基于焦磷酸测序的花生过敏原基因ara h6检测技术研究

应用焦磷酸测序技术建立了检测食品中花生过敏原基因Ara h6的快速检测方法,该检测方法对花生过敏原成分具有很好的特异性和重现性,测序结果在GenBank中进行同源性比对分析,表明目标序列能够作为鉴定花生过敏原成分很好的特征序列,为食品中的花生过敏原成分快速检测提供良好的技术支撑,保证了食品进出口和食用安全。     

利用捕获法建立筛选鸭坦布苏病毒适配单抗的 表面离子共振方法

目的以表面离子共振(surface plasmon resonance,SPR)系统为技术平台,利用捕获法建立检测鸭坦布苏病毒适配单抗的SPR方法,并对抗坦布苏病毒单克隆抗体的亲和力及抗原抗体结合的动力学进行研究。方法将鼠抗抗体偶联于CM5芯片上,采用Kinetics程序将HBS缓冲液梯度稀释的不同浓度的单克隆抗体进行捕获反应,拟合解离曲线计算不同单抗的K_D值并确立检测灵敏度低限并对其他不同亚型及5种常见禽类病毒抗体进行特异性检测试验。结果测得3株单抗的K_D值分别为1.50×10~(-13)、1.16×10~(-11)、7.85×10~(-12),建立的表面离子共振方法在检测其他禽源病毒时无阳性响应信号,坦布苏重组E蛋白的检测极限达0.625nmol/L。结论该方法可用于快速筛选检测坦布苏病毒的稳定适配单抗,并可有效获知其亲和力数据,为大规模推广建立免疫筛查方法奠定基础。     

利用表面离子共振系统检测三种禽流感病毒亚型的研究

目的利用表面离子共振系统建立检测H5、H7、H9三种亚型禽流感病毒的方法。方法取原核表达的H5、H7、H9亚型的血凝素HA蛋白偶联于CM5芯片上,利用HBS缓冲液梯度稀释病毒参考抗原并分别与固定浓度的三种亚型的禽流感抗血清进行反应,采用竞争法制备标准曲线并用以计算样品的浓度和确立检测灵敏度低限。对不同亚型之间及五种其他常见禽类病毒抗体进行特异性检测试验。结果建立的表面离子共振方法在检测各亚型时相互之间无交叉反应,未检测到其他禽源病毒的阳性响应信号,HA重组蛋白的检测极限可达0.5μg/m L。结论研究表明该方法可用于同步鉴别主要流行的禽流感病毒亚型。     

RAPD标记在中国对虾Fenneropenaeus chinensis单对交配亲本及其子一代的分离方式

利用RAPD标记对中国对虾单对交配亲本及其子一代 (全同胞家系 )的分离方式进行了研究。 10 0个RAPD随机引物扩增结果的统计分析表明 ,标记在F1代的分离方式可归为 3类 ,即符合孟德尔遗传比例、偏离孟德尔遗传比例和异常分离。符合孟德尔遗传的情况又包括 :不分离 ,亲本均有而在子代不分离的标记 (代表了亲本基因型的 3种组合 :AA×AA、AA×Aa、Aa×AA)和亲本中呈多态而在子代中不分离的标记 (代表了亲本基因型的 2种组合 :AA×aa、aa×AA) ;亲本中呈多态而在子代中 1∶1分离 (代表了亲本基因型的 2种组合 :Aa×aa、aa×Aa) ;亲本均有而在子代中 3∶1分离 (代表了亲本基因型的 1种组合 :Aa×Aa)。偏分离的标记包括 ,亲本中呈多态而在子代中偏离 1∶1分离的标记和亲本均有而在子代中偏离 3∶1分离的标记。异常分离的标记为在F1代出现双亲均不具备的标记。 3种分离位点出现的频率分别为 89.3% ,7.4 %和 2 .8%。其中呈 1∶1和 3∶1孟德尔分离规律的位点占分离位点总数的 6 9.5 %。母本特有标记和父本特有标记中符合孟德尔分离 (1∶1)分别占分离位点总数的 2 7.8%和 19.5 %。本研究结果证明RAPD标记结合“双假测交构想”构建中国对虾遗传连锁图谱的可行性     

RNA病毒检测质控物质-大肠杆菌噬菌体MS2标准样品的研制和应用

目的研制大肠杆菌噬菌体MS2标准样品,以其作为RNA病毒检测质控物质,建立RNA病毒检测全过程的质量控制体系。方法利用液体培养法制备大肠杆菌噬菌体MS2标准样品;采用双层琼脂法对标准样品进行稳定性、均匀性测定并定值;将标准样品添加于贝类样品中,应用于贝类诺如病毒实时荧光检测全过程质量控制。结果该标准样品稳定性与均匀性良好,定值为(1.57±0.0288)×10~(11) pfu/m L;保质期为12个月;在4种不同贝类样品中,病毒提取效率在3.70%~7.84%之间,符合国际标准ISO 15216:2-2013的病毒提取效率大于1%的要求。结论该研究制备的大肠杆菌噬菌体MS2标准样品可以对RNA病毒检测全过程进行良好的质量控制,具有良好的应用前景。     

微滴式数字PCR检测冷冻草莓中GⅠ、GⅡ型诺如病毒

目的:建立一种检测冷冻草莓中诺如病毒(GⅠ和GⅡ)的逆转录微滴数字PCR (RT-ddPCR)方法。方法:根据ISO标准选定检测引物,优化反应体系,退火温度,进行了方法学实验,建立了一种快速检测冷冻草莓中GⅠ和GⅡ亚型诺如病毒的新方法。结果:确定了数字PCR检测GⅠ型诺如病毒退火温度为56.5℃,GⅡ型诺如病毒退火温度为58.1℃。RT-ddPCR检测GⅠ质粒标准品标准曲线的R2=0.9947,RT-ddPCR检测GⅡ质粒标准品标准曲线的R2=0.9950,说明该方法具有良好的线性关系。与RT-qPCR灵敏度对比,RT-ddPCR法的灵敏度比RT-qPCR法高一个数量级。在检测范围内,最低检测限低至个位拷贝数。RSD最小为3.8%,表明该实验重复性良好。浓度较低100 copies/μL左右时,RT-ddPCR的重复性不佳。结论:本研究建立的诺如病毒数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于冷冻草莓中诺如病毒的定量检测。     

AFLP分子标记构建中国对虾遗传连锁图谱的初步研究

利用AFLP分子标记结合“拟测交”策略,以中国对虾的单对杂交亲本及其F1代为作图群体,应用MAPMAKER EXP／3．0软件,分别构建了中国对虾雌、雄的遗传连锁图谱。在中国对虾的雄性连锁图谱中,74个标记组成了5个连锁群(遗传标记数量大于3)、7个三联体、13个连锁对,总图距为951．5eM,最大连锁群的长度为206．2eM,最短的为7．4eM,标记间的平均距离为12．8eM;雌性连锁图谱中,由66个标记组成的5个连锁群,4个三联体,13个连锁对,总图距为712．7eM,连锁群的长度介于7．7eM～128．2eM之间,标记间的平均距离为10．7eM。估算的中国对虾基因组总长度为2000eM,所构建的连锁图谱分别覆盖了基因组长度的47．5％和35．6％。中国对虾遗传连锁图谱的构建为分子标记辅助育种、比较基因组作图以及基因定位与克隆创造了条件,并对今后其他海洋生物遗传图谱的构建具有理论价值和实践意义。     

利用表面离子共振系统检测三种禽流感病毒 亚型的研究

目的 利用表面离子共振系统建立检测H5、H7、H9三种亚型禽流感病毒的方法。方法 取原核表达的H5、H7、H9亚型的血凝素HA蛋白偶联于CM5芯片上, 利用HBS缓冲液梯度稀释病毒参考抗原并分别与固定浓度的三种亚型的禽流感抗血清进行反应, 采用竞争法制备标准曲线并用以计算样品的浓度和确立检测灵敏度低限。对不同亚型之间及五种其他常见禽类病毒抗体进行特异性检测试验。结果 建立的表面离子共振方法在检测各亚型时相互之间无交叉反应, 未检测到其他禽源病毒的阳性响应信号, HA重组蛋白的检测极限可达0.5 μg/mL。结论 研究表明该方法可用于同步鉴别主要流行的禽流感病毒亚型。     

基于量子点的志贺氏菌sFLISA检测方法研究

目的本研究建立基于量子点的志贺氏菌s FLISA检测方法并进行验证。方法以志贺氏菌多克隆抗体为包被抗体,以生物素标记的志贺氏菌单克隆抗体为第二抗体,以量子点标记的链酶亲和素进行荧光定量检测。结果试验确定志贺氏菌s FLISA检测最佳条件:包被抗体浓度为1.25μg/m L,生物素标记的单克隆抗体稀释倍数为1:400,量子点标记的链酶亲和素稀释倍数为1:100;特异性检验表明,s FLISA方法仅与志贺氏菌出现阳性反应,而与大肠埃希氏菌、沙门氏菌、葡萄球菌、李斯特氏菌、变形杆菌、副溶血弧菌、芽孢杆菌等均呈阴性反应。结论本研究建立的基于量子点的志贺氏菌s FLISA检测方法的最低检出量为3.5×104 CFU/m L,实现了对志贺氏菌高通量定性和定量检测。