基于液相色谱-质谱的代谢组学方法研究卷柏治疗高尿酸血症大鼠的作用机制

采用基于超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间质谱（UPLC-ESI-QTOF/MS）的代谢组学方法研究卷柏治疗高尿酸血症大鼠的作用机制,运用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）方法对健康对照组、高尿酸血症模型组和卷柏组的大鼠尿液中内源性代谢物进行分析,寻找卷柏治疗高尿酸血症大鼠的潜在生物标记物。结果表明,经PCA和OPLS-DA分析后,健康对照组、高尿酸血症模型组和卷柏组的大鼠尿液代谢物谱能得到有效地区分;发现并鉴定了9个潜在生物标记物,分别为尿酸、尿囊素、黄尿酸、犬尿酸、硫酸吲哚酚、马尿酸、肌酐、富马酸和柠檬酸。卷柏对高尿酸血症大鼠的治疗主要体现为对嘌呤代谢、色氨酸代谢、三羧酸循环、精氨酸和脯氨酸代谢以及苯丙氨酸代谢的调节作用。同时,通过检测血清生化指标,表明卷柏能降低高尿酸血症大鼠的血尿酸水平,并起到保护肾脏的作用。     

液液萃取-气相色谱法测定尿液中的可卡因

目的:建立人体尿液中可卡因的快速提取及气相色谱-氢火焰离子化(GC-FID)检测方法。方法:用0.05 mol/L碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液调节尿液pH9.5,提取溶剂:氯仿∶异丙醇=9∶1(体积比),液-液萃取10 min,气相色谱分析。结果:方法的平均回收率为84%,检出限50ng/mL,线性范围0.1～15μg/mL,精密度小于5.47%。结论:该方法可快速、准确进行可卡因滥用者的尿液分析。     

可在数秒内检测出一滴尿液中的VOCs的质谱技术

近期,中科院合肥物质科学研究院医学物理中心光谱质谱研究室在体液检测方面取得进展,发展了超声雾化萃取-质子转移反应质谱（UNE-PTR-MS）技术,可实现对一滴尿液中挥发性有机物（VOCs）的高灵敏快速检测,研究结果发表在Analytical Chemistry（DOI：10.1021/acs.analchem.7b04563）上。尿液VOCs反映着人体代谢状况或疾病特征,之前的尿液VOCs测量方法存在着一些缺陷：要么速度慢,要么尿液用量大。为此,     

近红外光谱法用于尿液多成分分析

尿液分析在临床检验中是一个重要的检测项目 ,红外光谱法的应用将可实现无试剂的尿液快速分析。介绍了采用光谱法对尿液样品主成分进行的近红外分析 ,实验中对最佳光程长作了选择与计算。实验结果证实了近红外光谱法用于尿液临床分析的可行性及优越性。     

近红外光谱法尿液多成份分析

尿液分析在临床检验中是一项重要的检测项目，红外光谱法的使用将实现无试剂的尿液快速分析。本论文叙述了应用光谱法进行近红外分析，实验过程中进行了最佳光程长的选择与计算，对尿液样品进行了主成份分析。证实了光谱法用于尿液临床分析的可行性及优越性。     

离子色谱法测量尿液中镁含量的相关研究

目的:建立离子色谱法测量尿镁的方法。方法:采用Metrohm-883离子色谱检测人体新鲜尿液标本中镁的含量。使用2.0mmol/L浓硝酸为淋洗液,采用Metrosep C4-150/4.0阳性色谱柱电导检测。样本经离心、C18柱预处理、0.25μm滤过膜过滤后直接进样。结果:本法测量尿液中镁离子标准曲线的相关系数为0.999986,检出限为0.049mg/L,精密度高(RSD为0.624054%)。结论:与传统化学分析方法相比,离子色谱法准确、快速地测量尿镁;并同时测量了尿钠、尿钾、尿钙,此法适用于临床对尿结石患者进行尿液成石危险因素的代谢评估。     

合成大麻素ADB-BUTINACA在人体尿液及体内外代谢模型中的代谢比较

本研究采用液相色谱-高分辨质谱法分析人体尿液样本、斑马鱼体内代谢模型以及肝微粒体体外代谢模型中N-(1-氨甲酰基-2,2-二甲基丙基)-1-丁基吲唑-3-甲酰胺(ADB-BUTINACA)的代谢情况。结果表明，共检测到45个ADB-BUTINACA代谢物，包括37个Ⅰ相代谢物和8个Ⅱ相代谢物，涉及9种代谢途径，其中有7个Ⅰ相代谢物为首次报道。通过对比代谢模型和人体尿液样本中的代谢物发现，斑马鱼体内代谢模型产生的代谢物更接近人体尿液样本，但无论是体内还是体外代谢模型，其代谢物排名与人体尿液样本具有较大差异，仅凭体内外代谢模型得到的代谢物数据难以直接用于真实样本的分析。通过对人体尿液样本中代谢物峰面积排名分析，建议将ADB-BUTINACA原型、M36、M19以及M16作为ADB-BUTINACA的生物标志物。     

人尿中stenebolone代谢物的气相色谱-质谱测定

采用常规兴奋剂甾体药物的尿液提取方法,建立了气相色谱-质谱法研究甾体类药物stenebolone的检测方法。通过受试者尿液与其空白尿液对照,依据甾体类药物在人体内代谢的规律,检出十种代谢物,测定了代谢曲线,并建立了相应的常规检测方法。     

用HPLC、LC/MS方法检测人尿中Viagra及其代谢物

建立了人体尿液中viagra及其代谢产物的HPLC、LC MS检测方法 ,确认了志愿受试者服用viagra的尿液中的代谢产物 ,并对viagra原体及其羟基化代谢物在尿液中的消除进行了研究。结果表明 :viagra服用者尿液中检出三种代谢产物 ,其中尤以羟基化代谢物量为最大 ;viagra原体及羟基化代谢物的检出时限分别为 2 4小时和 3 6小时。     

离子色谱-DC直流安培检测测定尿液中的2,4-和2,6-二异氰酸甲苯酯

1 引言 芳香族异氰酸酯是聚氨酯橡胶(PUR)预聚体的主要成分,PUR经常用于生产人造橡胶,软硬泡沫,胶粘剂等.2,4-和2,6-TDI是最常用的单体异氰酸酯.长期暴露在异氰酸酯环境中对人体危害很大.在高浓度TDI的环境中容易产生易怒的黏膜,引起哮喘和会对肺功能无法挽回的伤害.因此需要建立一个简单,快速,可靠的方法测定TDI.对于TDI的测定以前已经有过很多报道.但未见离子色谱-DC直流安培检测同时测定尿液中2,4-和2,6-TDI.TDI在常温下不是很稳定,而其相应的TDA要稳定的多,而且TDI在酸性条件下能完全转化为TDA.因此我们可以通过检测水解后尿液中的TDA来测定TDI的含量.本文通过对TDA进行分离测定来检测其相应的TDI,建立了离子色谱-DC直流安培检测测定2,4-、2,6-TDI的方法.     

中红外衰减全反射法用于尿液成分检测

本文中采用中红外衰减全反射光谱法进行尿液中主要成分的快速、无试剂检测。对单质成分及尿液样品的光谱进行了相应分析,采用偏最小二乘法建立了中红外光谱信息与葡萄糖及白蛋白成分含量间的定量校正模型,并采用遗传算法进行了模型的优化。葡萄糖的预测精度(RMSEP)达到28.57mg/dL, 白蛋白的RMSEP达17.89mg/dL,表明该方法可逐步代替传统方法用于临床检测。     

HPLC-ESI-LTQ-Orbitrap分析芪归银方中黄酮成分体内代谢过程

为进一步明确芪归银方的药效物质基础,采用HPLC-ESI-LTQ-Orbitrap技术对大鼠灌胃芪归银方后血清中黄酮类活性成分进行表征,并通过鉴别其尿液及粪便中的代谢物对结果进行佐证。从含药血清中鉴定出8个黄酮类化合物,其中,芹菜素-6,8-二葡萄糖苷和芹菜素以原型入血,芒柄花素、木犀草素、毛蕊异黄酮、5,7,4′-三羟基黄酮醇-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷等6个化合物以Ⅱ相代谢产物入血;从尿液中鉴定出9个黄酮类成分,包括6个入血成分的相应代谢产物;从粪便中检出3个黄酮类化合物的原型形式,未检测到与入血成分相同的成分。实验结果显示,芪归银方中的黄酮类入血成分大部分是经肾脏代谢排出,这可为阐明芪归银方延缓耐药的药效物质基础提供依据。     

反相液相色谱法测定血清中L-色氨酸及其代谢产物

建立了反相高效液相色谱一紫外检测法同时测定血清中L-色氨酸、5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的方法。血清中L-色氨酸、5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸的添加回收率分别为：92．1％，90．8％和71．1％。该法快速准确、灵敏度高，且重现性好。     

黏多糖病患者尿液α1-抗胰蛋白酶含量的研究

目的研究黏多糖病(MPS)患者尿液中α1-抗胰蛋白酶(α1-AT)含量,探讨尿液α1-AT含量与MPS的关系。方法选取2015年3月~2016年6月在解放军总医院儿童医学中心确诊的MPSⅠ型患者18例(MPSⅠ组),MPSⅡ型患者11例(MPSⅡ组)和本院查体人员30例(健康对照组),收集晨尿,运用ELISA和Western Blot方法检测尿液中α1-AT含量。结果用ELISA方法检测MPSⅠ组尿液α1-AT/Cr比值为(57.65±10.43)mg/mmol,MPSⅡ组为(55.89±7.43)mg/mmol,健康对照组为(33.32±3.59)mg/mmol,MPSⅠ组、Ⅱ组均显著高于健康对照组(P0.05),用Western Blot方法进行验证,结果与ELISA方法相一致。结论α1-AT含量在MPS患者尿液中升高,可作为MPS辅助诊断指标。     

基于液相色谱-质谱联用及~(19)F核磁成像技术测定一种新型氟类化合物

(2-甲基丙烯酸乙酯)-N-(3,3,3-三氟丙基)-N-甲基甘氨酸(CBF_3)是本团队新合成的一种~(19)F核磁成像基团。本研究结合液相色谱-质谱联用方法对低浓度样品检测灵敏度高的特点,建立了CBF_3液相色谱-质谱联用检测标准曲线,并进行了低、中、高3个浓度组CBF_3的提取回收率和精密度等方法验证。结果表明采用液相色谱-质谱联用方法检测CBF_3在浓度范围10μg/L～1000μg/L内线性关系良好,相关系数(R)大于0.995,方法定量限为10μg/L;日内精密度和日间精密度(RSD)、提取回收率均符合生物样品的分析要求。为研究CBF_3在活体内的代谢情况,在小鼠给药后不同时间点,采用液相色谱-质谱联用方法进行血清CBF_3浓度的定量分析,分析结果显示给药45min后血清CBF_3浓度迅速下降;同时我们还采用~(19)F核磁成像技术检测小鼠肝脏、肾脏和膀胱组织中的CBF_3信号,并证明该化合物一部分可通过肝脏代谢,绝大部分经过肾脏代谢,随尿液形成蓄积在膀胱中,最终通过尿液排出体外的代谢途径。     

磁珠分离结合质谱分析黏多糖病Ⅰ型患者尿液多肽谱

目的研究黏多糖病Ⅰ型(MPSⅠ)患者尿液小分子多肽谱,寻找对MPSⅠ型诊断的新方法。方法利用弱阳离子磁珠纯化(magnetic beads based weak cation exchange chromatography,MB-WCX)系统结合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)的方法,检测8例于解放军总医院儿童医学中心确诊的MPSⅠ型患者(疾病组)和10例本院查体人员(健康对照组)的尿液标本,获得尿液小分子多肽谱,应用Clin Prot TM软件进行数据分析,找出差异多肽峰,并绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),对比曲线下面积(AUC)、敏感度和特异性。结果质荷比1000-10000之间,两组尿液标本共筛选出7个具有统计学差异(P0.05)多肽差异峰。其中在疾病组中表达上调的有4个峰,表达下调的3个峰。AUC面积大于0.9的多肽质荷比为:1069.6(0.982)和3217.3(0.946),两者的特异性均为87.4%,敏感性均达到100%。结论 MB-WCX联合MALDITOF-MS检测技术可获得MPSⅠ型患者和健康人的尿液差异多肽谱,为MPSⅠ型辅助诊断提供了一种无创的新方法。     

气相色谱-质谱法检测人尿中的羟乙基淀粉

应用气相色谱 -质谱法 ( GC/MS)研究新增兴奋剂掩蔽类药物羟乙基淀粉 ( Hydroxye-thyl Starch) ,根据保留时间和特征离子 ,在受试者的尿液中 ,检出 3 -羟乙基单葡萄糖、2 -羟乙基单葡萄糖和 6-羟乙基单葡萄糖等三种代谢物 ,并建立了系统的检测方法     

液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱鉴定赛拉嗪在人尿中的代谢产物

为研究赛拉嗪在人体内的代谢产物,采用液-液萃取法和蛋白沉淀法对赛拉嗪阳性尿液进行前处理,利用液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱（LC-Q-Orbitrap MS）技术,在HESI-Ⅱ正离子模式下分析,利用Compound Discoverer 软件对赛拉嗪代谢产物进行质谱解析。结果表明,赛拉嗪在人体内的主要代谢途径包括羟基化、氧化、N-脱烷基化、S-氧化成砜与葡萄糖醛酸及硫酸的结合等,在人尿液中共检测到13个代谢产物。本工作初步阐明了赛拉嗪在人体内的代谢途径以及主要代谢物。     

液相色谱-串联质谱法测定尿液中的可替宁

为了准确测定吸烟者与非吸烟者尿液中可替宁含量水平,建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）测定方法。尿液经稀释、离心和过滤,引入LC-MS/MS,经Agilent Zorbax Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（150 mm×2.1 mm,3.5 μm）分离,以0.1% 甲酸水溶液0.1% 乙酸甲醇溶液为流动相,采用梯度洗脱方式,以电喷雾离子源正离子多反应监测模式进行分析。方法检出限为0.08 μg/L,线性范围为1~500 μg/L,空白样品中加标回收率范围在94.3%~99.9%,精密度（以相对标准偏差计）为0%~3.2%。利用此方法检测了58个非吸烟者和246个吸烟者尿液中可替宁的含量水平,结果表明：吸烟者24 h尿液中的可替宁含量是非吸烟者的180多倍,但是由于个体之间以及吸烟行为之间的差异,尿液中的可替宁含量并不随卷烟主流烟气中烟碱含量的升高而升高。     

尿中葡萄糖含量的近红外光谱快速测量

本文研究了采用近红外光谱技术检测尿液中葡萄糖含量的方法。讨论了采用偏最小二乘法(PLS)建立校正模型过程中数字滤波预处理方法以及利用遗传算法优选波段。尿液中的葡萄糖含量的最佳测量结果RMSEP为10．4mg／dL。结果表明，近红外光谱法可以满足尿液主要成分的实际测量要求。这些实验研究将为糖尿病等相关疾病的无损、快速检测提供一种新的方法。