测定,为充分开发利用铁皮石斛资源提供科学依据。采用复合酶解法对铁皮石斛花进行提取,用蒽酮-硫酸法测定铁皮石斛花多糖含量,以热水浸提法为对照,评价铁皮石斛花复合酶解法的生物有效性。试验结果得到复合酶最佳配比：酶用量为纤维素酶添加量0.8%,果胶酶添加量0.4%,碱性蛋白酶添加量0.4%;酶解提取工艺最优参数为料液比1∶20（g/mL）,酶解pH4,酶解时间2.0 h,酶解温度40℃;提取液的生物有效性为多糖生物利用度32.61%、黄酮生物利用度22.34%、多酚生物利用度19.18%。复合酶解法提取铁皮石斛花,提取液多糖含量较高,提取率为169.3 mg/g,可较好地维持多糖、黄酮、多酚的生物有效性。     

铁皮石斛多糖提取及对羟自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用

以酶解超声提取法提取铁皮石斛多糖,通过对料液比、超声时间、复合酶质量分数的单因素试验和正交试验,确定铁皮石斛多糖的最佳提取条件;以高效液相色谱法对铁皮石斛多糖进行组成成分分析;以香豆素-3-羧酸荧光法测定铁皮石斛多糖的羟自由基清除能力;以噻唑蓝实验和细胞流式实验研究铁皮石斛多糖提取物对SH-SY5Y细胞的保护作用。结果表明,最优铁皮石斛多糖提取条件为料液比1∶100(g/mL)、超声时间2 h、复合酶(纤维素酶和果胶酶1∶1等质量混合)质量分数50%,最优提取条件下铁皮石斛多糖得率为25.69%,其主要单糖组分为甘露糖和葡萄糖。在质量浓度为20～80μg/mL范围内铁皮石斛多糖提取物能有效清除Cu~(2+)催化H_2O_2产生的羟自由基并有效抑制SH-SY5Y细胞的凋亡(凋亡率从56.97%下降到17.97%),且其作用效果成质量浓度依赖性。因此,铁皮石斛多糖可通过清除羟自由基从而抑制Cu~(2+)催化H_2O_2产生羟自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。     

不同人工栽培模式下铁皮石斛活性成分及抗氧化活性比较

目的 比较活树附生栽培、大棚盆栽、贴板附生栽培3种不同人工栽培模式下铁皮石斛活性成分及抗氧化活性。方法 对3种人工不同栽培模式下铁皮石斛样品主要活性成分多糖、甘露糖、游离氨基酸、醇浸出物、多酚、黄酮含量及抗氧化活性进行测定并分析比较。结果 大棚盆栽模式铁皮石斛多糖、甘露糖含量最高;而活树附生栽培铁皮石斛多酚、黄酮、游离氨基酸及醇浸出物含量相对较高。活树附生栽培铁皮石斛醇提液对DPPH自由基及ABTS自由基清除能力最强,表现出较高的抗氧化活性。 结论 不同栽培模式下铁皮石斛多糖、甘露糖、多酚等主要活性成分存在较大差异,测定结果可为铁皮石斛的栽培和应用提供参考。     

UPLC-MS/MS同时测定铁皮石斛茎、叶、花中酚类组分的含量

建立超高效液相色谱-串联质谱同时、快速分析18 种酚类物质的方法,测定比较铁皮石斛茎、叶、花部位含量差异。样品用甲醇-水溶液提取,提取液中的目标化合物经Waters T3 C18柱梯度洗脱分离,电喷雾串联三重四极杆质谱仪正、负离子扫描方式多反应监测模式检测。结果表明：以18 种酚类物质标准品作为对照,在铁皮石斛样品中共检出15 种酚类组分,分别为3,5-二羟基苯甲酸、橘皮素、绿原酸、槲皮素、芦丁、对羟基苯甲酸、咖啡酸、丁香酸、香草酸、山柰酚、对香豆酸、芥子酸、阿魏酸、3-羟基肉桂酸、水杨酸。铁皮石斛不同部位多酚组分含量为花＞叶＞茎,相对于其他酚类组分,芦丁在铁皮石斛茎、叶、花中的含量均为最高。铁皮石斛不同部位主要酚类组分表现出一定的差别：铁皮石斛花中主要含有芦丁、咖啡酸、阿魏酸和对羟基苯甲酸,铁皮石斛叶中芦丁和阿魏酸的含量相对较高,而铁皮石斛茎部主要酚类组分则为芦丁、阿魏酸与香草酸。实验结果可为铁皮石斛不同部位酚类组分的利用提供一定的科学依据。     

铁皮石斛多糖不同级分的制备、性质分析及免疫调节活性比较

目的:制备铁皮石斛多糖(DOP)的不同分级组分,比较其理化性质及体外免疫调节活性的差异,并对多糖结构特征与活性的关系进行初探。方法:采用分级醇沉的方法获得铁皮石斛多糖不同分级组分,并对各组分的糖、糖醛酸、蛋白质含量、单糖组成、分子量进行分析。以巨噬细胞RAW264.7为研究模型,比较DOP不同分级组分的体外免疫调节活性。结果:DOP和四个组分(F30、F40、F50和F50S)均为中性糖,各组分糖醛酸含量较DOP均有所降低,F50S蛋白质含量最高。DOP、F30、F40、F50和F50S的平均分子量分别为262.4、314.5、248.3、202.9和136.2 kDa。DOP、F30、F40、F50和F50S均主要由甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为5.16:1、3.67:1、4.16:1、5.62:1和5.86:1。DOP和各分级组分均可显著(p<0.05)增强RAW264.7巨噬细胞的增殖能力、NO的释放以及TNF-α和IL-1β的分泌。结论:铁皮石斛多糖及其分级组分均有免疫调节活性,且分子量较小的免疫调节活性较强。     

复合速溶茶粉制备工艺优化及功能成分分析

为扩宽铁皮石斛花的使用价值,以铁皮石斛花与绿茶为原料,进行功能性复合速溶茶粉的研制。在单因素实验及响应面试验的基础上,优化铁皮石斛花浸提工艺条件,随后将铁皮石斛花浸提浓缩物与绿茶提取物复配进行复合速溶茶粉的加工。结果表明,铁皮石斛花在料液比1:25(g:mL)、乙醇浓度68%、超声温度45℃和超声时间55 min的条件下浸提,其浸提率达到了62.07%;浸提浓缩物与等质量的绿茶提取物进行喷雾干燥,可获得香气怡人、滋味协调的复合速溶茶粉,其感官评分为93分。利用高效液相色谱法(High performance liquid chromatography,HPLC)检测到复合速溶茶粉中氨基酸、槲皮素、花旗松素、山奈酚含量分别为70.89、9.23、1.27、6.22 mg/g。该复合速溶茶粉对DPPH·与O₂-·均有一定的清除作用,其半抑制浓度(IC₅₀)分别为0.0934、1.09 mg/mL。可见,该复合速溶茶粉具有良好的感官特性、抗氧化活性。     

铁皮石斛花总黄酮的绿色提取工艺优化

目的:为充分利用铁皮石斛花中的黄酮类物质,开发了一种绿色高效的总黄酮提取工艺。方法:以铁皮石斛花总黄酮得率为指标,使用新型低共熔溶剂,基于单因素实验结合响应面法（Response surface methodology, RSM）优化总黄酮提取工艺参数,并使用大孔吸附树脂考察溶剂的循环利用能力。结果:氯化胆碱、乙二醇（摩尔比1:4）组成的低共熔溶剂（Deep eutectic solvents,DESs）得率最高;最佳提取条件下（DESs含水量18.9%,温度88.2 ℃,液固比23.3:1 mL/g,时间38.0 min）,得率达到22.457 mg/g;大孔吸附树脂ADS-8对总黄酮吸附率、解吸率分别为78.32%、83.55%,回收后的DESs重复利用率达95.47%。结论:低共熔溶剂是一种高效绿色的提取方法,可循环利用铁皮石斛花中总黄酮的提取。     

铁皮石斛多糖化学修饰及其对免疫活性的影响

采用水提醇沉法结合冻融制备高纯度铁皮石斛多糖,并利用硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰方法对铁皮石斛多糖进行化学修饰,探讨不同方法修饰的铁皮石斛多糖对RAW264.7巨噬细胞免疫活性影响。结果表明,铁皮石斛纯多糖(purified polysaccharides of Dendrobium officinale,DOP)的中性糖含量较高,而糖醛酸及蛋白质含量则较低,分别为87.37%、3.19%和0.51%,羧甲基化及硫酸化显著降低了铁皮石斛多糖的中性糖含量。红外分析结果显示硫酸化、脱乙酰化及羧甲基化修饰衍生物均已成功制备。高性能凝胶渗透色谱法测定铁皮石斛多糖分子质量为960 k D,硫酸化及羧甲基化修饰显著增加了其分子质量。体外实验研究发现,硫酸化和脱乙酰化修饰的铁皮石斛多糖能够增强RAW264.7巨噬细胞的免疫活性,而羧甲基化修饰则表现为显著的抑制作用,表明不是所有的官能团接枝改性都可以改善铁皮石斛多糖对免疫活性的影响。     

乳酸菌发酵前后铁皮石斛汁中功能活性物质与风味成分的比较

为研究乳酸菌发酵对石斛汁中功能活性物质及风味成分的影响。以铁皮石斛汁为原料，采用嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus，La）与副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei，Lp）混合液态发酵，分析石斛汁中多糖、乙酸乙酯萃取成分、挥发性成分、游离氨基酸及有机酸的变化。结果表明，铁皮石斛汁发酵后，多糖平均分子量由184.40 ku减小至91.27 ku，多糖含量极显著降低21.91%（P<0.01）；试验鉴定发酵前后乙酸乙酯萃取成分分别为20种和16种，相同成分11种，差异成分14种；挥发性成分由发酵前的21种增至发酵后的26种，发酵后酚类与醇类物质相对含量增多，花香香气物质相对含量增多；发酵后检测出15种游离氨基酸，游离氨基酸种类较发酵前增加6种，赋予发酵汁甜味和鲜味，除天冬氨酸外，其他种类游离氨基酸含量均极显著升高（P<0.01）；发酵前后分别含有3种和4种有机酸，乳酸仅在发酵后检出，其含量占比有机酸总含量的76.11%，赋予发酵汁柔润的口感。由此可见，La与Lp混合发酵可使铁皮石斛汁中产生丰富的活性物质与风味成分。     

霍山铁皮石斛多糖的脱蛋白工艺及结构分析

优选霍山铁皮石斛多糖脱蛋白工艺,并对其进行分离纯化及结构分析。以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag法3种脱蛋白方法。结果表明,酶-Sevag法脱蛋白效果最佳,蛋白脱除率为81.58%,多糖损失率为15.63%。采用DEAE-52纤维素柱、Sephadex G-100凝胶柱分离纯化石斛多糖,得活性组分DOPA-1;采用紫外扫描光谱、高效液相色谱鉴定DOPA-1为均一多糖;采用气相色谱分析表明组分单糖由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成(各单糖的物质的量比为1∶0.42∶0.27);采用红外光谱和刚果红实验分析糖链结构表明,DOPA-1有典型的糖类特征吸收峰,存在β-D-甘露吡喃糖苷,且具有三股螺旋构象。     

石斛多糖的构效关系研究进展

基于石斛中多糖含量较高,近年来国内外学者对石斛多糖的结构以及活性的研究逐渐深入,本综述对石斛多糖的单糖组成、糖苷键、乙酰基与分支度等结构进行了整理,对石斛多糖在抗氧化、免疫调节、抗糖尿病等活性方面的作用机制进行了总结。本文计算了具有抗氧化活性的石斛多糖清除DDPH自由基的EC_(50)值,从具有抗氧化活性的石斛多糖单糖组成与相对丰度的角度出发,建立了随机森林模型。该模型预测了石斛多糖抗氧化活性的高低,模型预测准确度为70.00%。研究表明,对石斛多糖有无抗氧化活性影响最大的单糖为葡萄糖,石斛多糖抗氧化活性的高低与甘露糖和半乳糖的线性关系以及甘露糖与阿拉伯糖的线性关系具有相关性。本文对探究不同结构石斛多糖活性的定性与定量关系提供一定了的参考。