基于化学修饰法探讨脂肪酶对手性伯醇的识别机理

洋葱假单胞菌脂肪酶（PcL）催化多种手性伯醇酯的不对称水解反应显示其对结构中含有额外的非酯键氧原子的手性伯醇酯的对映体选择性较高,而对不含额外氧原子的选择性差。分别用多种氨基酸残基特异性的修饰剂修饰 PcL,结果发现经 N-乙酰咪唑（NAI）修饰酪氨酸残基（Tyr）后 PcL 对含额外非酯键氧原子的手性伯醇酯对映体选择性显著降低,而对不含额外氧的伯醇酯选择性几乎不受影响。蛋白质谱证实产生主要影响的是位于 PcL 活性口袋内的 Tyr29 残基,手性伯醇酯能否与 Tyr29 形成额外氢键决定了 PcL对其选择性。分子动力学模拟表明,Tyr29被修饰的 PcL 不能与底物形成氢键,因此选择性明显下降。这一发现成功揭示了脂肪酶对手性伯醇对映体选择性的分子识别机理。     

葛根、藤茶、玉米低聚肽复合组方对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用

研究葛根、藤茶、玉米低聚肽复合组方的解酒功能和保护肝脏活性。通过动物行为学实验,研究对比葛根、藤茶、玉米低聚肽单独使用及其联合使用的解酒效果,结果表明,与模型组比较,葛根、藤茶、玉米低聚肽复合组方能显著延长小鼠的醉酒时间至(55.14±20.97)min,缩短醒酒时间至(75.88±23.28)min(p0.05),明显改善醉酒小鼠的行为学指标。通过建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,测定血清及肝组织生化指标,观察肝组织病理变化以及检测肝组织蛋白表达水平,研究复合组方的保肝作用,结果表明,与模型组比较,复合组方能够减轻酒精对小鼠肝细胞的损伤,显著使肝损伤模型小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性及肝组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量分别降低至(17.09±6.26)U/L,(21.41±6.80)U/L和(2.46±0.31)nmol/mg,肝组织中还原型谷胱甘肽(glutathione reduced,GSH)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分别增加至(8.80±2.14)nmol/mg和(241.99±35.60)U/mg(p0.05),改善肝组织病理形态变化,下调肝组织中NF-κB、TNF-α表达。这表明复合组方具有解酒保肝作用,其作用机理可能与抗氧化活性、抑制炎症相关信号有关。