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目的 基于环介导恒温扩增(LAMP)技术建立水产品和养殖水域中创伤弧菌现场可视化快速、简便的检测方法。方法 以创伤弧菌作为研究对象,分别采用煮沸法和离心柱法提取基因组DNA,优化简便、快速的弧菌DNA提取方法;以创伤弧菌gyrB基因作为靶基因,设计筛选最佳的适于LAMP的引物序列,分别通过LAMP荧光扩增曲线(加SYTO-9 荧光染料),以及LAMP可视化观察扩增产物的颜色变化(加钙黄绿素),开展特异性、灵敏度和重复性试验分析。结果 确定煮沸法为适合于弧菌基因组DNA提取的快捷方法;优化筛选的引物可以特异地检测创伤弧菌,检测核酸浓度的灵敏度可以达到10 fg/μL,并且结果稳定、可靠。采用该方法进行实际样品的检测应用,在558份水体样品和655份水产品样品中,创伤弧菌阳性检出率分别为9.01%和8.60%,阳性检出率高于传统的分离培养鉴定结果。结论 低技术要求、低设备成本以及检测时间短使得可视化LAMP快检方法成为现场可使用的一个理想选择,对于水产养殖业来说也更方便。  相似文献   
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