bFGF促增殖后骨髓间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞的分化

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)体外作用于骨髓间充质干细胞(Mesen-chymal stem cells,MSCs)后,诱导其向神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞定向分化的情况。方法从鼠骨髓中获得MSCs,培养传代,用MTT法检测bFGF对骨髓MSCs生长的影响。10 ng/ml bFGF作用2 d后,通过IBMX、细胞因子bFGF、GDNFI、L-1β、中脑神经胶质细胞条件培养基和中脑神经细胞膜碎片等分组联合诱导骨髓MSCs向神经元样细胞、多巴胺能神经元样细胞分化,免疫细胞化学方法鉴定特异标志NSE、MAP-2a,b和TH的表达。结果在一定范围内,bFGF对骨髓MSCs具有明显的促增殖作用。分化的神经元样细胞表达NSE、MAP-2a,b和TH,联合应用GDNFI、L-1β、中脑条件培养基和中脑神经细胞膜碎片诱导7 d后,NSE阳性率为(27.774±2.747)%,MAP-2a,b为(28.006±3.080)%,TH为(3.098±0.352)%。结论体外骨髓MSCs被诱导分化成神经元样细胞和多巴胺能神经元样细胞,为帕金森等中枢神经系统疾病的细胞移植治疗奠定了基础。     

褪黑素对电离辐射所致C57BL/6J小鼠免疫功能损伤的防护作用

探讨了褪黑素(Melatonin,MLT)对电离辐射诱导小鼠免疫功能损伤的影响及其机制.采用C57BL/6J小鼠,腹腔注射MLT后60min给予2Gy X射线全身照射,观察照射后24h其胸腺、脾淋巴细胞数量及胸腺细胞3H-TdR掺入率和Con A、LPS诱导的脾T、B淋巴细胞转化率的变化.结果表明,2Gy X射线全身照射后24h,小鼠胸腺、脾淋巴细胞数量、胸腺细胞3H-TdR掺入率及有丝分裂原诱导的脾T、B淋巴细胞转化率均显著低于假照组(p＜0.001).以MLT 0.5-10mg@kg-1体重预先腹腔注射,受照射小鼠免疫功能发生如下变化:胸腺、脾淋巴细胞数显著高于0mg组(单纯照射).其中,0.5mg组增高最显著;胸腺细胞3H-TdR掺入率显著增高(p＜0.01或p＜0.001),以0.5mg组增高最显著;ConA诱导的T淋巴细胞转化率显著增高,也以0.5mg组为最显著;细菌脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞转化率增高,以10mg组最显著.此外,2.5mg组MLT可增强无丝裂原诱导的脾淋巴细胞转化率.MLT可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞损伤,对免疫功能具有保护作用.     

纳米氧化石墨烯对小鼠体内外急性毒性作用

目的通过体内和体外实验观察氧化石墨烯纳米颗粒的急性毒性作用。方法选择60只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成6组,每组10只,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,分别以剂量0 mg/(kg·bw)、3.125 mg/(kg·bw)、6.25 mg/(kg·bw)、12.5 mg/(kg·bw)、25.0 mg/(kg·bw)和50.0 mg/(kg·bw)进行纳米氧化石墨烯灌胃,观察动物一般状态及死亡情况;另取60只ICR小鼠,分为6组,在无菌条件下,以高纯水配制纳米氧化石墨烯,以剂量0 mg/(kg·bw)、1.0 mg/(kg·bw)、2.0 mg/(kg·bw)、4.0 mg/(kg·bw)、8.0 mg/(kg·bw)和16.0 mg/(kg·bw)进行尾静脉注射,观察动物一般状态及死亡情况。采用MTT法,以剂量为9.875 mg/(kg·bw)、18.75 mg/(kg·bw)、37.5 mg/(kg·bw)、75 mg/(kg·bw)、150 mg/(kg·bw)、300 mg/(kg·bw)和600 mg/(kg·bw)的氧化石墨烯与A549细胞进行共培养,观察细胞的生长状况并计算细胞的LC_(50)。结果纳米氧化石墨烯经口染毒途径未引起小鼠器官病理改变,无动物死亡;通过尾静脉注射对小鼠的LD_(50)为5.657 mg/(kg·bw),肺、肝、心组织血管内可见褐色纳米颗粒,但组织未见病理学变化;对A549细胞的LC_(50)为56.885μg/m L。结论未经修饰的纳米氧化石墨烯经尾静脉注射可导致动物死亡,并对A549细胞生长具有抑制作用。     

腺苷A_(2B)受体激动剂Bay60-6583对脓毒症模型小鼠的治疗作用

目的研究腺苷A2B受体激动剂Bay60-6583对脓毒症模型小鼠的治疗作用。方法采用腹腔注射活金葡菌(108 CFU)制备小鼠脓毒症模型,观察Bay60-6583(2 mg/kg)、头孢曲松钠(25 mg/kg)单独或Bay60-6583与头孢曲松钠(2 mg/kg+25 mg/kg)联合给药对脓毒症模型小鼠的治疗效果,设正常对照组和感染组。采用ELISA试剂盒检测给药后小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,并使用血球计数板计数小鼠腹腔灌洗液中白细胞数。结果 Bay60-6583和头孢曲松钠单独给药均降低脓毒症模型小鼠死亡率,但联合给药组几乎完全消除小鼠死亡,与感染组或单独给药组相比较,差异有统计学意义(P0.05);Bay60-6583单独或联合给药均明显降低小鼠血清中炎性细胞因子含量(P0.05),但不改变小鼠腹腔灌洗液中白细胞数(P0.05),而头孢曲松钠单独用药则略微降低血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量(P0.05)。结论 Bay60-6583通过抑制脓毒症小鼠炎性细胞因子表达发挥其治疗作用,与头孢曲松钠联合用药是合理的脓毒症治疗策略。     

人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质及结晶条件的筛选

目的分析人源化抗CD20单克隆抗体的理化性质,并初步筛选其结晶条件。方法分别采用还原、非还原SDS-PAGE及高效液相体积排阻色谱(size exclusive chromatography-HPLC,SEC-HPLC)法检测抗体纯度;还原SDSPAGE测定抗体轻重链相对分子质量;毛细管电泳测定抗体等电点;高效液相阳离子交换色谱(ion exchange chromatographyHPLC,IEC-HPLC)法检测抗体电荷异质体含量;悬滴气相扩散法初步筛选抗体的结晶条件。结果人源化抗CD20单克隆抗体的非还原SDS-PAGE纯度为100%,还原SDS-PAGE纯度(轻链+重链)为100%,重链、轻链相对分子质量分别为58 000和27 000,SFC-HPLC纯度为99.2%;等电点为9.2;抗体表面电荷分布较均一;得到的蛋白晶体为孪晶,分辨率约为8埃。结论该抗体的纯度达到结晶要求,以其理化性质为基础,初步筛选出了结晶条件,为其结构和功能的研究奠定了基础。     

分离提取葡萄糖母液中异麦芽糖的色谱填料

应用硅胶的氨基键合改性方法,研究色谱分离提取葡萄糖母液中低聚糖组分中的同分异构体的工业色谱填料。经红外光谱、元素分析对最后的产物进行表征,考察了该键合相的pH值适用范围。用自合成填料自装色谱柱对该键合相进行了色谱评价。结果表明：改性后硅胶键合相具有较好的色谱性能,且在pH值为 2～11时稳定性能良好,可有效地用于低聚糖中的同分异构体的分析分离。     

液相色谱-串联质谱法测定保健品口服液中10种性激素的研究

建立了同时测定保健品口服液中睾酮、孕酮和雄酮等10种性激素的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。以甲醇为提取溶剂,超声提取,经酸性氧化铝、C18固相萃取柱净化,采用LC-MS/MS进行检测。10种激素在1~200ng/m L范围内线性良好(r20.99),方法检出限为0.2~5μg/kg,在5、10、20μg/kg的3个添加水平范围内的平均回收率为70.92%~111.33%,相对标准偏差均小于15%,方法可满足口服液中性激素快速检测要求。     

放射性皮肤损伤的机制研究进展

放射性皮肤损伤是恶性肿瘤病人放射治疗的主要并发症之一,放射性皮肤损伤的发生机制与凋亡基因、细胞因子、细胞信号通路等有关,本文就放射性皮肤损伤在这几方面的发生机制进行综述。     

纳米氧化石墨烯对小鼠心肌氧化损伤作用

目的观察纳米氧化石墨烯对小鼠心肌的氧化损伤作用。方法选择80只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成4组,将纳米氧化石墨烯在无菌条件下溶于灭菌高纯水中,分别以剂量为0、0.35、0.7和1.40 mg/kg的纳米氧化石墨烯进行尾静脉注射1次。于注射后3 d和15 d分别处死40只小鼠,取心肌,测定心肌组织匀浆中丙二醛(MDA)的水平、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果注射后3 d,雌、雄各剂量组MDA含量高于对照(P<0.05);雄性高剂量组T-AOC显著低于其他组(P<0.05);雌、雄小鼠各剂量组SOD活性均显著高于对照组(P<0.05),雌性小鼠具有剂量—效应关系;雌、雄小鼠GSH-Px各剂量组均低于对照组(P<0.05)。染毒后15 d,雌性和雄性小鼠中、高剂量组MDA仍明显高于对照组(P<0.05);雄性中、高剂量组T-AOC显著低于对照组和低剂量组(P<0.05),雌性各剂量明显低于对照组(P<0.05);雌、雄小鼠SOD活性随剂量而增高(P<0.05),雌性各剂量组均明显高于对照组(P<0.05);雌、雄小鼠各剂量组GSH-Px活性显著低于对照组(P<0.05)。结论未经修饰的纳米氧化石墨烯经尾静脉注射后可能对心肌产生脂质过氧化损伤作用。     

生物素标记的布鲁菌多克隆抗体的制备

目的制备生物素标记的兔抗牛种布鲁菌544A多克隆抗体,并进行鉴定。方法复苏并扩大培养牛种布鲁菌544A,灭活后制备灭活疫苗,经背部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,5次免疫后,经心脏采血,分离血清,采用硫酸铵盐析法对血清中的多克隆抗体进行粗提,再通过蛋白亲和柱层析法对抗体进一步纯化,利用SDS-PAGE分析抗体的纯度,间接ELISA法检测抗体的效价和特异性,Bradford法检测抗体的蛋白含量,并利用生物素对抗体进行标记。结果制备的牛种布鲁菌544A的兔多克隆抗体纯度较高,效价为1:256 000,特异性较好,蛋白含量为2.83 mg/ml,每摩尔蛋白中标记的生物素摩尔数为3.09。结论成功制备了生物素标记的牛种布鲁菌多克隆抗体,为下一步研制牛种布鲁菌免疫检测试剂盒奠定了物质基础。