5 种葡萄球菌肠毒素基因MPCR-DHPLC检测方法的建立

设计合成5 种葡萄球菌肠毒素基因（SEA、SEB、SEC、SED、SEE）的特异性引物,对聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的反应体系进行优化后,建立5 种葡萄球菌肠毒素基因的多重PCR结合变性高效液相色谱（multiplex PCR-denaturing high performance liquid chromatography,MPCR-DHPLC）检测方法,并进行MPCR-DHPLC检测特异性及灵敏度的测定,5 重PCR-DHPLC检测灵敏度可达到100 CFU/mL。MPCR-DHPLC方法应用于食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的检测,具有快速、准确、高通量等优点。     

PCR and DHPLC methods used to detect juice ingredient from 7 fruits

To provide accurate and fast method for labeling regulation on fruit juice, conventional PCR, real-time PCR and DHPLC techniques were explored in this study to detect ingredient from 7 fruit species. ITS1-5.8S-ITS2, TrnL-TrnF from chloroplast genome and thaumatin-like protein gene from nucleus genome were targeted. Sensitivity of 6 primer (probe) pairs was determined to be 1-10 pg DNA. Orange and mandarin were universally amplified by the same primer pair and the 8 bp divergence of PCR products could be differentiated by DHPLC analysis. 30 Fruit samples collected from local market were tested and no mislabeling was discovered.     

食品中拟态弧菌变性高效液相色谱检测技术研究

应用PCR 结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术对食品中致病菌--拟态弧菌进行检测,探讨其灵敏度特异性,建立快速高通量检测食品中拟态弧菌的新方法。利用DHPLC 在非变性温度下进行双链DNA 分离的原理,应用DHPLC 技术分析拟态弧菌特异性PCR 扩增产物。在优化的分析条件下,对样品洗脱峰排列形成的聚类分析图进行分析,得到拟态弧菌的特征峰型图谱。结果表明该方法有很好的特异性。与传统检测方法进行比较该方法准确度为100%。本实验建立的食品中拟态弧菌PCR-DHPLC 检测技术,特异性灵敏,准确度高,操作快速、简便,在食品安全检测中具有重要应用价值。     

变性高效液相色谱法在微生物检测的应用进展

变性高效液相色谱法（denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC）或温度调控高效液相色谱法（temperaturemodulatedhigh—performance liquid chromatography,TmHPLC）,是在高效液相色谱法的基础上发展起来的一种新的高通量筛选DNA序列变异的技术,本文阐述了变性高效液相色谱法技术进行突变分析的原理,及其目前在异质性样本及同源微生物的鉴定、微生物群落分析与动态分子监测、细菌耐药基因的检测等研究中的应用。     

变性高效液相色谱检测乳制品和化妆品中绿脓杆菌的研究

目的：应用PCR 结合变性高效液相色谱技术实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法：利用所报道的绿脓杆菌外毒素A(ETA)基因设计引物和探针,并对该方法进行特异性、灵敏度、精密度等方面的考察。结果：用该方法未检测到绿脓杆菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,检测灵敏度可达到100CFU/ml。结论：用PCR 结合变性高效液相色谱检测绿脓杆菌不仅特异性好、灵敏度高,且快速简便。     

多重PCR-DHPLC检测4种主要致腹泻性大肠埃希氏菌方法的建立与应用

肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)和肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)是引起腹泻、危害食品安全和人类健康的4 种主要大肠杆菌。本实验基于ETEC LT 基因、EPEC bfpA 基因、EHEC O 抗原基因和EIEC 侵袭性质粒基因序列,设计了4 对特异性引物,利用聚合酶链反应(PCR)和变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术,通过体系优化,建立了致腹泻性大肠杆菌多重PCR-DHPLC 检测方法,达到同时检测4 种致病菌的目的。该方法灵敏度高,最低检测限为EHEC 6 × 101拷贝/μL、ETEC 1.3 × 102 拷贝/μL、EPEC 9 × 101 拷贝/μL、EIEC 7 × 101 拷贝/μL。特异性试验表明,对22种共41 株细菌进行检测,所试6 株致腹泻性大肠杆菌均为阳性。实践证明,该方法具有良好的实用性,可用于ETEC、EPEC、EHEC 和EIEC 的单一或混合感染的检测。