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来源于黑曲霉(Aspergillus niger)的β-1,4-内切葡聚糖酶(AnCel5A)是糖苷水解酶第5家族成员,水解纤维素分子无定形区的β-1,4-糖苷键,在纤维素的降解过程中发挥关键作用。本研究通过对AnCel5A的结晶条件初筛,获得并优化AnCel5A晶体以期解析其蛋白质晶体结构。将截去N端信号肽的AnCel5A蛋白在Pichia pastoris X33/pPICZαA中进行表达,发酵液上清透析除盐并进行Endo H去糖基化酶切,后续依次通过离子交换层析、疏水层析,获得高纯度蛋白。通过坐滴气相扩散法对AnCel5A的结晶条件进行初筛,在CryoI screen kit (A6)孔中长出了初始晶体,经优化获得了更好的晶体。蛋白晶体于台湾新竹同步辐射中心(NSRRC)BL15A1线站进行了X射线衍射数据收集,结果显示其分辨率达到1.8?。 相似文献
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