G-四联体与聚合酶链式反应联用可视化检测沙门氏菌

建立对沙门氏菌的G-四联体与聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）联用可视化检测方法。以沙门氏菌属特异性基因invH为检测目标，设计5’端含有G-四联体互补序列的上下游引物，通过PCR的特异性识别并扩增目标序列，获得大量含G-四联体的双链DNA，变性后与氯高铁血红素结合生成具有过氧化物酶活性的模拟酶（DNAzyme），并催化H2O2与2,2’-联氮-双(3-乙基-苯并噻唑琳-6-磺酸)二胺盐由无色变为绿色，实现G-四联体与PCR联用对沙门氏菌的可视化检测。在优化的检测体系下，沙门氏菌基因组的质量浓度对数与421 nm处的吸光度具有良好的线性关系，其回归方程为y=0.129 9x＋0.217 9，R2=0.994 5，线性范围0.07～771.6 ng/μL，灵敏度为0.07 ng/μL。特异性分析表明：此方法适用于沙门氏菌属的检测，可成功应用于人工污染沙门氏菌牛奶的检测，检出限为1.2×102 CFU/mL。通过检测30 种市售样品，发现其结果与国标检测方法结果一致。本研究为食源性致病菌的检测提供了新的策略。     

注重多学科交叉,探索新农村建设道路——以河北省保定市新市区南奇村规划为例

通过对南奇村的规划研究,提出单一的城市规划学科是不能完成一个完善的村镇规划的,只有通过多学科的交叉,将农业生产与村庄建设有机地结合,使生产、生活构成一个绿色链条,才能使村镇规划更具有合理性.     

G-四链体与As-PCR联用可视化检测沙门氏菌

沙门氏菌是食源性病原菌，常在食品媒介中传播，因此快速检测是控制该病原菌的关键。本研究用沙门氏菌基因组DNA作模板，通过对不对称PCR(As-PCR)扩增条件的优化，证明当非限制性引物HF终浓度0.4 μmol/L，与限制性引物GR终浓度比10∶1、退火温度58 ℃，扩增40个循环时可获得最大浓度的单链DNA(ssDNA)产物。带有G-四链体序列的ssDNA与40 μmol/L氯化血红素作用60 min时，G-四链体显示出最高的过氧化物酶活性。在此基础上，将As-PCR和G-四链体联用，实现了可视化检测沙门氏菌invH基因，在2 pg/μL~258 ng/μL的质量浓度区间，质量浓度对数与吸光值A421nm呈线性关系(y = 0.0691x + 0.3085，R2 = 0.9729)。对污染的牛奶样品检测，检出灵敏度高，为35 CFU/mL，且操作便捷，为病原微生物检测提供了新技术支撑。     

基于G-四链体的PCR-RCA双重扩增技术检测沙门氏菌

将聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）与滚环扩增技术（rolling circle amplification,RCA）联用,并把G-四链体互补序列嵌入到RCA扩增所需的哑铃环状模板上,通过PCR和RCA的双重扩增及特异性结合G-四链体的硫黄素T荧光信号增强的作用,达到基于G-四链体的PCR-RCA技术检测沙门氏菌（Salmonella）的目的。在优化的检测体系下,确定了沙门氏菌基因组DNA浓度对数与486 nm波长处的荧光信号强度具有良好的线性关系,回归方程为y=2.101x＋2.872 3（R2=0.992 5）,线性范围为17 fg/μL～1.7 ng/μL。根据实验的特异性分析,表明此方法适用于沙门氏菌属的检测,对人工污染沙门氏菌牛奶样品进行检测,检出限为4.28 CFU/mL。该方法具有特异性强、灵敏度高、检出限低等优点,为实现食源性致病菌的快速检测提供新的方法。     

G-四链体特性及其基于核酸辅助检测方法的研究进展

G-四链体(G-quadruplex)是多聚鸟嘌呤(G)重复序列通过Hoogsteen氢键配对形成的由四链构成的非典型二级结构,可与氯化血红素(hemin)结合,形成具有类似过氧化物酶活性的脱氧核酶,可使其底物显色,或改变某些染料的荧光强度,起到生物传感器的作用.G-四链体作为功能性核酸,以其稳定、灵敏、特异性强等优势...