胶体金免疫层析法快速检测食用油中黄曲霉毒素残留

为建立用于快速检测粮油样品中黄曲霉毒素药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,我们采用免疫竞争法,将抗黄曲霉毒素单克隆抗体-胶体金复合物包被在微孔中,并将人工合成的黄曲霉毒素抗原包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面作为检测线(T 线)。待测样品中的黄曲霉毒素残留物将与NC膜上的黄曲霉毒素抗原竞争结合胶体金标记的抗黄曲霉毒素单克隆抗体,并以颜色直观显示检测结果。检测食用油样品时,灵敏度可达到0.5μg/L,仅需20 min。实验证明该检测试剂具有较高的灵敏度及很好的特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为黄曲霉毒素残留现场监控的有效快速筛检手段。     

一种快速检测食用油中黄曲霉毒素B1的胶体金试剂板的研制

为建立用于快速检测粮油样品中黄曲霉毒素B1药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,采用免疫竞争法,将抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体-胶体金复合物包被在微孔中,并将人工合成的黄曲霉毒素B1抗原包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面作为检测线(T线).待测样品中的黄曲霉毒素B1残留物将与NC膜上的黄曲霉毒素B1抗原竞争结合胶体金标记的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体,并以颜色直观显示检测结果.检测食用油样品时,灵敏度可达到0.5 μg/L,仅需20 min.试验证明该检测试剂具有较高的灵敏度及很好的特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为黄曲霉毒素B1残留现场监控的有效快速筛检手段.     

基于HRP标记抗体的黄曲霉毒素M1的直接竞争-ELISA快速检测方法

为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L,检测范围为0.015～4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%,dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中AFM1大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。     

定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留高灵敏度检测卡的研制

研制定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡.在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素M1全抗原作为检测线,以及预包被羊抗鼠二抗作为质控线.将抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫.将样品垫、金标垫、预包被黄曲霉毒素M1的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成试纸条并组装成检测卡.结果表明:该检测卡的检测限为0.5μg/L,对黄曲霉毒素M1的交叉反应率为100％,而与同族的其他物质的交叉反应率小于5％.假阳性率小于5％,假阴性率为0％,检测卡常温储存,保质期18个月.本研究的检测卡,可快速准确地应用于羊奶中黄曲霉毒素M1残留的定性检测,为快速准确地测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留提供了依据.     

基于时间分辨荧光快速定量检测谷物中的T-2毒素

研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的T-2毒素快速定量检测卡,并对其在谷物中的检测性能进行了研究。本研究对标记工艺、划线工艺进行了探索,通过对微球偶联时间、封闭时间等优化,确认了最佳偶联时间为30 min,最佳封闭时间为60 min;通过对NC膜的筛选、划线湿度的摸索,确认了最佳NC膜为140膜,最佳划线湿度为45%～55%。同时,对该T-2毒素快速定量检测卡进行了性能验证：该检测卡的检测限为0.480μg/kg,定量限为1.020μg/kg,添加回收定量范围为1～100μg/kg,准确度86.09%～119.57%,重复性在11.95%以内,交叉反应率<5%。具有快速定量、简单便捷、高灵敏度、高特异性、可靠性强、重复性好等优点,适合对谷物中T-2毒素进行快速定量测定。     

胶体金免疫层析法快速检测黄曲霉毒素B1的研究

本文应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测食品中黄曲霉毒素B1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体并喷于玻璃纤维上,黄曲霉毒素B1偶联抗原和二抗鼠抗驴分别结合于硝酸纤维膜上,依次将样本垫、胶金垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条并装入检测卡中。测试结果表明黄曲霉毒素B1快速检测试纸条的灵敏度为5ng/ml,检测时间为10min,批内和批间重复性为100%,假阳性率和假阴性率均为0。使用简单方便,非常适合现场快速检测黄曲霉毒素B1。     

光化学衍生检测玉米中4种黄曲霉毒素

建立了HPLC-免疫亲和柱净化,柱后光化学衍生检测玉米中4种黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的分析方法。玉米样品提取、浓缩、过滤后经免疫亲和柱净化,液相色谱分离后采用光化学衍生器对黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2进行在线衍生,通过配制荧光检测器的液相色谱同时检测玉米中B1,B2,G1,G2这4种黄曲霉毒素。结果表明,4种黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的色谱分析时间在6~11 min内完成,检测定量限分别为:0.10,0.03,0.10,0.03μg/kg,完全符合并高于欧盟检测标准定量限,通过光化学衍生器在线衍生将B1、G1的分析定量限提高到2.7倍和3.6倍。玉米基质中B1,B2,G1,G2在添加水平为10,3,10,3μg/L时其回收率分别为:90.3%,85.6%,93.5%,92.8%。其线性范围分别为0~20μg/L,0~6μg/L,0~20μg/L,0~6μg/L,RSD分别为2.3%,1.5%,2.7%,3.2%。文章建立了分析玉米中4种黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的分析方法,经验证该方法定性准确,定量灵敏度高,可同时检测出玉米中4种黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2含量。     

抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体细胞株的筛选

研究筛选到抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株,用AFM1-oxim e-BSA偶联物免疫Balb/C小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过3次克隆和亚克隆得到两株稳定分泌抗黄曲霉毒素M1抗体的杂交瘤细胞株,经过检测两株均为IgG1亚类,并且经过鉴定其各项性质均符合标准。     

免疫亲和柱层析-超高效液相色谱法测定动物性食品中6种黄曲霉毒素

目的建立一种快速、灵敏的超高效液相色谱法,同时测定动物性食品中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2。方法甲醇-水(80∶20,V/V)提取粉碎或匀浆动物性食品中的黄曲霉毒素,取部分样液经过免疫亲和柱层析净化,经C_(18)色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.7μm)分离,荧光检测器检测。保留时间定性,峰面积定量。结果5 min内完成分离,黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2检出限分别为0.038、0.010、0.062、0.010、0.110、0.016μg/kg。标准曲线线性范围分别为AFB_1:1.28~20.4μg/L;AFB_2:0.32~5.08μg/L;AFG_1:1.26~20.2μg/L;AFG2:0.31~5.00μg/L;AFM_1:1.25~20.0μg/L;AFM_2:1.25~20.0μg/L,相关性在0.999 7~0.999 9之间。不同浓度水平6种黄曲霉毒素平均加标回收率在73.2%~94.1%之间,精密度在0.2%~3.8%之间。结论该方法可同时、快速、高效、准确测定动物性食品中6种黄曲霉毒素的含量。     

牛奶中6种黄曲霉毒素的3种液相色谱法比较

比较了牛奶中黄曲霉毒素测定的3种液相色谱分析方法。样品经直接稀释、免疫亲和柱净化,以乙腈-甲醇-水体积比(22︰22︰46)为流动相,分别经柱后光化学衍生化、未衍生化及碘衍生化-液相色谱-荧光法进行测定。柱后光化学衍生化,黄曲霉毒素M_2,M_1线性范围为0.02~20μg/L,G_2,B_2 0.005~20μg/L,G_1,B_1 0.01~20μg/L,相关系数≥0.999,定量限为0.000 5~0.002μg/kg,加标回收率79%~116%;柱后碘衍生化,M_2,M_1线性范围分别为0.02~20,0.05~20μg/L,其余4种均为0.01~20μg/L,相关系数≥0.999,定量限0.001~0.005μg/kg,回收率74~121%;未经衍生化直接进样,G_2,B_2线性范围0.005~20μg/L,其余4种为0.02~20μg/L,相关系数≥0.998,定量限0.000 5~0.003μg/kg,回收率82%~121%。结果表明,柱后光化学衍生测定6种黄曲霉毒素在线性范围、灵敏度和定量限等方面均具有优势。