骨素及骨素酶解液中蛋白质及肽的电泳分离

为了分离纯化骨素及其酶解产物中的蛋白质及肽,并比较骨素蛋白与骨蛋白和肌肉蛋白的差异,本文以骨蛋白和肌肉蛋白为参照,采用十二烷基磺酸钠凝胶电泳法(SDS-PAGE)对骨素蛋白及其酶解产物中的肽进行分离。利用不同浓度的分离胶(5%、7.5%、10%、15%)对骨素蛋白、骨蛋白和肌肉蛋白样品进行分离,结果发现,各种浓度的分离胶均可以分离骨蛋白和肌肉蛋白,但是不能分离骨素蛋白。对骨素蛋白酶解液采用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸凝胶电泳法分离,能有效分离骨素酶解液中的肽。对SDS-PAGE电泳分离时骨蛋白的迁移比和分离胶的相关性分析发现,骨蛋白的迁移比与分离胶浓度间呈指数相关,且具有极显著的相关性(R2≥0.996,p0.01)。利用该相关性并结合蛋白质的分子量与迁移比的相关性方程,可以通过蛋白质的分子量选择合理的分离胶浓度,或者通过迁移比预测蛋白质的分子量。