免疫磁球捕获-PCR检测牛奶中金黄色葡萄球菌的研究

对免疫磁球捕获-PCR(IMS-PCR)检测牛奶中金黄色葡萄球菌进行了初步研究。优化了免疫磁球制备参数,确定了金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌的结合时间。研究结果显示,当纯菌浓度为101~104CFU/m L水平时,金黄色葡萄球菌免疫磁球对目标菌的捕获率大于80%。通过对目标菌和非目标菌的检测,IMS-PCR检测方法显示了很强的特异性;在纯培养、无需增菌情况,IMS-PCR检测方法检测限为104CFU/m L;牛奶中的金黄色葡萄球菌经磁分离后增菌2h用PCR检测,可检测出104CFU/m L的金黄色葡萄球菌。     

免疫磁球性能影响因素

利用化学键法制备沙门氏菌捕获富集用免疫磁球,通过平板培养计数法确定其对目标菌的捕获率,对影响免疫磁球性能的磁分离时间、目标菌捕获率、特异性及敏感性等主要因素进行了研究。结果表明,免疫磁球在不同的磁分离时间内对目标菌的捕获率不同,在一定的的磁分离时间内捕获率达到最高;磁球与抗体的投料比影响免疫磁球的捕获性能,磁球200μg、抗体25μg的投料制备的免疫磁球能获得40%以上的捕获效率,具有一定的灵敏性(100 cfu/m L的目标菌捕获率为50%以上);免疫磁球的粒径影响其捕获性能,大粒径(1 000 nm)免疫磁球目标菌捕获率小于小粒径(180 nm)免疫磁球目标菌捕获率;免疫磁球对单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌非特异性在10%以下,在一定程度上影响免疫磁球的特异性捕获。     

明胶及酪蛋白作为封闭剂及保存稳定剂在 免疫磁球制备中的应用

目的研究免疫磁球封闭剂及保存稳定液的性能,以保证微生物捕获效果。方法以沙门氏菌为目标捕获物,通过制备抗沙门氏菌免疫磁球,将明胶和酪蛋白作为封闭液及保存液成分,对免疫磁球特异性捕获及免疫磁球的保存周期进行了研究。结果 7.5%明胶溶液作为免疫磁球的封闭液时,免疫磁球非特异性吸附低于5%,1%酪蛋白的结果高于10%;保存液中添加1‰酪蛋白和1‰明胶,在37℃条件下放置3 d后,免疫磁球的特异性捕获率在70%以上。结论明胶作为封闭剂可以降低免疫磁球的非特异性吸附,1‰明胶与1‰酪蛋白在保存液中共同作用有助于免疫磁球抗体活性的保存。