白果蛋白的提取分离及其等电点的测定

以白果为原料,经过筛选去壳、低温烘干、粉碎过筛和脱脂步骤制取脱脂白果粉,并采用碱提酸沉法从脱脂白果粉中提取白果蛋白,以测定白果蛋白水分、粗脂肪、粗蛋白、淀粉、粗纤维等主要化学成份,白果蛋白的水溶性、盐溶性、醇溶性、碱溶性、不溶性蛋白组分含量及其等电点。试验结果表明:白果中的蛋白质含量达到80.36%,纯度基本可以满足功能特性的需要,并且以水溶蛋白和盐溶蛋白为主,占总蛋白量的85.28%,含有少量的醇溶蛋白和碱溶蛋白;粗脂肪、淀粉、粗纤维、水分分别占白果蛋白的2.65%、3.00%、1.14%和9.82%。白果蛋白等电点为4.0,与花生蛋白、大豆蛋白、蚕豆蛋白、榛子蛋白等植物蛋白等电点相近。     

白果分离蛋白、清蛋白和球蛋白功能特性的热稳定性

对白果分离蛋白(GPI)、白果球蛋白(GGP)和白果清蛋白(GAP)的功能特性在不同温度处理下的变化进行了研究。结果表明:不同温度对3种白果蛋白功能特性的影响趋势基本一致,在25⁵5℃处理后,3种白果蛋白的溶解性、吸水性、起泡能力和泡沫稳定性均得到显著增加,在55℃达到最大,温度再升高则产生不利的影响;吸油性则在5555℃处理后,3种白果蛋白的溶解性、吸水性、起泡能力和泡沫稳定性均得到显著增加,在55℃达到最大,温度再升高则产生不利的影响;吸油性则在55⁷5℃内呈快速增长,超过75℃,吸油能力反而下降;就乳化容量而言,GAP在55℃、GPI和GGP在65℃升至最高,再升高温度,蛋白质乳化容量下降;加热处理对白果蛋白质乳化稳定性的影响较大,随着温度的升高乳化稳定性均下降。GPI、GGP和GAP 3种蛋白质的变性温度分别为86.17、88.57℃和79.23℃,白果蛋白在高温功能特性下降可能与蛋白质变性密切相关。通过适度加热蛋白质溶液(5575℃内呈快速增长,超过75℃,吸油能力反而下降;就乳化容量而言,GAP在55℃、GPI和GGP在65℃升至最高,再升高温度,蛋白质乳化容量下降;加热处理对白果蛋白质乳化稳定性的影响较大,随着温度的升高乳化稳定性均下降。GPI、GGP和GAP 3种蛋白质的变性温度分别为86.17、88.57℃和79.23℃,白果蛋白在高温功能特性下降可能与蛋白质变性密切相关。通过适度加热蛋白质溶液(55⁷5℃),可使白果蛋白质的功能特性得到显著的改善。     

白果蛋白质提取及SDS-PAGE分析

以白果为原料,采用不同的原料处理及蛋白质提取方法,运用单因素和正交设计的方法,以料液比、提取时间、提取液浓度、提取液pH 值为考察因素,研究白果蛋白质提取的最佳工艺条件,并对提取的白果蛋白进行SDS-PAGE 凝胶电泳分析。结果表明：经过冷冻干燥处理的白果采用Tris-HCl 提取法获得的白果蛋白含量较高;Tris-HCl 法提取白果蛋白的最佳工艺为pH8.5、0.15mol/L Tris-HCl 溶液、料液比1:20(g/mL)、提取时间4h,白果蛋白质的提取率达到75.01%。白果蛋白SDS-PAGE 分析表明,白果蛋白中约含13 条亚基,主要为21kD 和32kD 的两种亚基,白果蛋白的亚基主要集中在31～100kD,占亚基总数的77%。     

中国典型水果过敏原蛋白研究进展

随着我国人民生活水平不断提高,水果消费量也在逐年增加,水果过敏问题因此也日益凸显。水果是十大食物过敏来源之一,水果过敏与自身遗传、环境和水果种类等多种因素相关,常和花粉、乳胶发生交叉过敏反应。水果过敏常见的症状有口腔过敏综合症和全身过敏反应。水果过敏发生的主要原因是由于水果中某些蛋白质使患者的免疫系统发生紊乱,属于I型速发型过敏反应。本文首先阐述水果过敏的发生机理、临床数据和症状、以及过敏原命名方式。其次以我国常见的引发过敏反应的特色水果为例,涵盖热带水果、蔷薇科水果和亚热带水果,总结过敏相关蛋白家族最新研究进展,并对现阶段常用的水果过敏原蛋白分子鉴定及检测技术进行综述。     

白果清蛋白的免疫调节活性研究

目的:探讨白果清蛋白(GAP)对正常小鼠的免疫调节作用。方法:体内分别进行了对正常小鼠免疫器官的影响实验,非特异性的碳粒廓清作用实验,体液免疫的血清半数溶血值(HC50)实验以及细胞免疫的二硝基氟苯诱导小鼠迟发性变态反应(DTH)实验;采用MTT法测定体外T、B淋巴细胞增殖作用,乳酸脱氢酶法(LDH)测定NK细胞对肿瘤靶细胞杀伤作用,胸腺细胞增殖法测定GAP对细胞因子白细胞介素-2(IL-2)活性的影响。流式细胞术测定GAP对T淋巴细胞亚群的影响。结果:GAP能增加正常小鼠免疫器官的胸腺指数和脾脏指数,能显著的增强正常小鼠的巨噬细胞吞噬能力和DTH反应,促进血清溶血素的形成;GAP能促进活化和未活化的T、B淋巴细胞增殖,增强NK细胞的细胞毒作用及刺激脾淋巴细胞IL-2的分泌;提高L3T4+细胞百分率(%)、Lyt2+细胞百分率(%)及L3T4+/Lyt2+细胞比值。结论:白果清蛋白能显著增强小鼠的免疫调节作用。     

乳清蛋白酶解控制及抗蛋白过敏研究

婴幼儿食用配方奶粉可能导致蛋白过敏,采用乳清蛋白酶解控制产物,可显著降低或者消除过敏。在获得酶解产物基础上,用180～220gSD大鼠做被动皮肤过敏试验(PCA),观察乳清小肽及其婴儿配方奶粉对被动皮肤过敏大鼠的蓝斑面积、蓝斑光密度(OD)值的影响。结果表明,以酶解度和苦味值为主、辅指标,最佳酶解条件是:时间5.0h、温度55℃、初始pH7.0、E/S0.05。给予0.2g/kg、0.4g/kg乳清小肽和4.0g/kg含10%乳清小肽婴儿配方乳粉,能显著降低大鼠蓝斑OD值和面积(P<0.01);而给予4.0g/kg婴儿配方乳粉,能略微提高大鼠蓝斑OD值和面积(P>0.01),说明乳清小肽具有抑制大鼠被动皮肤过敏反应的作用。     

亲和层析快速提取白果和大豆的抗氧化蛋白

用环氧氯丙烷活化法把血红素结合于惰性分子筛填料SephadexG-25上作为配基做成亲和层析柱,用于从白果或大豆中提取具有抗氧化活性的蛋白。此层析柱以去离子水为平衡液、0.2mol/L的NaAc-HAc缓冲液(pH3.6)为洗脱液,层析得到的蛋白经亚油酸-硫氰酸钾抗氧化活性测定证明具有较高的抗氧化活性。白果全蛋白的抗氧化活性为7.92%,经此方法提纯后得到2种抗氧化多肽,活性达到17.45%;而大豆中的抗氧化蛋白经纯化则得到多种,抗氧化活性由全蛋白时的10.52%提高至30.72%。这是一个新的、只需一个步骤即可从白果或大豆蛋白提取液中提取到具有高抗氧化活性蛋白的方法,具有成本低,快速高效的特点。     

亲和层析快速提取白果和大豆的抗氧化蛋白

用环氧氯丙烷活化法把血红素结合于惰性分子筛填料SephadexG-25上作为配基做成亲和层析柱,用于从白果或大豆中提取具有抗氧化活性的蛋白。此层析柱以去离子水为平衡液、0.2mol/L的NaAc-HAc缓冲液（pH3.6）为洗脱液,层析得到的蛋白经亚油酸-硫氰酸钾抗氧化活性测定证明具有较高的抗氧化活性。白果全蛋白的抗氧化活性为7.92%,经此方法提纯后得到2种抗氧化多肽,活性达到17.45%;而大豆中的抗氧化蛋白经纯化则得到多种,抗氧化活性由全蛋白时的10.52%提高至30.72%。这是一个新的、只需一个步骤即可从白果或大豆蛋白提取液中提取到具有高抗氧化活性蛋白的方法,具有成本低,快速高效的特点。      

四道口海白虾过敏蛋白纯化方法的研究

优化了四道口海白虾过敏蛋白的纯化方法。结果表明:传统的虾脱脂方法一般采用丙酮法,但丙酮法脱脂时间长、脱脂不彻底。本实验采用石油醚脱脂,可大幅度缩短脱脂时间,且脱脂效果良好;四道口海白虾过敏蛋白最佳的硫酸铵盐析浓度为30%;脱脂、盐析后的虾蛋白冻干粉经葡聚糖凝胶G-100分离后,可得到电泳纯的虾过敏蛋白。      

四道口海白虾过敏蛋白纯化方法的研究

优化了四道口海白虾过敏蛋白的纯化方法.结果表明:传统的虾脱脂方法一般采用丙酮法,但丙酮法脱脂时间长、脱脂不彻底.本实验采用石油醚脱脂,可大幅度缩短脱脂时间,且脱脂效果良好;四道口海白虾过敏蛋白最佳的硫酸铵盐析浓度为30%;脱脂、盐析后的虾蛋白冻干粉经葡聚糖凝胶G-100分离后,可得到电泳纯的虾过敏蛋白.     

高静压协同酶法处理对白果蛋白抗原性的影响

本文研究了高静压结合酶解处理对白果蛋白抗原性的影响,分别采用4种蛋白酶水解白果蛋白,水解前分别采用不同压力的高静压对白果蛋白进行预处理,酶解产物水解率和分子量采用OPA法和SDS-PAGE测定,致敏性采用western-blotting和ELISA法测定。结果表明,木瓜蛋白酶,碱性蛋白酶或胃蛋白酶为水解酶时,高静压能显著提高白果蛋白的水解率和降低其致敏性;而中性蛋白酶为水解酶时,白果蛋白的水解和脱敏效果很差,即使高压处理也未见明显提高。木瓜蛋白酶或碱性蛋白酶在处理压力为300 MPa时,而胃蛋白酶在400 MPa时,其水解和脱敏效果最好,在此条件下白果蛋白能被水解为分子量小于15 ku的多肽,95%以上的白果蛋白致敏性能被消除,酶解产物中致敏蛋白条带全部消失。因此,高静压处理能明显提高蛋白酶对白果蛋白的水解效率和脱敏效果,但是取决于选择的蛋白酶种类和处理压力的大小。     

芝麻过敏原的分离、鉴定与纯化

通过SDS-PAGE电泳分离芝麻的蛋白质组份,采用免疫印迹(Westem-blotting方法其鉴定过敏原,通过离子交换层析对芝麻主要过敏原进行初步纯化.结果表明白芝麻粗提液SDS-PAGE显示有14条蛋白条带.黑芝麻粗提掖SDS-PAGE显示有16条蛋白条带.Western-Blotting显示对芝麻过敏患者的混合阳性血清均能与黑芝麻、白芝麻11 ku蛋白反应,离子交换层析可初步纯化出白芝麻11 ku的过敏原蛋白.     

处理方法对大豆致敏蛋白的影响

Gly m Bd 30K、Gly m Bd28K和β-伴大豆球蛋白的α亚基(MW68K)是大豆中的主要致敏蛋白，本文对经过不同处理的大豆进行SDS-PAGE电泳，结果显示，结合盐析和pH值处理可以有效去除Gly m Bd 30K和Glym Bd28K，但要同时去除三种致敏蛋白还需进一步研究。     

腰果过敏蛋白Anao2与Anao3结构分析及致敏性预测

为了解腰果主要过敏蛋白的分子结构及过敏性特征,通过有机溶剂脱脂、盐析、透析、葡聚糖凝胶Sephadex G-150分离纯化得到腰果主要过敏蛋白,采用紫外分光光度计、BCA定量试剂盒、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、蛋白质免疫印迹(Western-Blotting)等手段检测腰果过敏蛋白及评价其免疫...     

银杏种仁酚酸的纯化、鉴定及其抑菌活性分析

以银杏种仁为材料,采用乙醇浸提、石油醚萃取的方法提取酚酸,研究银杏种仁酚酸硅胶柱层析纯化工艺。采用液相色谱(HPLC)及液-质联用(LC-MS)分析银杏种仁中酚酸的组成及含量。以2种细菌及4种真菌为供试菌,比较银杏种仁酚酸的抑菌活性,并确定其对各菌种的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,以流速为1.2 m L/min的石油醚-乙醚-甲醇(89∶11∶1,V/V/V)为洗脱液,对银杏酚酸粗提物进行硅胶柱层析纯化,取得较好的纯化效果。HPLC及LC-MS分析表明:银杏酚酸主要由C13∶0,C15∶1,C17∶2,C15∶0和C17∶1等5种酚酸组分组成。以C13∶0,C15∶1,C17∶1计,银杏种仁中的酚酸含量为0.11 g/kg脱脂干粉,其中C13∶0,C15∶1,C17∶1的含量分别为0.013 g/kg脱脂干粉、0.042 g/kg脱脂干粉、0.055 g/kg脱脂干粉。抑菌试验表明,银杏酚酸对供试的2种细菌(大肠杆菌和枯草芽孢杆菌)以及4种真菌(青霉、产紫青霉、沙门柏干酪青霉、黑曲霉)有抑制作用。银杏酚酸对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及青霉菌有较好的抑菌效果,其MIC分别为7.5,15和25 mg/m L。     

大豆致敏蛋白的识别

我国是大豆的种植大国，但对大豆致敏蛋白的识别却一直没有进行过，本文就是利用大豆过敏患者的血清识别不同品种大豆致敏蛋白的组成，除已被发现的7S(β-伴大豆球蛋白)外，还识别到一种分子量85．3kDa的强致敏蛋白，同时发现，品种间的差异蛋白都有可能成为新的致敏蛋白。     

Effects of Enzymatic Hydrolysis Assisted by High Hydrostatic Pressure Processing on the Hydrolysis and Allergenicity of Proteins from Ginkgo Seeds

The purpose of this work was to study the combined effect of high hydrostatic pressure (HHP) and enzymatic hydrolysis treatment on the hydrolysis and allergenicity of ginkgo seed proteins (GSPs). Four food-grade proteases (papain, alcalase, pepsin, and neutrase) were used, and HHP (200, 300, and 400 MPa separately) was applied prior to hydrolysis. The extent of hydrolysis was measured with the o-phthaldialdehyde method, SDS-PAGE, and MALDI-TOF-MS, and the allergenicity was assessed with a Western blot and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results showed that HHP could significantly improve the extent of proteolysis by papain, alcalase, or pepsin and reduce the antigenicity of GSP, whereas neutrase showed poor effects at any pressure. Papain and alcalase showed the highest proteolysis at 300 MPa, followed by pepsin at 400 MPa, and all of the obtained hydrolysates showed molecular weights lower than 10 kDa; furthermore, papain or alcalase at 300 MPa as well as pepsin at 400 MPa reduced antigenicity by more than 95 %, and all of the immunoreactive bands disappeared in the obtained hydrolysates. These results suggest that HHP can enhance the hydrolysis of GSP by certain enzymes and reduce the residual antigenicity of the hydrolysates. The obtained hypoallergenic hydrolysates could be used as a source of peptides for food ingredients.     

Beneficial Influence of Short‐Term Germination on Decreasing Allergenicity of Peanut Proteins

Most allergenic storage proteins in peanuts are degraded during seed germination. By altering this natural physiological process, it might be possible to reduce peanut protein allergenicity. However, little is known about the change in allergenic proteins and their corresponding immunocreactivity, and the effects of major environmental conditions on their allergenicity during germination. In this study, the influence of different germination conditions (temperature and light) on the degradation of Ara h1 and allergenicity changes of peanut seeds was evaluated by ELISA and Western blotting. The results showed that the 40‐ and 65‐kDa proteins in peanut seeds degraded rapidly during the time course, beginning at 60 (at 25 °C) and 108 h (at 20 °C), and the corresponding immunocreactivity of Ara h1 decreased approximately one‐third after 5 to 7 d of germination. Compared with the cotyledons, the embryonic axes had a higher proportion of Ara h1, which was then degraded relatively faster during germination, resulting in a significant reduction in its allergenicity. Although a higher temperature improved the seed germination rate, it affected sprout quality (as did light); therefore, 25 °C and dark surroundings were suitable conditions under which peanut sprouts were processed; neither factor significantly affected the allergenicity of Ara h1. These results provided a theoretical basis for studies using biological methods to reduce peanut allergenicity.