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As part of our studies on the structural and dynamic properties of hyperthermostable proteins, we have investigated the unfolding pathways of the small iron-sulfur protein rubredoxin from Pyrococcus furiosus (RdPf) at pH 2. Unfolding has been initiated by temperature jump, triggered by manual mixing of a concentrated protein solution into a thermally preequilibrated buffer. The process has been followed in real time by absorption, tryptophan fluorescence emission, and far-UV circular dichroism. Unlike the case of the mesophilic rubredoxin from Clostridium pasteurianum (RdCp), RdPf displays a complex unfolding kinetics, pointing to the formation of at least three intermediates. All of the steps, including the one involving metal ion release, are extremely slow. However, hydrophobic core relaxation--not Fe3+ loss--is rate-determining for RdPf unfolding. This clearly rules out the fact that Fe3+ is solely responsible for the kinetic stability of RdPf. Results have been discussed in terms of sequential vs parallel pathways, and the possible role of irreversible phenomena has been taken into consideration. Aggregation does not appear to play a significant role in the observed kinetic complexities. According to a proposed sequential mechanism, partial release of secondary structure elements precedes iron loss, which is then followed by further loss of beta-sheet content and, finally, by hydrophobic relaxation. Although the main features of the RdPf unfolding mechanism remain substantially unchanged over the experimentally accessible temperature range, final hydrophobic relaxation gets faster, relative to the other events, as the temperature is decreased. A qualitative assessment of the unfolding activation parameters suggests that this arises from the very low activation energies (Ea) that characterize this step. 相似文献
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研究了文本数字水印在追溯涉密纸质文档中的重要意义,介绍了常见的文本数字水印技术,分析了Brassil经典行移编码文本数字水印技术,在算法的标记策略中引入检验编码,文本行分割划段和引入基调行三个方面进行改进,改进后算法具有更大水印信息容量,更强的鲁棒性和可控的计算量. 相似文献
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针对传统智能卡进行数据传输时仅支持单一模式的缺点,提出一种改进的基于模式控制字的数据传输安全策略。此模式控制字支持多种数据传输模式,数据可以采用明文、密文、明文MAC、密文MAC中的任一种方式进行传输,并通过基本文件(包含透明文件、线性文件)的读、写模式控制字,来规定文件进行读、写操作需要满足的传输安全条件。同时,还提出使用禁止添加、或禁止更新这两种写属性来限制基本文件的写入方式。用户可以根据自己的需求,将同一文件的读命令,和写命令采用的传输方式设置成不一样,从而选择不同的数据传输方式,进而提高数据传输的灵活性和安全性。 相似文献