鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR检测方法的建立

为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性。建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5min;95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环;72℃延伸10min。该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因。与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广。     

冷鲜鸡接触者手部抗生素耐药菌菌群多样性分析

为探索冷鲜鸡表面抗生素耐药菌在生产加工和消费加工中向人迁移的潜在风险,利用选择性培养和IonS5TMXL测序平台对6位冷鲜鸡接触者手部的四环素耐药菌(TETr)和磺胺耐药菌(SULr)进行计数和多样性分析。结果表明,与冷鲜鸡接触后,操作者手部的两类耐药菌显著增加至4.80×10～2.66×10~6 CFU/cm~2;TETr菌和SULr菌中各注释出21,19个菌属的共有菌群,其中,不动杆菌等9个属的细菌已被证实在禽源和人源分离株中均存在多重耐药性,且耐药基因在禽源和人源细菌间可能发生水平迁移;而布丘氏菌等14个菌属的禽源细菌的耐药特性尚无研究报道。研究证实TETr菌和SULr菌在直接接触中会从冷鲜鸡肉产品表面迁移至操作者手上。