Loop结构A79Y和T81Q定点突变对木聚糖酶XynASP热稳定性的影响

目的 识别溶糖曲霉(Aspergillus saccharolyticus)JOP 1030-1木聚糖酶Xyn ASP Loop结构中的热稳定性位点，提高其热稳定性。方法 利用Fireprot在线服务器预测木聚糖酶热稳定性相关氨基酸位点，在Loop结构中筛选有益突变位点。通过定点突变构建单点突变体Xyn^A79Y、Xyn^T81Q及双点突变体Xyn^LQ(A79Y/T81Q)。将重组突变质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达，利用Ni-NTA蛋白纯化试剂盒对重组木聚糖酶进行纯化，并测定酶的最适温度及热稳定性、最适pH及pH稳定性。结果 在Loop结构中筛选出有益突变位点A79Y和T81Q，纯化后的蛋白样品纯度较高。相比野生型Xyn ASP，突变体Xyn^A79Y、Xyn^T81Q及Xyn^LQ的最适温度分别提高了10、5和5℃。40℃热处理30 min，野生型Xyn ASP仅保留30.2%残余酶活力，而突变体Xyn^T81Q为3...