β-甘露聚糖酶基因和木聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达

为实现β-甘露聚糖酶基因和木聚糖酶基因在毕赤酵母中的共表达,作者将经SalⅠ线性化的pPIC9K-xynⅡ电转化至工程菌GS115/Anman5A中,经G418浓度梯度筛选后获得能同时高产β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的双重重组子GS115/Anman5A-xynⅡ。SDS-PAGE显示目的蛋白的相对分子质量分别约为52 000,24 100。摇瓶发酵筛选出产酶活性最强的转化株,命名为GSMX2,随后对该菌株的表达条件进行初步优化,优化后的表达条件为:诱导时间120 h,培养基起始pH值为7.0,甘油添加量为1.5%,甲醇添加量为1.5%。在此培养条件下,产β-甘露聚糖酶和木聚糖酶的活性分别达到37.1 U/mL和193.6 U/mL。     

宇佐美曲霉中β-甘露聚糖酶基因调控序列的克隆

建立了一种利用限制性内切酶酶切、pUCm-T载体连接和巢式PCR技术,基于部分已知DNA序列测定其两侧翼未知DNA序列的新方法,命名为T载体介导的PCR技术,并将此技术应用于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的β-甘露聚糖酶基因(Aus man5A)5′和3′端调控序列的克隆。结果表明:该PCR技术具有操作简便、引物特异性强、结果验证简捷、操作限制少等特点;借助于T载体介导的PCR技术、分子克隆和序列测定等手段,成功地测定了Ausman5A两侧翼的调控序列。     

食品罐头内壁环氧酚醛涂料中高锰酸钾消耗量测定新方法

对于使用环氧酚醛涂料为内涂防护层的马口铁罐,高锰酸钾消耗量的检测采用的是GB/T 5009.60—2003中规定的检测方法。该方法需对高锰酸钾标准溶液的浓度进行准确滴定,因而日常快速检测适应性较差。研究对高锰酸钾溶液浓度进行调整,并确定f值,省去了标准溶液的滴定过程。两种试验条件数据分析表明本试验方法的可信性与可行性,试验检测结果与GB/T 5009.60—2003无显著性差异,操作方便快捷,更加适合企业的日常监测控制。