甘薯淀粉生产废液中糖蛋白提取的超滤数学模型

在前期采用无机陶瓷膜从甘薯淀粉生产的废液中进行超滤浓缩糖蛋白研究的基础上，建立了一个超滤数学模型，并由实验获得模型参数，模型预算的理论曲线和实验曲线拟合良好。     

P-糖蛋白基因疫苗的构建与鉴定

目的　制备P 糖蛋白基因疫苗。方法　利用PCR方法扩增编码人类P 糖蛋白多药耐药基因序列胞外区约 1kb片段 ,与真核表达载体pcDNA3进行定向重组 ,限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切反应及测序鉴定该重组基因疫苗 ,磷酸钙共沉淀法转染人类K5 62红白血病细胞 ,经G418筛选后 ,免疫组化分析该重组基因疫苗表达产物的抗原特异性。结果　构建了pcDNA3 MDR1重组基因疫苗。限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切分别显示 5 .4kb的载体片段及约 1kb的插入序列 ,测序 948个碱基中除 2个碱基突变外均与原序列排列相符。免疫组化方法证实细胞膜表面MDR1约 1kb片段的表达产物可被抗Pgp抗体识别。结论　构建的pcDNA3 MDR1重组基因疫苗可被市售的Pgp抗体特异性识别 ,具有Pgp抗原特异性     

O-糖链对猕猴桃糖蛋白抗氧化能力及构象的影响

糖基化是生物体内广泛存在的翻译后修饰,对蛋白质的结构和功能有重要影响,研究了O-糖链对猕猴桃蛋白性质的影响。采用乙醇浸提法提取猕猴桃糖蛋白CGp,通过β-消除反应去除猕猴桃糖蛋白CGp上的O-糖链,得到产物CGpp。CGp和CGpp经Sepharose CL-6b凝胶色谱柱分离纯化后分别得到Gp1、Gp2和Gp1p、Gp2p。之后测定了4种蛋白的OH自由基、DPPH自由基、ABTS自由基清除能力。使用傅里叶红外变换光谱法测定了O-糖链释放前后猕猴桃糖蛋白的二级结构,通过Peakfit拟合指认二级结构吸收峰,得到不同二级结构所占比例。结果表明:4种蛋白质均具有一定的清除OH自由基、DPPH自由基和ABTS自由基的能力,且随着浓度增大而增大,具有明显的量效关系;O-糖链释放后猕猴桃糖蛋白的ABTS自由基清除能力显著增强;β-折叠结构含量与OH自由基、DPPH自由基的清除能力呈正相关。     

克氏锥虫唾液酸转移酶催化机理的理论研究

克氏锥虫唾液酸转移酶（TcTs）是恰加斯病的致病原,它具有由6个β片构成的桶状催化结构域。该催化结构域集中在酶N端的边缘。本文利用量子力学/分子力学（QM/MM）联用的模型研究了克氏锥虫唾液酸转移酶的催化机理。初始酶和底物复合物模型由蛋白质晶体数据库得到（PDB ID:lSOI）。其中QM部分在半经验模型中由AM1描述,在从头算模型中由B3LYP/6-3lG^*描述。MM部分只取酶的N端结构域,并始终由AMBER力场来描述。QM部分与MM部分成键相互作用边界用pseudo-bond方法处理,将3个重要的氨基酸残基（Glu230,Asp59,Tyr342）的C_β-C_β键作为OM/MM模型中的pseudo-bond。由Nudged Elastic Band（NEB）路径优化方法得到的TcTs半经验的最低能量反应路径中,关键原子间距离沿最低能量路径的变化表明:反应开始后Glu230开始靠近Tyr342,当它们之间的氢键距离由2.9 A缩短为2.4 A时,Tyr342将质子转移给Glu230,增强了Tyr342酚氧负离子的碱性,更有利于Tyr342亲核进攻糖苷键。同时,Asp59作为酸,提供质子给糖苷键断裂后的离去基团。过程中,伴随着唾液酸的单糖糖环从扭曲的船式构象向松弛的椅式构象的转变,从而更有利于稳定生成的共价唾液酸-酶中间产物。对得到的半经验的最低能量反应路径再做B3LYP/6-31G^*/MM模型下的优化,得到反应的能垒约为13.53 kcal/mol,说明该反应路径是合理的。研究结果与实验上通过突变的TcTs_D59A推测的乒乓双置换酸碱催化的机理一致,是对实验结论的有力支持,为TcTs抑制剂的设计和结构修饰提供了理论参考,有助于预防和抗恰加斯病的新药物研发。     

肺部恶性肿瘤组织摄取~(99)Tc~m-MIBI与Pgp表达的相关性

用99Tcm-MIBI术中γ探测法探讨活体肺部恶性肿瘤组织对99Tcm-MIBI的摄取和肿瘤细胞P-糖蛋白(Pgp)表达间的关系。结果表明,T/NT≤2的肺部恶性肿瘤组织Pgp含量明显高于T/NT>2的肺部恶性肿瘤组织;Pgp含量多寡与病理类型无关;肺部恶性肿瘤组织对99Tcm-MIBI的摄取与Pgp表达呈明显负相关,即肿瘤细胞高度表达Pgp时,99Tcm-MIBI摄取较低。     

Con A亲和层析法在纯化糖蛋白中的应用

近年来,糖蛋白的结构分析作为其深入研究的关键手段,正越来越受关注。亲和层析法是蛋白质分离纯化的重要途径,在富集目标物中承担着不可或缺的角色。本文概述了外源凝集素Con A为配基的亲和层析在糖蛋白纯化中的应用。     

单唾液酸四己糖神经节苷脂改善脑梗死患者神经功能缺损症状的疗效观察

目的:观察单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)改善脑梗死患者神经功能缺损症状的临床疗效。方法:选取76例急性脑梗死患者,随机分为观察组和对照组,每组38例。对照组按照急性脑梗死的常规治疗和康复训练方案进行治疗。观察组在对照组治疗方案的基础上,加用GM1进行治疗。治疗4周后,对比两组患者的临床疗效和NIHSS评分的变化情况。结果:观察组总有效率为89.47%,对照组为68.42%,观察组总有效率显著高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的NIHSS评分为(12.57±3.91)分,对照组为(18.64±4.37)分,与本组治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组的NIHSS评分显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:GM1可显著改善急性脑梗死患者的神经功能缺损症状,提高其临床治疗效果,值得进一步推广应用。     

呈现埃博拉病毒包膜糖蛋白抗原表位重组病毒样颗粒的构建

目的构建呈现埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)包膜糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原表位的病毒样颗粒(viruslike particles,VLPs)。方法通过EBOV GP抗原性预测,并结合其功能结构域分析获得潜在的B细胞表位,经基因重组将该抗原表位插入至乙肝核心抗原(HBcAg)的优势表位区域,SDS-PAGE法分析重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的表达。重组菌体破碎上清经硫酸铵沉淀和蔗糖密度梯度离心纯化后,通过电镜观察VLPs形态。将VLPs与Alum佐剂按1∶1的比例混合,经背部皮下免疫小鼠。ELISA及Western blot法检测小鼠血清的特异性。结果重组HBcAg抗原表位嵌合蛋白的相对分子质量约19 300,纯化后蛋白浓度为1.244 mg/ml,镜下可见其以VLPs形式存在。VLPs免疫小鼠血清可与GP发生特异性免疫反应。结论成功构建了呈现EBOV GP抗原表位的VLPs,其可有效诱导小鼠产生特异性免疫应答。本实验为EBOV基因重组疫苗的研究及特异性抗体的制备奠定了基础。     

静注人免疫球蛋白唾液酸含量测定方法的建立及初步应用

目的建立静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)唾液酸含量的测定方法,并用该方法对国内外IVIG制品唾液酸含量进行检测。方法根据《中国药典》三部(2015版)和《欧洲药典》8.0中的相关内容建立唾液酸含量检测的方法,对方法中的检测波长、反应体系、沸水浴时间及样品检测浓度进行优化,并验证该方法的线性范围、精密性及准确性。采用建立的方法检测国内外7个厂家的21批IVIG制品唾液酸含量,并进行比较。结果最适检测波长为580 nm;最佳N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminicacid,NANA)标准品、间苯二酚反应液、异戊醇的加入量分别为0.2、0.5、0.5 ml;最佳沸水浴时间为30 min;最佳样品检测浓度为2 mg/ml。NANA标准品在5~80μg/ml浓度范围内,与A580值呈良好的线性关系,相关系数(R2)=0.998;5批IVIG制品检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)平均值为3.72%,同一批IVIG制品于3个不同时间检测结果的RSD值为3.1%;IVIG样品的加标回收率为(98.5±7.9)%。不同厂家的IVIG制品唾液酸含量存在较大差异。结论本研究建立的方法具有良好的精密性及准确性,可用于IVIG唾液酸含量的检测。