食品检验用解脂耶氏酵母菌标准物质制备研究

目的 为满足实验室酵母菌日常检验质量控制需求及实验室间比对,制备解脂耶氏酵母菌检验用标准物质。方法 通过生化、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及ITS位点测序对研究用菌株进行菌种鉴定确认后,刮取适宜菌苔于保护剂中混匀后冻干,制备10_⁴ CFU/样品浓度的标准物质。参照CNAS-GL003等标准要求进行均匀性检验后,采用单因素方差分析对结果进行评价。将样品放于25 ℃和37 ℃及-20 ℃、4 ℃条件下,分别进行运输稳定性检验及储存稳定性检验。依据国家标准GB 4789.15,将研制的本标准物质加入7类食品基质共20件样品中进行检验,验证真实食品样品中适用性。组织3家实验室,对本标准物质进行协作标定。结果CMCC98025经生化鉴定为解脂耶氏酵母菌,准确度为93%;MALDI-TOF MS鉴定结果为解脂耶氏酵母,分数为2.012;ITS位点测序结果与NCBI Genbank中已有序列比对,匹配最优结果为解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica(Accession number ：CP061015.1;Query Cover：95%;Ident：100%)。均匀性测试结果符合正态分布,通过单因子方差分析计算F_0.05(19,20)=2.137,F值为1.697,F＜F_0.05,符合均匀性要求。25 ℃及37 ℃培养箱中放置7天,标准物质中菌含量仍保持在10_⁴ CFU/样品,可保持稳定。标准物质于4 ℃储存28天及-20 ℃储存90天,菌含量为10_⁴ CFU/样品,复苏率均在91%以上,说明4 ℃放置较短时间及-20 ℃放置较长时间样品稳定。7类食品样品基质中加入本标准物质后进行检验,均可检出,回收率为81.3%。经三家实验室协作标定,本标准物质平均浓度为2.0～3.0×10_⁴ CFU/样品。结论 本研究制备的解脂耶氏酵母菌标准物质均匀性、稳定性、真实食品样品中应用验证及协作标定结果均符合要求,可应用于食品中解脂耶氏酵母菌定性检验,今后可作为实验室日常检验工作的阳性对照质控样品,也可作为实验室间比对样品发放,以保障日常检验工作结果可靠性,进一步提升检验机构人员的检验水平。     

诺如病毒检验用大肠杆菌噬菌体MS2标准物质的研制

目的 制备均匀性和稳定性符合要求的大肠杆菌噬菌体MS2标准物质,用于诺如病毒检验过程的质量控制。方法 1、对大肠杆菌噬菌体MS2(CMCC Ph001)进行分子生物学的确认。2、将大肠杆菌噬菌体MS2培养物,采用冷冻干燥技术制成一定含量的微球。3、均匀性检验：取15件样品进行均匀性检验,采用三倍标准差原则对结果进行分析;4、长期稳定性检验：将样品放置于-20℃,于1个月、3个月、6个月、12个月取样,每个时间点取3个样进行检测进行分析。5、短期稳定性：样品放置于4℃和37℃环境,于1天、3天、5天、11天和1天、5天、7天、14天、28天,每个时间点取3个样进行检测。6、组织3家实验室进行协同标定。7、使用牡蛎、青蛤、甜瓜、胡萝卜、生菜等样品,作为贝类、硬质表面、蔬菜等样品代表对大肠杆菌噬菌体MS2标准物质的使用效果进行确认。结果1、MS2大肠杆菌噬菌体分子生物学鉴定结果为大肠杆菌噬菌体MS2(Coliphage MS2)。2、采用冷冻干燥技术制备的大肠杆菌噬菌体MS标准物质微球,呈球形、白色、大小均一,符合制备的预期。3、采用三倍标准差原则,对样品均匀性检验结果分析,检测结果值都在平均值±三倍标准差范围内,均匀性符合要求;4、经-20℃,12个月长期稳定性监测,样品仍然稳定,-20℃可以作为长期储藏的条件;5、经4℃ 28天、37℃ 5天的短期稳定性监测,样品仍然稳定,,证明样品可以采用常温的方式进行运输,4℃条件可以作为短期样品储存的条件。 6、经3家实验室协同标定,样品检测结果为阳性,CP值与均匀性检验的平均值比较差异不大,可以作为过程质量控制使用。7、以牡蛎、青蛤、甜瓜、胡萝卜、生菜等样品作为基质进行实用性验证,表明可以作为诺如病毒检验过程质量控制标准物质使用。结论 大肠杆菌噬菌体MS2(CMCCPh001)分子水平鉴定结果符合大肠杆菌噬菌体MS2(Coliphage MS2)的典型特征。均匀性、储藏稳定性、运输稳定性及适用性的验证实验结果均符合作为诺如病毒检验过程质量控制标准物质的要求。     

黑曲霉菌标准物质的研制及其在食品检测中的应用

目的 研制黑曲霉菌标准物质, 并将其用于食品检测。方法 通过显微形态及转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)位点测序, 对研究用菌株进行菌种鉴定确认后冻干, 制备104 CFU/样品浓度的标准物质。通过对标准物质样品均匀性、运输稳定性、储藏稳定性以及在不同食品基质中使用效果的检验, 结合3家实验室的协作定值实验对黑曲霉菌标准物质样品进行评价。结果 CMCC98003经肉眼观察菌落绒状, 黑色孢子头, 菌落反面呈无色或淡黄色有皱褶。制片后显微镜下观察, 可见顶囊呈球形, 小梗, 大梗, 分生孢子粗糙, 分生孢子梗宽且光滑, 孢梗颈, 符合黑曲菌形态特性; ITS位点测序结果与美国国家生物信息中心基因库中已有序列比对, 匹配最优结果为黑曲霉菌。通过SPSS软件单因素方差分析结果为F0.05(19,20)=2.137, F=1.614相似文献   

6种克罗诺杆菌精准鉴定及标准物质的制备研究

目的 制备具有我国食源性特点的6种克罗诺杆菌检验用标准物质。方法 通过生化、MALDI-TOF MS及二代高通量全基因组测序技术对研究用菌株进行菌种鉴定确认后,制备104 CFU/样品浓度的标准物质。参照CNAS-GL003等标准要求对样品进行均匀性检验后,采用单因素方差分析对结果进行评价。将样品放于25 ℃和37 ℃及-20 ℃、4 ℃条件下,分别进行运输稳定性检验及储存稳定性检验。依据国家标准GB 4789.40,将研制的6种标准物质分别加入20件乳粉样品中进行检验,检测真实食品样品中适用性。组织3家实验室,对6种标准物质进行协作标定。结果 CMCC45413、CMCC45410、CMCC45414、CMCC45412、CMCC98025及CMCC45408生化鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌属(Cronobacter sakazakii group),准确度为92%至99%;MALDI-TOF MS鉴定结果均为阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）,分数为1.914至2.244;全基因组测序鉴定结果与菌株已知种或亚种信息一致。均匀性测试结果符合正态分布,通过单因子方差分析,6种标准物质F值分别为0.422、0.922、0.980、0.409、0.721及0.631,F＜F0.05,符合均匀性要求。25 ℃及37 ℃ 放置7 d,6种标准物质中菌含量仍保持在104 CFU/样品。6种标准物质放置于4 ℃储存28 d及放置于-20 ℃储存90 d,菌含量均为104 CFU/样品,且存活率均在80%以上。20件真实乳粉样品中分别加入6种克罗诺杆菌标准物质进行检验,均可以检出;经3家实验室协作标定,6种克罗诺杆菌标准物质浓度均为104 CFU/样品。结论 本研究制备的6种克罗诺杆菌标准物质均匀性、稳定性、真实食品样品中应用验证及协作标定结果均符合要求,可应用于婴幼儿乳粉中克罗诺杆菌的检验。     

纯芝麻酱中花生致敏蛋白Ara h2、Ara h3及芝麻蛋白2S albumim的分析鉴定比较

针对花生致敏蛋白Ara h2、Ara h3及芝麻蛋白2S albumim,使用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)及酶联免疫吸附法(ELISA)对纯芝麻酱中上述蛋白进行检测.两种方法的特异性、重复性方法学验证显示均良好.验证后使用实时荧光定量PCR法对纯芝麻酱DNA进行芝麻蛋白2S albumim基因、花...     

某企业婴儿肉毒中毒乳粉相关样品中肉毒梭菌的分离与分型

目的 对从某企业获取的30批次婴儿配方乳粉样品进行肉毒毒素和肉毒梭菌检测，对分离到的1株B型肉毒梭菌进行全基因组测序分析。方法 参照GB 4789.12—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》对样品进行肉毒梭菌分离及肉毒毒素分型实验；对分离到的菌株进行全基因组测序，并分析菌株的遗传特征。结果 30批次样品中均未检出肉毒毒素；将增菌液进行小鼠腹腔注射后，4批次乳粉样品出现了典型小鼠肉毒中毒症状，但仅从1批次乳粉样品中分离到肉毒梭菌。基因组测序分析显示，该菌为Ⅰ群B型肉毒梭菌，毒素基因簇为Ha型，毒素基因为B2亚型。结论 针对背景微生物复杂的婴儿配方乳粉中肉毒梭菌检测，不应以菌种分离作为金标准，而应以增菌液小鼠毒性实验结合肉毒抗血清保护实验作为确认方法。全基因组测序可对分离菌种进行精准鉴定和相关遗传特征分析，为中毒事件处理提供可靠的技术支撑。     

国产与进口两种商品化NBB培养基检测啤酒有害菌的效果比较

目的:比较国产和进口NBB培养基对啤酒有害菌的检测效果。方法:将干酪乳杆菌、短乳杆菌、四联球菌、戊糖片球菌、乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌植物亚种6株乳酸菌接种到NBB-B和NBB-A培养基中,28℃厌氧培养24～72 h,测定OD值,观察培养基变色、菌落生长状态等。同时,用不同浓度麦芽啤酒配制NBB培养基,确定配制培养基用啤酒的最适麦芽度。结果:6株乳酸菌在国产和进口NBB-B培养基中灵敏度和指示特征无明显差异。戊糖片球菌在国产NBB-A培养基培养48 h变色情况略差于进口NBB-A,培养72 h后,与进口NBB-A培养基无差异。通过不同麦芽度比对试验,采用10°P啤酒配制的NBB培养基菌株生长情况最好。结论:国产与进口NBB培养基在灵敏度、指示能力、菌落生长等方面无明显差异,国产NBB培养基可用于国内啤酒生产企业检测啤酒有害菌。     

甘露醇氯化钠琼脂培养基成分对鉴定金黄色葡萄球菌的影响

目的 探究甘露醇氯化钠琼脂培养基成分中氯化钠和胰酪胨对甘露醇氯化钠琼脂培养基质量的影响,同时考察市售5个国产品牌和1个进口品牌的甘露醇氯化钠琼脂培养基的产品质量。方法 采用不同品牌不同浓度的氯化钠和胰酪胨配制成甘露醇氯化钠琼脂培养基,应用平板涂布计数、半定量划线法探究氯化钠和胰酪胨对甘露醇氯化钠琼脂培养基质量的影响;对不同种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌在5个国产品牌和1个进口品牌的甘露醇氯化钠琼脂培养基上的生长情况进行定量测定。参照GB 4789.28—2013比较不同品牌培养基对不同菌株的生长率、生长指数和菌落大小的影响,对培养基质量进行评价。结果 实验菌株在使用不同种类、不同浓度的氯化钠或胰酪胨配制的甘露醇氯化钠琼脂培养基上的生长率、生长指数存在较大差异;不同品牌的甘露醇氯化钠琼脂培养基非目标菌生长指数均合格,但目标菌的生长率和菌落生长大小存在显著差异。结论 氯化钠和胰酪胨对于甘露醇氯化钠琼脂培养基质量影响较大,会直接决定培养基的质量是否合格,市售的国内外不同品牌甘露醇氯化钠琼脂培养基质量存在较大差异,国产甘露醇氯化钠琼脂培养基的质量优于进口培养基。