庆大霉素诱导急性肾损伤大鼠模型肾损伤分子-1的表达

目的探讨庆大霉素(Gentamycin,GM)诱导急性肾损伤大鼠模型肾损伤分子-1(Kidney injury molecule-1,KIM-1)的表达。方法建立GM诱导大鼠急性肾损伤模型;检测各组大鼠血、尿各项生化指标;取大鼠肾组织,进行病理组织学观察;ELISA法检测各组大鼠尿液中KIM-1的分泌;RT-PCR法检测各组大鼠肾组织KIM-1mRNA的表达;免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾组织KIM-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血、尿各项生化指标及病理组织学观察均出现不同程度的病变;ELISA检测显示,大鼠尿液中KIM-1的含量显著增高(P<0.05);RT-PCR检测显示,肾组织KIM-1mRNA表达上调(P<0.05),且呈时间依赖性;免疫组化法检测显示,KIM-1表达量随肾损伤加重而显著升高,且呈时间依赖性。结论 KIM-1具有良好的敏感性和特异性,可作为GM所致肾小管损伤的早期诊断标志物。     

硒和维生素E对克山病病区粮喂饲大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察适时适量补充硒(Se)和维生素E(VE)对心肌纤维化和心肌重构的影响,探讨克山病病区的低Se和低VE膳食是否在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用.方法:30只Wistar 大鼠随机分为:正常对照组(Control,混合饲料喂养)、病区粮饲料组(EG,病区粮喂养)、病区粮饲料加Se组(EG+Se)、病区粮饲料加VE组(EG+VE)和病区粮饲料加Se加VE组(EG+Se+VE).喂养21 d后,取大鼠心脏,比色法测定大鼠血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;硫代巴比妥法测定血清丙二醛(MDA)含量;马松三色染色测定大鼠细胞外基质沉积情况;免疫组织化学法和Western blotting法测大鼠心肌组织中转化生长因子β(TGF- β)和结缔组织生长因子(CTGF)表达.结果:与正常对照组比较,EG组心肌纤维化大鼠血清中GSH-Px活力下降(P<0.01),MDA含量升高(P<0.05),心肌组织胶原蛋白大量沉积,并伴有TGF-β和CTGF表达上调(P<0.01).与EG组比较,EG+Se组和EG+Se+VE组病区粮心肌纤维化大鼠血清中GSH-Px活力均提高(P<0.01 和P<0.05),MDA含量降低(P<0.05);大鼠心肌细胞外基质沉积缓解;克山病大鼠心肌TGF- β和CTGF表达下调(P<0.01).结论:低Se和低VE在心肌损伤后的修复过程中持续发挥作用,适时适量补充Se和VE有利于减轻和逆转过度的心肌纤维化和心肌重构.     

尾加压素Ⅱ和组织型转谷氨酰胺酶在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义

目的:探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)和组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在大鼠肾间质纤维化组织中的表达及意义,为进一步明确UⅡ致纤维化的机制提供实验依据.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(n=8)和模型组(n=8),采用左侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化模型.术后第2周末处死各组大鼠.采用HE和Masson染色观察肾组织病理学改变;采用免疫组化法检测肾间质中UⅡ、tTG和纤维连接蛋白(FN)的表达;采用RT-PCR技术检测UⅡ和tTG mRNA的表达水平.结果:HE和Masson染色可见,模型组大鼠肾间质增宽,胶原纤维明显增生.免疫组化显示,假手术组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管、肾间质区有少量表达,肾小球内除UⅡ有微量表达外,tTG和FN无阳性表达;模型组大鼠UⅡ、tTG和FN在肾小管和肾间质区的表达信号较假手术组明显增强(P<0.01),模型组大鼠UⅡ的蛋白表达与FN的蛋白表达呈正相关关系(r=0.724,P<0.05).模型组UⅡ和tTG的基因表达明显高于假手术组(P<0.05),模型组大鼠肾内UⅡ基因和蛋白表达与tTG基因和蛋白表达均呈正相关关系(r=0.647,P<0.05;r=0.787,P<0.01).结论:UⅡ和tTG可能共同参与肾间质纤维化,UⅡ的致纤维化作用可能部分是通过tTG的活化而实现的.     

单宁酸对糖尿病大鼠肾组织炎症因子表达的抑制作用

目的:观察单宁酸(TA)对链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病(DM)大鼠肾脏组织炎症因子表达的抑制作用,探讨其作用机制.方法:70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM组、氨基胍(AG)组、TA低剂量组和TA高剂量组.处理10周后检测各组大鼠肾脏功能指标[血清肌酐(Cre)、尿素氮(BUN)及24 h尿蛋白排泄量],PAS染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学染色观察肾组织细胞间黏附分子1(ICAM-1)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,RT-PCR方法检测肾组织ICAM-1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,TA组大鼠血清Cre、BUN及24 h尿蛋白排泄量降低(P<0.05或P<0.01),大鼠肾小球系膜区PAS阳性物质减少,肾组织ICAM-1及TNF-α蛋白表达水平降低,肾组织ICAM-1 mRNA表达水平降低(P<0.05).结论:TA能降低糖尿病大鼠肾组织ICAM-1及TNF-α的表达,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用.     

氧化型低密度脂蛋白的制备及其对血管平滑肌细胞增殖能力的影响

目的制备氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),并检测其对血管平滑肌细胞(SMC)增殖能力的影响。方法肝素沉淀法提取LDL,Cu2+氧化法制备ox-LDL,MTT法测定其对Wistar大鼠血管SMC增殖能力的影响。结果LDL完全被氧化成ox-LDL SDS-PAGE显示,LDL相对分子质量降低;200mg/Lox-LDL可刺激体外培养的SMC增殖能力明显增强;ox-LDL浓度不低于600mg/L时,SMC增殖能力明显下降。结论成功制备了ox-LDL,一定浓度的ox-LDL可促进SMCs的增殖。     

蛇油纳米乳的制备及稳定性评价

通过水相滴定法制备蛇油纳米乳,研究了混合油相、表面活性剂、助表面活性剂对蛇油纳米乳制备的影响,并利用伪三元相图法确定最佳蛇油纳米乳配方。结果表明：混合油相选择蛇油和肉豆蔻酸异丙酯（IPM）,表面活性剂选择Span80和Tween80二者质量比27∶ 73,助表面活性剂选择PEG400;最佳蛇油纳米乳配方为蛇油1.6 g、IPM 2.4 g、Span80 1.08 g、Tween80 2.92 g、PEG400 4.0 g、水8.0 g。所制得的蛇油纳米乳为O/W型,平均粒径为63.01 nm,PDI为0.226,Zeta电位为-19 mV,液滴外观为圆形,粒径均匀且状态良好;离心后清澈透明,不分层;不耐高温,需要在25 ℃以下贮存;冷冻后,可以在室温下恢复到初始状态;氧化稳定性较蛇油提高     

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞周期的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞周期的影响。方法体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞,加入不同浓度的UⅡ(10-7、10-8、10-9和10-10mol/L),37℃孵育24h,用碘化丙啶染色流式细胞术分析肾小球系膜细胞周期分布。结果UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞有明显的促增殖作用,表现为细胞周期S期比例增加,以浓度为10-8mol/L时最明显。Ca2+阻断剂尼卡地平、Ca2+螯合剂EDTA及抗UⅡ抗体能明显抑制其促增殖作用。结论UⅡ能提高体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞S期DNA合成速率,提示UⅡ对其具有明显的促增殖作用。     

尾加压素Ⅱ对大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠近端肾小管上皮NRK-52E细胞增殖和细胞周期的影响及其机制。方法在NRK-52E细胞培养液中加入10-10、10-9、10-8和10-7mol/L UⅡ,同时设UⅡ活性阻断组:UⅡ+尼卡地平和UⅡ+EDTA,以单纯DMEM为对照组。培养48 h后,采用5-溴-2′-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测各组细胞的增殖活性,流式细胞术分析细胞周期。结果UⅡ(10-10~10-8mol/L)以浓度依赖方式促进NRK-52E细胞BrdU掺入(A值分别为0.491±0.038、0.291±0.024和0.281±0.037),其中以10-8mol/L UⅡ的作用最明显,10-7mol/L UⅡ对NRK-52E细胞增殖的影响与对照组比较差异无显著意义。UⅡ影响NRK-52E细胞周期,在10-10~10-8mol/L浓度范围内增加S期细胞百分比(分别为26.96%±3.35%、44.26%±3.28%、48.12%±2.22%)。尼卡地平和EDTA均可以降低UⅡ诱导NRK-52E细胞的BrdU掺入增加,降低S期细胞百分比。结论UⅡ具有较强促进NRK-52E细胞增殖的作用,但大剂量则无此作用,其诱导NRK-52E细胞增殖作用部分是通过Ca2+内流来介导的。