超高效液相色谱-串联质谱法测定蜂王幼虫中烟酰胺单核苷酸的含量

建立了超高效液相色谱-串联质谱快速测定蜂王幼虫中烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)的方法.样品经乙醇和水提取后,采用Waters X Select HSS T3(2.1 mm×100 mm,2.5μm)色谱柱进行分离,串联质谱多反应监测模式定量分析.该方法中NMN在50～1...     

代谢工程改造大肠杆菌发酵生产β-烟酰胺单核苷酸

为实现大肠杆菌高效生产β-烟酰胺单核苷酸（β-nicotinamide mononucleotide,β-NMN）,设计模块化代谢改造策略。首先,对烟酰胺（nicotinamide,NAM）和β-NMN支路代谢涉及的8个酶进行失活,减少底盘细胞对前体和产物的额外消耗。其次,通过引入NAM输入蛋白（Bc NiaP）、β-NMN输出蛋白（Bm PnuC）、5-磷酸核糖-1-焦磷酸合成酶（5-phosphoribosyl-1-pyrophosphate?synthetase,Prs）和烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide?phosphoribosyl?transferase,Nampt）,敲除调节蛋白PurR,工程菌N12’摇瓶发酵可积累0.34 g/L的β-NMN;此后,比对筛选发现Comamonadaceae?bacterium来源的Nampt活性较高且对底盘细胞负担较小;通过进一步强化Bm PnuC和Prs的表达水平,工程菌N18摇瓶发酵β-NMN产量提高至1.36 g/L。最后,利用发酵罐分批补料发酵38 h,β-NMN产量达到10.2 g/L,NAM到β-NMN的摩尔转化...     

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时检测食品中的烟酰胺单核苷酸α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

目的 建立固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食品中烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide, NMN) α、β异构体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide, NAD⁺)含量的方法。方法 样品经5%甲醇水溶液超声提取, HLB固相萃取柱和混合型阴离子交换固相萃取柱分别净化,采用Waters ACQUITY UPLC?HSS T色谱柱进行分离,流动相为5 mmol/L乙酸铵含0.1%(V/V)甲酸水-甲醇,梯度洗脱;流速0.2 mL/min;柱温30℃;多反应监测(multiple reaction monitoring, MRM)模式定量分析,定量离子对NMN为m/z 335.0/123.0、NAD⁺为m/z 662.0/540.0。结果 在最优条件下, α-NMN和β-NMN两种异构体的分离度为5.56。该方法中α-NMN、β-NMN和NAD⁺均在10～1000 ng/mL范围内线性良好,相关系数分别为0.9999, 0.9998...     

高效液相色谱法同时测定烟酰胺单核苷酸中5种有关物质

目的 构建同时检测烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)中5种有关物质[烟酰胺氧化物、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、一磷酸腺苷(adenosine monophosphate, AMP)及烟酰胺]含量的高效液相色谱法。方法 采用C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲盐溶液(用磷酸调节pH为4.5)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,进样量为20μL,检测波长210 nm,柱温20℃,试样盘控温:5℃,并对方法的专属性、灵敏性、准确性、重复性、耐用性及适用性进行验证。结果 烟酰胺氧化物、ATP、ADP、AMP及烟酰胺分别在质量浓度0.4060～16.2402、0.4110～16.4403、0.4150～16.6010、0.4163～16.6507、0.4028～16.1206μg/mL范围内,质量浓度与峰面积呈现良好的线性关系,线性系数r²     

β-烟酰胺单核苷酸对生理机能影响的研究进展

我国处于亚健康状态的超重或肥胖人群与老龄化人口数量都在逐年上升。在衰老和肥胖过程中,细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide,NAD＋）水平会发生系统性下降。NAD＋是细胞能量代谢、调节细胞机能、影响衰老的关键靶点,因此,通过补充NAD＋前体以改善生理机能、延缓衰老已经成为目前研究热点。β-烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）是动物体内NAD＋代谢的中间产物,也是目前最直接高效的NAD＋补充前体。但是NMN对生理机能存在多方面多器官的复杂影响,而且人体临床试验与动物实验结果并不一致,服用量也尚未确定。本文综述到目前为止NMN的动物实验和人体临床试验结果,旨在探究补充NMN对动物、人体生理机能的影响、机制及其适宜剂量和不良反应,以期为未来NMN研究与应用提供思路。     

运动营养食品中β-羟基-β-甲基丁酸钙的含量测定

文章旨在建立高效液相色谱法测定运动营养食品中β-羟基-β-甲基丁酸钙(Calcium-β-hydroxy-β-methylbutyrate,HMB-Ca)含量的方法。取样品于50 mL容量瓶中,加入0.1 mol/L盐酸溶液约40mL,超声处理30 min,用0.1 mol/L盐酸溶液定容至50 mL,用0.45μm滤膜过滤,经Phenomenex Gemini C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液:甲醇(95:5,V:V)为流动相等度洗脱,流速0.8 mL/min,柱温30℃,进样量10μL,二极管阵列检测器214 nm波长采集数据,外标法定量。HMB-Ca在5～1000 mg/L浓度范围内线性良好,相关系数R2为0.99999。3个浓度水平的平均加标回收率在96.9%～98.1%,相对标准偏差(n=6)为0.87%～1.84%,精密度的相对标准偏差(n=6)为0.32%,方法检出限为0.020 g/100 g,定量限为0.050 g/100 g。该方法操作简便、灵敏度高,具有良好的准确度和精密度,适用于运...     

高效液相色谱法测定杏果肉中β-胡萝卜素含量

采用高效液相色谱法测定了18种杏果肉中β-胡萝卜素的含量。样品采用丙酮∶石油醚(体积比20∶80)提取,40℃水浴旋转蒸发至干,无水乙醇定容,高效液相色谱测定。检测波长450 nm,定量检测限0.1 mg/kg,方法快速有效,线性关系良好。经检测表明,杏果肉中含有丰富的β-胡萝卜素,其中以骆驼黄杏的β-胡萝卜素含量最高为(17.55±0.27)mg/kg。     

功能性面料中烟酰胺含量的测定

为确定功能性面料中烟酰胺含量的测定方法,在弱酸环境下超声萃取,后经液相色谱碳18柱分离,在液相色谱-质谱联用仪(LC/MS)器中用外标法检测定量。结果表明,烟酰胺在1.000～20.000 mg/L与积分面积呈现良好的线性关系,回归方程为y=269 916x+143 786,曲线的相关系数R²=0.998 1,所选某品牌的功能性面料中烟酰胺质量分数达892.6 mg/kg。该方法操作简单、快速准确、干扰少,可用于功能面料中烟酰胺含量的测定。     

高效液相色谱法测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚的含量

目的 建立用高效液相色谱测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚含量的方法.方法 色谱柱为Venusil XBP-C<,18>(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(60:40),每1000 mL加入磷酸二氢钾1.4 g,十二烷基磺酸钠1.2 g;柱温30℃;流速1.0 mL·min<'-1>;检测波长257 nm.结果 β-细辛醚在8.48～67.84 μg·mL<'-1>浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=0.999 9);β-细辛醚平均回收率为100.76%;RSD 1.41%.结论 该方法灵敏简便,结果准确可靠,可用于β-细辛醚的含量测定.     

β-胡萝卜素微胶囊和胡萝卜汁中β-胡萝卜素异构体的测定

本文使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了β-胡萝卜素的顺反异构体。采用的色谱柱为Vydac 201TP54 C18柱，流动相为甲醇：乙睛：四氢呋喃(15：80：5)，流速0．6mL/min，检测波长：450nm，柱温30℃。在该色谱条件下，微胶囊化β-胡萝卜素产品与胡萝卜汁中的β-胡萝卜素顺反异构体可以快速完全地分离，其β-胡萝卜素顺反异构体的组成也能进行准确定量。     

高效液相色谱法测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚的含量

目的建立用高效液相色谱测定石菖蒲挥发油中β-细辛醚含量的方法。方法色谱柱为Venusil XBP-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水(60:40),每1 000 mL加入磷酸二氢钾1.4 g,十二烷基磺酸钠1.2 g;柱温30℃;流速1.0 mL?min-1;检测波长257 nm。结果β-细辛醚在8.48~67.84μg?mL-1浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=0.999 9);β-细辛醚平均回收率为100.76%;RSD 1.41%。结论该方法灵敏简便,结果准确可靠,可用于β-细辛醚的含量测定。     

应用GB 5009.89-2016检测乳粉中烟酸和烟酰胺含量实例及探讨

目的探讨说明使用GB 5009.89-2016的高效液相色谱法进行实际乳粉中烟酸和烟酰胺含量检测时容易产生误解的细节,并提出适当建议。方法样品按照标准方法进行处理与检测,考察烟酸和烟酰胺的色谱峰形、分离度及响应值;以连续6次重复进样的相对标准偏差来检验方法的精密度;以加标回收法来检验方法的准确度。结果在该方法条件下,烟酸和烟酰胺的色谱峰分离完全,响应值高,峰形尖锐对称;烟酸和烟酰胺色谱峰的保留时间分别在8.438 min和10.515 min附近,相对标准偏差分别为0.085%和0.079%;烟酸的加标回收率为94.4%,烟酰胺的加标回收率为95.1%。结论为了保证实验的重复性和结果的准确性,建议样品前处理过程中的称样量和稀释倍数为确切的数值。在此前提下运用该方法检测乳粉中烟酸和烟酰胺含量精密度高,结果准确可靠。     

高效液相色谱法测定婴幼儿配方米粉和乳粉中 烟酸和烟酰胺含量

目的建立高效液相色谱法测定婴幼儿配方米粉和乳粉中烟酸和烟酰胺的提取分析方法。方法婴幼儿配方米粉和乳粉以10%甲醇+0.1%磷酸水溶液为提取液,超声提取,离心去除杂质,取上清液并用微孔滤膜(0.2μm)过滤,以十二烷基硫酸钠(SDS)缓冲液-乙腈(74:26,V:V)为流动相,利用高效液相色谱分析,外标法定量。结果该方法经过验证在0.20~30 mg/L质量浓度范围内,线性关系良好,烟酸、烟酰胺相关系数大于0.999,回收率在99.07%~110.33%之间,RSD小于5%。结论与现行标准方法相比,本方法前处理方法简单、基质干扰小,测定结果准确度高、重现性好,尤其对米粉中烟酸及烟酰胺的提取效率更高,可用于婴幼儿配方米粉和乳粉中烟酸及烟酰胺含量测定的快速、批量分析。     

高效液相色谱法检测乳粉中活性β-内酰胺酶含量

建立了乳粉中活性β-内酰胺酶高效液相色谱快速检测方法。利用β-内酰胺酶能酶解青霉素钾的特性,在样品中加入β-内酰胺酶的分解底物青霉素钾,酶解后,用高效液相色谱检测青霉素钾含量,通过酶解量检测样品中活性β-内酰胺酶的含量。β-内酰胺酶的浓度在0.2~1.4mg/L范围内,青霉素钾浓度的减少量与β-内酰胺酶的浓度呈较好的线性关系,方法的相关系数0.99,回收率89.0%~95.0%,相对标准偏差3.0%~3.5%。该方法检测灵敏度高、回收率和重现性良好,适用于乳粉中β-内酰胺酶的定量检测。     

高效液相色谱法测定保健食品中β-葡聚糖

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测保健食品中β-葡聚糖含量。方法称取样品适量,在酸性条件下于135℃用微波消解仪提取15 min,取出水解液,用氢氧化钠溶液调节pH至6.5±0.2,用水定容至100 mL容量瓶中,摇匀后过滤。采用高效液相色谱法检测,根据葡萄糖标准品的色谱峰面积进行定量。结果葡萄糖浓度在0.01~0.16 mg/mL的范围内与峰面积的线性良好,相关系数为0.9998。3水平不同浓度葡萄糖标准品添加的回收率为97.4%~98.6%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.4%~0.9%。结论该方法操作简便、准确、重现性好,适用于保健食品中β-葡聚糖含量的快速测定。     

紫苏中叶黄素及β-胡萝卜素含量的测定

叶黄素是一种富集于眼睛视网膜黄斑区的黄色素,缺乏叶黄素会增加可致盲的老年性黄斑变性的患病风险;β-胡萝卜素作为维生素A的前体物质,被人体吸收后可转化维生素A营养眼睛。一年生草本植物紫苏是我国卫生部颁布的药食同源植物之一,为了确定紫苏中对视力有保护作用的叶黄素和β-胡萝卜素含量,在优化提取条件的前提下,采用高效液相方法分析了两个紫苏品种不同采收期叶黄素和β-胡萝卜素含量。结果表明添加了pH为7的15%醋酸三乙胺的乙醇为叶黄素的最佳提取溶剂,β-胡萝卜素的最佳提取溶剂为石油醚-丙酮(8∶2),叶黄素和β-胡萝卜素在紫苏叶中最高含量分别为740μg/g干重和543μg/g干重。     

高效液相色谱法同时测定乳粉中烟酸、烟酰胺和维生素B_6

介绍了高效液相色谱法同时测定配方乳粉中烟酸、烟酰胺和维生素B6的方法。方法采用C18柱(5μm,250mm×4.6mm),以甲醇、辛烷磺酸钠、三乙胺配制的流动相,流速1.0m L/min进行等度洗脱,16min内可以实现对待测组分的基线分离。结果表明,待测组分在各自浓度范围内线性良好,线性相关系数均大于0.999,平均加标回收率为88.6%~109.8%,相对标准偏差为0.33%~2.25%。该方法准确、快速、灵敏度高,适合配方乳粉中烟酸、烟酰胺和维生素B6含量的同时测定。     

重组大肠杆菌全细胞催化合成NMN

基于前期研究构建的一株能以烟酰胺(nicotinamide,NAM)和葡萄糖为底物高产β-烟酰胺单核苷酸(β-nicotinamide mononucleotide,NMN)的大肠杆菌工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)-NF017,采用全细胞催化方式进行NMN合成。首先,在摇瓶水平上对菌株培养过程的发酵培养基类型、诱导温度和诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)浓度,以及全细胞催化过程的反应体系初始pH、反应温度和底物NAM与葡萄糖的添加比例（质量浓度比）进行了优化,在最优条件下,NMN的生成量（质量浓度）达1.84 g/L。为了进一步提高NMN的生成量,在5 L发酵罐上对全细胞催化过程中溶氧水平和底物NAM的流加方式进行控制和优化。最终,应用恒定速度流加NAM的补料模式,NMN的生成量提高至12.24 g/L,底物NAM的摩尔转化率达85.65%。该研究结果为应用全细胞催化法生产NMN提供了一定参考。     

牛奶中酵母β-葡聚糖的应用与测定

在牛奶中添加了酵母β-葡聚糖,采用HPLC测定牛奶中酵母β-葡聚糖的含量,并对实验中水解用盐酸的质量摩尔浓度进行确定,最后考察了测定方法的精密度与回收率. 实验结果显示,水解用盐酸质量摩尔浓度选用1.0mol/L较为适宜;精密度实验结果RSD值为4.64％;平均回收率在96.39％～97.22％之间,RSD值在2.51％～5.38％之间;该检测方法稳定可行.     

HPLC测定食品维生素预混料中β-胡萝卜素的含量

从检测波长、流动相、柱温等方面优化了反相高效液相色谱仪测定维生素预混料中β-胡萝卜素(β-carotene),并对该检测方法的适用性进行验证和评价.并用实验方法优化得到的反相高效液相色谱分析维生素预混料分析β-胡萝卜素的条件为:采用1 :1(V/V)乙醇和环己烷混合液直接提取,提取液用纯水洗涤至酚酞溶液近中性.提取液经装有无水硫酸钠的坩埚脱水过滤后,用丙酮溶解,经lichossorb100-RP-8(5um)-250×4.0色谱柱,以甲醇-乙腈-氯仿比81 :15:4为流动相进行洗脱,用紫外双通道可变检测仪Shimadzu SPD-20A在450nm进行检测,在此条件下,beta-胡萝卜素的标准曲线的回归方程是Y=(3.1344e-0.006)x+(0)相关系数R=0.999882>0.999表明线性良好,能满足定量分析要求,在此色谱条件下,以3倍的噪音计算检出限,测得本方法最小检出限为1.0ug/L.加标样品回收率96.18%101.40%.变异系数CV(%)是0.45%.准确度95.31%101.62%该方法能简便、快速、准确地测定维生素预混料中β-胡萝卜素的含量.