两相体系中β-葡萄糖苷酶催化栀子苷水解制备京尼平

京尼平是一种天然生物交联剂,且具有多种生理活性。本文以β-葡萄糖苷酶催化栀子苷水解制备京尼平为目标体系,证明了京尼平对β-D-葡萄糖苷酶具有竞争性抑制作用;考察了β-D-葡萄糖苷酶在不同有机相-水体系中的稳定性,发现其在正辛醇-水、正己醇-水体系中的稳定性均较好;测定了栀子苷在正辛醇-水和正己醇-水体系中的分配系数kD,gardenoside分别为0.17和0.76,而京尼平的分配系数kD,genipin为42.57和37.75;分别在水、正辛醇-水和正己醇-水体系中进行栀子苷水解制备京尼平的反应,当底物浓度为0.25μmol·ml-1时京尼平收率分别为89.17%、93.96%、90.16%;进一步提高底物浓度为2.0μmol·ml-1时,正辛醇-水体系中京尼平收率高达91.9%,较水相体系(79.7%)提高了12.2%。本文的研究结果证明了采用正辛醇-水两相反应体系可部分解除产物抑制,提高产物收率,并简化后续的产物分离。     

基于PI荧光图像计数的乳制品荧光性质分析

为分析添加PI染料时乳制品中不同的荧光成分如酪蛋白、黄油、维生素B1、维生素B2、维生素C等对荧光图像观察的影响,探究了不同乳制品及其成分在PI染色观察条件下的荧光性质,并以酿酒酵母为目标菌,研究了10种乳制品中酿酒酵母PI荧光图像计数结果。结果表明,酪蛋白、黄油、维生素B1、维生素B2、维生素C等成分及10种乳制品在发射光615 nm均可产生荧光,但不影响PI染色的酿酒酵母荧光计数的观察结果。使用荧光显微镜对添加105~107 CFU/mL酿酒酵母菌液的10种乳制品进行PI染色计数,并将荧光图像计数结果与平板计数结果进行比较。其中经荧光图像计数后得到的菌液浓度对数值分别在5.69~5.93、6.18~6.28、7.13~7.21之间,对应平板计数结果的对数值分别5.49~5.63、6.02~6.06、7.02~7.06之间,二者结果一致。使用 PI 进行荧光图像计数时,乳制品荧光虽然存在但不会对酿酒酵母荧光图像观察与计数造成影响。     

以L-谷氨酰胺-锌(II)配合物为供体酶法制备茶氨酸及其反应机理

针对酶法合成茶氨酸中存在的自转肽副反应,合成了L-谷氨酰胺-锌(II)配合物Zn(Gln)2,以其为供体、乙胺为受体、枯草芽孢杆菌B. subtilis GGT为催化剂,酶法制备茶氨酸. 结果表明,Zn(Gln)2在反应主体相稳定性良好,以Zn(Gln)2为供体可有效抑制自转肽副反应;B. subtilis GGT对Zn(Gln)2和Gln的亲和力常数分别为0.53 mmol/L和1.01 mmol/L. 在Zn(Gln)2 6.0 mmol/L、乙胺200 mmol/L及GGT 0.5 U/mL条件下,经37℃反应2 h,茶氨酸浓度最高可达7.38 mmol/L,较以Gln为供体时提高了14.42%.     

复合乳化剂对面包品质及货架期影响研究

为了解决面包货架期短的问题,该实验研制出一种对面包具有保鲜防腐、改善品质的复合乳化剂。利用响应面分析法研究单月桂酸甘油酯、聚甘油脂肪酸酯和硬脂酰乳酸钠对面包品质以及面包细菌菌落总数抑制情况的影响。在单因素试验的基础上,进行Box-Behnken试验设计,以面包中细菌菌落总数、面包比容和面包硬度为优化指标,得到最优的乳化剂组合:聚甘油脂肪酸酯添加量0.75%(质量分数),单月桂酸甘油酯添加量0.60%(质量分数),硬脂酰乳酸钠添加量0.15%(质量分数),以此配方制备的面包比容达5.87 m L/g,硬度为474.4 g,与对照组比较,面包比容提高了20%,面包硬度降低了22%,在30℃、湿度70%条件下面包保质期比对照组3 d保质期延长了4 d。该复合乳化剂能显著改善面包品质,延长面包货架期。     

海藻酸钠固定化亚油酸异构酶及其酶学性质初步研究

以海藻酸钠为载体固定化亚油酸异构酶。研究了海藻酸钠浓度、酶用量、CaC12浓度、固定化时间对固定化过程的影响。结果表明,最佳固定化工艺是：以4%的海藻酸钠为载体、应用海藻酸钠溶液用量与酶液量的体积比3：1、3%的CaC12固定化5h。固定化酶的最适pH值为7.0,与游离酶相比,提高了0.5个pH单位;固定化酶和游离酶最适温度分别为35℃和30℃;固定化酶比游离酶具有更好的温度和pH值适应性。     

新型表面活性剂柠檬酸单酯的溶液性能研究及其在凝胶油中的应用

凝胶油不仅在功能食品中得到广泛应用,而且在药物制剂、化妆品领域也有重要应用前景。本文通过直接酯化法合成了两种柠檬酸单酯,并对其作为凝胶因子性能进行了研究。利用表面张力仪、电导率仪以及动态光散射仪等方法对两种柠檬酸酯的溶液聚集行为和胶束形成热力学进行了分析。结果表明,25℃下,柠檬酸月桂醇单酯和柠檬酸异癸醇单酯的临界胶束浓度分别为3.30mmol/L和6.40 mmol/L。同时,研究了离子强度对胶束形成过程的影响,结果表明,无机盐不仅影响胶束聚集数,而且使得柠檬酸异癸醇单酯的胶束尺寸降低约100 nm,柠檬酸月桂醇单酯的胶束尺寸降低约200 nm。凝胶油性能研究结果表明,最低凝胶浓度为7%,溶胶-凝胶转变温度为45~53℃之间,两种柠檬酸酯均能与植物油形成凝胶。生物相容性研究结果表明,两种柠檬酸酯在浓度为200mg/L时对微生物生长没有显著影响,具有良好的生物相容性。     

促进酿酒酵母在溶液体系中分散的研究

为探究溶液体系中细胞聚集的有效分散方法,以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)ATCC 9080为研究对象,研究了吐温-20、乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid, EDTA)、离子强度、pH、低频超声波(50 Hz)对其细胞水溶液中分散指数的影响,对吐温-20、EDTA、超声波3个因素进行正交试验以获得优化分散条件,然后进行酿酒酵母分散前后的分布类型的变化分析。结果表明,酿酒酵母最佳分散条件为,在PBS中添加0.2%(体积分数)吐温-20和8 mmol/L EDTA并超声波处理15 s,可使酿酒酵母细胞在水溶液中分散指数为0.24。处理后细胞在溶液中分布类型由对照组的集群分布转变为规则分布,且在适宜的分散条件下对酿酒酵母细胞活性无影响。     

丝状自组装蛋白支架介导的双酶级联催化体系构建促进D-塔格糖合成

D-塔格糖是一种稀有的己酮糖,具有低能量、高甜度,在食品领域具有广泛的应用。目前,D-塔格糖的生物合成大多聚焦于异构酶途径及关键酶L-阿拉伯糖异构酶的挖掘与改造,多酶级联催化的应用较少,且受热力学平衡影响转化率较低。该研究首先构建并表征了来源于Methanocaldococcus jannaschii的丝状自组装蛋白支架EE/KK,结果显示,其在胞内外均可实现有效的荧光蛋白级联互作。其次,在大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）中应用EE/KK蛋白支架级联组装D-木糖还原酶（SsXR,Scheffersomyces stipitis来源的NAD(P)H-dependent D-xylose Reductase）和半乳糖醇脱氢酶（RlGDH,Rhizobium leguminosarum来源的SDR Family Oxidoreductase）,强化基于氧化还原酶途径合成D-塔格糖的效率。相较于游离体系,EE/KK级联体系的D-塔格糖产量提高50%。进一步对级联体系重组菌株BL21-EX/KG（EX和KG分别为EE-SsXR和KK-RlGDH蛋白复合体的缩写）发酵条件进行优化,结果表明：以Luria-Bertani（LB）培养基为发酵培养基,温度20 ℃,0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranoside,IPTG）下,以10 g/L乳糖为底物,D-塔格糖产量可达3.93 g/L,对乳糖转化率为0.39 g/g,为理论转化率（0.53 g/g）的74%,高于大多数以乳糖为底物合成D-塔格糖的报道。该研究为D-塔格糖生物合成提供潜在的高效菌株以及多酶级联组装提供有效的工具。     

计数标准微球分散及浓度对酿酒酵母计数的比较

针对计数标准微球在微生物计数中的微球聚集、使用浓度及统计数量进行分析比较。以计数标准微球和酿酒酵母ATCC9080为实验对象,研究了Tween 20、Tween 80对计数标准微球的分散效果以及标准微球浓度、统计数量对酿酒酵母计数结果的影响,并将标准微球计数结果与平板计数结果进行比较。实验表明计数标准微球在0.08% Tween 20或0.06% Tween 80中的分散效果适宜,可使分散指数为3.30。对每毫升105、106、107个酿酒酵母悬液进行计数时,统计的标准微球总数依次应不小于2 000、1 500、1 000个,统计的细胞总数分别应不小于200、400、2 600个。在每毫升105~107个酿酒酵母浓度范围,以每毫升106个标准微球最适宜,且对酿酒酵母的计数结果与平板计数结果呈线性关系（R2=0.996 9）。结果表明Tween 20或Tween 80可有效分散计数标准微球,采用分散的、适宜浓度的计数标准微球可对微生物悬液进行准确计数,明确了计数标准微球用于微生物计数的适宜参数,补充 GB/T 39730-2020标准微球使用条件。     

石莼多糖及其寡糖结构、制备及活性的研究进展

石莼多糖是石莼属海洋绿藻细胞壁的主要成分,其复杂的结构和单糖组成赋予了各种生物活性,如抗病毒、抗炎症、抗凝血、抗氧化等。但是提取得到的石莼多糖的分子量较大,存在溶解度低,生物利用率差等缺点,这很大程度地限制了石莼多糖的高值化开发与有效利用。通过降解石莼多糖得到的低分子量的寡糖产物,即石莼寡糖,不仅能够非常好地保留石莼多糖的多种生物活性,还能够有效地解决溶解度低、生物利用率差等问题。因此,石莼寡糖的制备与活性研究成为海洋生物资源开发研究领域的热点。目前,石莼寡糖主要是通过化学法,物理法和酶法三种降解方式制备得到的。该研究对石莼多糖的化学组成、结构、提取、纯化和降解制备寡糖的方法进行了综述,并对石莼寡糖的生物活性研究进展进行了总结与展望,为石莼多糖及其寡糖的研究提供理论基础并以期为海洋藻类资源的高值化开发与有效利用提供参考。