医学遗传学教学实践和思考

医学遗传学是医学教育中的基础课程,是培养高级医学人才的重要组成部分。面对学生觉得学习有困难、成绩不理想的情况下,我教研室在长期教学实践中,总结了一些经验,以提高医学遗传学教学质量。     

骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性研究

目的探讨骆驼蓬多糖调节细胞自噬及巨噬细胞炎症反应的活性。方法用不同浓度的骆驼蓬多糖干预,诱导NRK细胞自噬,用激光共聚焦显微镜观察自噬体,筛选出骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳干预浓度和时间范围;利用RAW264.7细胞,以1μg/mL脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)建立体外细胞炎症模型;在骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳浓度和时间下进行干预,以CCK-8试验检测细胞活性,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用ELISA试剂盒检测炎症因子IL-1β和IL-6的分泌量。结果骆驼蓬多糖对NRK细胞诱导自噬的最佳时间为12 h,浓度范围为50～100μg/mL。骆驼蓬多糖干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型后,对细胞活力均无明显影响,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,细胞培养液中IL-6和IL-1β分泌量降低,与模型组有显著差异(P(27)0.05)。结论骆驼蓬多糖能抑制LPS刺激诱导的炎症因子的释放,诱导细胞自噬和凋亡,在50～100μg/mL范围内对巨噬细胞RAW264.7具有良好的免疫调节作用。     

骆驼蓬多糖以自噬途径免疫调节炎症细胞模型

目的：以骆驼蓬多糖干预小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症反应模型,探讨骆驼蓬多糖调节炎症反应的生物活性及意义。方法：利用稳定表达GFP-LC3的NRK细胞,用不同浓度的骆驼蓬多糖干预,诱导细胞自噬,用激光共聚焦显微镜进行观察自噬体,筛选出骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳干预浓度和时间范围;利用RAW264.7细胞,以1μg/mL脂多糖构建炎症反应细胞模型;参照骆驼蓬多糖诱导细胞自噬的最佳浓度和时间进行干预,以CCK-8试验检测细胞活性,选择Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用ELISA试剂检测炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌量。结果：骆驼蓬多糖对NRK细胞诱导自噬的最佳时间为12h,浓度为50μg/mL-100μg/mL范围。骆驼蓬多糖干预LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型后,抑制细胞增殖活性,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,细胞培养液中,TNF-a和IL-1β分泌量降低,与模型组有显著差异(p<0.05)。结论：骆驼蓬多糖能抑制LPS刺激诱导的巨噬细胞增殖,诱导细胞自噬和凋亡,能抑制LPS诱导的炎症因子。     

薯蓣皂苷元对鱼藤酮损伤PC-12细胞的保护作用研究

目的研究薯蓣皂苷元对PC-12细胞生长的影响及其自噬诱导作用。方法用薯蓣皂苷元(diosgenin,DG)干预PC-12细胞,四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法和平板克隆形成实验检测DG对PC-12细胞的保护作用。DG处理PC-12细胞, Western Blot方法检测P62、LC3-Ⅱ蛋白的相对表达量。DG处理经过鱼藤酮诱导损伤的PC-12细胞,激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧的变化, Mito Tracker Red方法观察线粒体变化。结果 MTT法和平板克隆形成实验结果表明,薯蓣皂苷元在15μg/mL时对PC-12细胞有保护作用。DG干预PC-12细胞12 h后, P62蛋白表达减少(P<0.05), LC3-Ⅱ蛋白水平升高(P<0.05)。DG干预鱼藤酮损伤的PC-12细胞24 h后,细胞内活性氧降低(P<0.001),线粒体损伤减弱。结论薯蓣皂苷元可以通过诱导细胞自噬对鱼藤酮诱导的PC-12细胞损伤发挥保护作用。