PCR Detection of Listeria monocytogenes in different Food Products compared with the mini-VIDAS LMO System and the Standard Procedure ISO 11290-1

The presence of Listeria monocytogenes in 225 natural samples, including different food types, was investigated by three methods: (i) culture-based standard procedure ISO 11290-1, (ii) mini-VIDAS (Vitek Immuno Diagnostic Assay System) LMO, an enzyme linked fluorescent assay (ELFA) commercially available, and (iii) PCR using a previously established procedure. Identification of isolates recovered from the standard method and mini- VIDAS, on Oxford and PALCAM selective plates, was carried out using the API-Lis system and also by PCR, using L. monocytogenes specific primers. In all, 65 samples (64 meat products and one smoked salmon) were positive with any of the three procedures assayed. Taking into account the results based on PCR identification, the standard culture-based method found 22 and the mini- VIDAS 23, while PCR detected 60 positive samples in a total of 225 food samples. For comparative purposes, a set of “known positive samples” was established as reference that included 33 natural samples from which L. monocytogenes isolates (identified by specific PCR) had been recovered. The mini-VIDAS and ISO 11290- 1 methods were equally sensitive. Compared to them PCR was clearly the more accurate and efficient procedure for detection of L. monocytogenes in food. Moreover, it showed no false negative results. The PCR approach can be completed in 48 working hours, and because of its specificity might eventually be cheaper than the other two procedures. Consequently we recommend PCR for routine detection of L. monocytogenes in food.

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Zusammenfassung (Redaktion). 225 Lebensmittelproben wurden auf das Vorhandensein von Listeria monocytogenes mit Hilfe von drei verschiedenen Methoden untersucht: (i) durch die auf Kultivierung basierende Standard-Methode nach ISO 11290-1, (ii) durch mini-VIDAS (Vitek Immuno Diagnostic Assay System) LMO, einem Enzym-basierten Verfahren mittels Fluoreszenz-Nachweis (ELFA; im Handel erh?ltlich) und (iii) durch ein PCR-Verfahren, das jüngst von den Autoren etabliert worden ist. Die Identifikation von Isolaten durch Einsatz der Standard- oder der mini-VIDAS- Methode wurde nachvollzogen durch Verwendung des API-Lis-Systems und auch durch die PCR unter Verwendung von L. monocytogenes-spezifischen Primern. Insgesamt wurden 65 Lebensmittelproben durch jede der drei Methoden als positiv identifiziert. Durch die Standard-Methode wurden 22, durch die mini-VIDAS 23 und durch die PCR 60 positive Proben unter den 225 Lebensmittelproben identifiziert. Zu Vergleichszwecken wurden Referenzproben (belastet mit L. monocytogenes) durch PCR positiv identifiziert. Das mini-VIDAS- und das Verfahren nach ISO 11290-1 waren von gleicher Sensitivit?t; aber im Vergleich zu ihnen war die PCR deutlich exakter und effizienter, um L. monocytogenes in Lebensmitteln nachzuweisen. Das Ergebnis des Nachweises mittels PCR kann nach 48 Arbeitsstunden vorliegen. Daher empfehlen die Autoren ihre PCR als Routine-Verfahren für den Nachweis von L. monocytogenes in Lebensmitteln.

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五种方法检测食品中沙门氏菌的结果比较

目的:通过参加能力验证,加强实验室间的技术交流,提高检测技能,验证实验室的检测能力。方法:采用SN0170-1992、mini-VIDAS、API20E、科玛嘉显色培养基、ISO6579-2002等方法对沙门氏菌进行检测。结果:采用这5种方法能准确鉴定出测试样品中的沙门氏菌,取得满意结果。结论:通过本次能力验证,证明没有任何一种培养基可以全面保证所有食品基质或各种沙门氏菌血清型生长,在日常检验中,为减少假阴性结果,同时使用两种或两种以上培养基平行地进行实验是完全有必要的。     

国标培养法与2种金黄色葡萄球菌快速筛检方法的比较

目的将mini-VIDAS法和膜芯片2种快速筛检方法与国标培养法进行比较,评估2种快速筛检方法的效果和可操作性。方法以金黄色葡萄球菌为目标菌,针对3种筛检方法设计灵敏性、特异性、抗干扰性实验和人工污染实验,通过比较获得3种筛检方法的应用效果情况。结果国标培养法和mini-VIDAS法的灵敏性较好,mini-VIDAS法和膜芯片法的特异性和抗干扰性较好,人工污染实验中3种方法的结果均符合设计预期。结论日常检验中可采用国标培养法和mini-VIDAS法进行筛检工作,应急任务可使用膜芯片法,以缩短筛检时间,mini-VIDAS法和膜芯片法是金黄色葡萄球菌快速筛检的可靠工具。     

Mini-VIDAS法和国标法检测单增李斯特菌的效果比较

目的比较两类方法检测单增李斯特菌的特异性、灵敏度和抗干扰性,并研究添加成分和样品基质对检测效果的影响。方法选取单增李斯特菌(CICC 21633/ATCC 19111)、斯氏李斯特菌(CICC 21671)、伊氏李斯特菌(CICC 21663/ATCC19119)和英诺克李斯特菌(CICC 10417/ATCC 33090)为试验对象,采用国标法和mini-VIDAS法为试验方法。结果两种检测方法的特异性较好,均能区分李斯特菌属和非李斯特菌属。国标法和mini-VIDAS法的灵敏度分别为104~105 cfu/m L和105 cfu/m L;同时,国标法的抗干扰性稍强,1/104混合干扰菌液可检出目标菌。添加次氯酸钠后两种方法对目标菌的检出都受到影响。添加成分对单增李斯特菌生长的抑制作用符合乙醇苯甲酸钠十三香料凉拌菜料次氯酸钠。当基质中单增李斯特菌污染水平较低并且背景微生物数量高时,目标菌的检测结果受基质严重干扰。不同增菌液对单增李斯特菌的增菌效果为Fraser肉汤LB2FB2。结论 mini-VIDAS法和国标法对单增李斯特菌的检测性能基本相当。采用国标法时需考虑微生物污染背景、添加成分等样品基质特性,以提高目标菌的检出率。mini-VIDAS法可作为初筛的良好工具。