肺炎克雷伯菌CRP蛋白表达与纯化及生物学特征分析

目的:原核表达获得肺炎克雷伯菌KP1_RS23625基因（crp）编码的CRP蛋白,并解析CRP蛋白具体的生物学功能。方法:首先克隆肺炎克雷伯菌crp基因,并亚克隆至pET-28a（+）质粒构建重组蛋白表达载体;然后体外原核诱导表达、纯化目的蛋白并进行SDS-PAGE电泳分析。进一步通过生物学信息方法分析CRP蛋白的生物学功能:利用ProtParam、Protscale、SignalP4.1 Service、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL软件分别分析目的蛋白理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区域、二级与三级结构等一般生物学特征;并借助CDD数据库、Net Phos 3.1 Sever在线软件预测蛋白的功能结构域、磷酸化位点等功能特征;进一步利用ATRING 11.0交互式数据库进行蛋白质交联互作分析。结果:成功构建了重组目的蛋白表达载体pET-28a-crp,并通过原核诱导表达与镍柱亲和吸附法表达、纯化获得CRP目的蛋白;蛋白电泳结果显示CRP蛋白为水溶性蛋白,包括标签蛋白（约4 kDa）的重组目的蛋白分子质量约27 kDa。对CRP蛋白的生物信息学分析结果显示:CRP蛋白大小23.65 kDa、为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,其中α-螺旋占比40%以上,结构较松散;同时成功构建了三级结构模型;CRP蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属PRK11753超级家族;修饰位点及蛋白注释分析显示目的蛋白含20个磷酸化位点,与多个蛋白具有交互作用。结论:本研究利用基因工程方法成功获得了较高纯度肺炎克雷伯菌CRP蛋白,并通过生物信息学手段解析了其生物学特征,为肺炎克雷伯菌感染的临床治疗提供理论基础。     

五汁饮对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的:探讨五汁饮（Wuzhiyin,WZY）对对乙酰氨基酚（acetaminophen,AP）致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:将小鼠随机分为空白组,模型组及五汁饮低、中、高剂量组,灌胃给药100、200、400 mg/kg,空白组和模型组灌胃等体积生理盐水。通过计算脏器指数,检测血清中的ALT、AST及肝组织匀浆中的MDA、GSH、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,结合肝组织切片来观察病理学变化。结果:五汁饮低、中、高剂量组小鼠肝脏指数较模型组降低（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,五汁饮中、高剂量明显抑制血清中的AST、ALT活力（P<0.05或P<0.01）,显著性降低TNF-α、IL-6、IL-1β的水平（P<0.05或P<0.01）,使肝组织匀浆中MDA水平降低,同时缓解肝组织匀浆中GSH水平的升高;组织病理学HE和Tunel染色显示五汁饮可改善肝组织的坏死与凋亡,并减轻细胞炎性浸润。结论:五汁饮对对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用、减少炎症反应及抑制细胞凋亡有关。     

大型精密仪器ICP-MS实验教学的探索

电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)是目前无机元素分析中不可替代的基础设备,将其纳入实验教学内容是时代发展的要求。本实验课采用"线上线下"混合教学模式,将理论教学和实践教学有机结合,主要从ICP-MS概述、无机元素分析实验设计、仪器的使用及样品测定和仪器关键部位的维护4个方面内容展开教学,不断探索ICP-MS教学模式和教学内容,以期提高实验教学质量,使学生在基础技能知识、科研素养和创新意识得到综合提高。     

肺炎克雷伯菌对H2O2氧化胁迫的响应机制研究

目的:研究宿主肠道氧化条件对肺炎克雷伯菌的影响及该菌响应氧化胁迫的机制。方法:通过体外模拟肠道氧化条件,将肺炎克雷伯菌接种在含不同浓度梯度H₂O₂的液体培养基中进行氧化胁迫处理;测定细菌的生长曲线、检测细菌的关键毒力因子-荚膜与生物膜的生成量。并进一步地利用qRT-PCR荧光定量分析荚膜与生物膜表型相关基因的表达差异。结果:在氧化因子胁迫下,当处于较低浓度范围(<1.56 mmol/L)时,肺炎克雷伯菌早期生长受到抑制作用,中后期逐渐适应胁迫、其生长未受明显影响。此外,肺炎克雷伯菌在氧化胁迫条件下荚膜生成量明显降低,呈剂量依赖效应;但在一定浓度范围氧化因子作用下,其生物膜的形成量增加。分子检测表明荚膜结构基因magA表达量明显下调,生物膜相关基因YbaJ出现显著的上调表达。结论:肺炎克雷伯菌通过上调YbaJ基因的表达促进毒力因子生物膜形成以此响应氧化因子胁迫,本研究可为食源性肺炎克雷伯菌与宿主肠道因子互作及致病机制研究提供新思路。     

急性心肌梗死患者甲状腺激素水平与心肌损害、他汀药物负荷后血脂水平的相关性

目的:探讨急性心肌梗死患者甲状腺激素水平与心肌损害、他汀药物负荷后血脂水平的相关性。方法:回顾性分析本院2016年1月-2018年1月收治的200例急性心肌梗死患者临床资料,收集患者一般资料,记录患者用药情况,分别将其纳入低剂量组、中剂量组、高剂量组,治疗前后检测甲状腺激素与心肌酶、hs-CRP及LVEF水平。结果:低、中、高剂量组患者年龄、性别、高血压比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。高剂量组糖尿病、高血脂比例高于中剂量组、低剂量组(P<0.05)。治疗后患者hs-CRP、Log-CKMB、TSH低于治疗前(P<0.05),LVEF、Log-cTnI、FT_3、FT_4水平高于治疗前(P<0.05)。FT_3与Log-CKMB、hs-CRP存在明显负相关,FT_3与Log-cTnI、LVEF呈正相关性,FT_4与TSH与上述指标无相关性。低、中、高剂量他汀治疗背景下,FT_3与患者总胆固醇及LDL-C有相关性,中高剂量他汀类药物治疗的患者FT_3降低,负荷后的总胆固醇与LDL-C升高。结论:甲状腺激素水平与急性心肌梗死患心肌损害有关,且不同剂量的他汀类药物影响患者血脂水平,糖尿病、心肌功能可作为预后影响因素,FT_3则是MACE最强预测因子。     

黄药叶总黄酮提取工艺优化及其抗氧化活性研究

采用超声波辅助提取法提取黄药叶总黄酮,通过单因素试验和正交试验优化黄药叶总黄酮提取工艺,并探讨其体外抗氧化活性。结果表明,黄药叶总黄酮最佳提取工艺参数为乙醇体积分数70%,提取次数3次,提取时间40 min,料液比1∶30（g/mL）,此条件下黄药叶总黄酮得率为（6.18±0.13）%。体外抗氧化试验结果表明,黄药叶总黄酮提取物对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除能力,相应的半数清除浓度（inhibitory concentration,IC50）为 484.12、18.27、46.88 μg/mL,分别为 L-抗坏血酸的 1.50、4.50、2.51 倍,黄药叶总黄酮提取物铁离子还原能力略低于L-抗坏血酸。     

TRPV4原核表达纯化系统的构建及生物信息学分析

目的:构建非选择性阳离子通道蛋白TRPV4的原核表达纯化系统,并对其进行生物信息学分析,为与该目标蛋白相关疾病的研究和药物活性成分筛选提供技术支持.方法:将人源TRPV4基因分别克隆至pET-28a(+)、pET-32a、pET-15b、pGEX-5X-1、pEX-4T和pGEX-6p-1等6种表达载体,并利用BL21...