重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。     

壳聚糖/银复合纳米凝胶的制备及其抗肿瘤药物递送研究

本研究通过自组装技术将N,N'-双(丙烯酰)胱胺接枝到到纳米银粒子表面,得到双键修饰的纳米交联剂(bAG),然后采用双乳液法将bAG掺杂到壳聚糖纳米乳中,通过迈克尔加成反应使bAG表面双键与壳聚糖活性胺基原位交联形成掺杂纳米银的壳聚糖基纳米凝胶。该纳米凝胶可有效装载抗肿瘤药物阿霉素(包封率93%),所负载药物可在微酸性和还原性肿瘤微环境下实现响应性释放。     

Mg~(2+)和氨基酸对重组大肠杆菌BL21(DE3)生长及羧肽酶原B表达的影响

目的研究Mg2+和氨基酸对重组菌株生长及表达pCPB的影响。方法通过摇瓶和发酵罐培养,观察不同Mg2+浓度和氨基酸对重组菌的生长和羧肽酶原B表达的影响。结果添加1g/L Mg2+能提高质粒的稳定性;添加氨基酸能使羧肽酶原B表达量由18·7g/L提高到24g/L。结论添加适量的Mg2+和氨基酸能促进重组菌的生长和提高目的蛋白的表达量。     

荧光定量PCR仪实时控制与数据采集的后台实现

通过对荧光定量PCR仪硬件系统结构的分析,提出一种基于LabVIEW Ⅵ server技术的方法.该方法可以对PCR反应控制、数据采集两个独立的单片机系统进行实时监控,实现了前台数据实时显示、后台实时监控的功能.     

重组大肠杆菌表达的枯草芽孢杆菌腺苷磷酸化酶的应用研究

利用枯草芽孢杆茵嘌呤核苷磷酸化酶基因deoD在大肠杆茵BL21(DE3)中表达所得到的蛋白为酶液,催化核苷、2'-脱氧核苷与嘌呤及其类似物之间的反应.结果表明,嘌呤类核苷与嘧啶类核苷相比,前者达到反应平衡的时间较短、产物的得率(或底物的转化率)较高;腺苷磷酸化酶对核苷类的催化活性要比对脱氧核苷类的催化活性强;就碱基而言,对嘌呤和嘌呤类似物的催化活性基本相同.     

维生素对螺旋霉素发酵的影响

研究了单独添加和组合添加VB1、VB1。和硫辛酸对发酵合成螺旋霉素的影响。结果显示,组合添加0．96mg·L^-1VB1和0．35mg·L^-1硫辛酸时,螺旋霉素产量提高30％。测定结果显示维生素的添加显著增加了乙酸等前体物质的浓度,提高了发酵过程中乙酰激酶、乙酰磷酸转移酶与乙酰CoA合成酶的酶活。由此表明维生素的添加促进螺旋霉素发酵合成可能是因为维生素促进了过程中前体物质的合成,从而增进了内酯环的形成。     

转兔防御素基因小球藻生物反应器异养培养工艺研究

根据5L生物反应器中转兔防御素(NP1)基因小球藻培养过程特征,建立了基于在补糖、补KNO3、pH和溶氧(DO)控制的5L生物反应器中进行转NP1基因小球藻异养培养的工艺,同时将此培养工艺放大到15L生物反应器中。转NP1基因小球藻在15L反应器中培养133h的细胞密度可达34.2g/L,平均生长速率为0.257g/(L·h),比5L生物反应器中培养131h的细胞密度27.8g/L和平均生长速率0.21g/(L·h)分别提高了23%和22%。研究结果证实了转NP1基因小球藻放大培养的可行性,为实现高密度、高表达的大规模培养奠定了基础。     

2-脱氧-L-核糖的合成方法改进

以L-阿拉伯糖为起始物,通过羟基保护、还原、脱保护等5步反应得到一种重要的L-脱氧核苷类药物中间体2-脱氧-L-核糖。在最后一步脱保护过程中,改用在醋酸水溶液中脱去苯甲基保护基团,单步产率由70%提高到92%,总收率提高到40%。化合物的结构用1HNMR、MS及元素分析法进行了表征。     

聚丁内酰胺的热性能改性

聚丁内酰胺的熔点与热分解温度较接近,不利于熔融加工.文中采用溶液共混法制备支化聚丁内酰胺(B-PA4)及线型聚丁内酰胺(L-PA4)共混物,并通过差示扫描量热分析、X射线衍射和热重分析表征共混物的结晶性能及热性能,通过拉伸测试研究了共混膜的力学性能.结果表明,B-PA4的加入使得共混物的结晶度、熔点、热稳定性均发生降低...     

毛细管电泳法手性拆分橙皮苷对映体

通过考察电泳缓冲液pH、环糊精种类和浓度、有机溶剂浓度及操作电压和温度对分离的影响,建立了一种简便快捷的高效毛细管电泳拆分橙皮苷对映体的方法。实验结果表明,以12mmol/L的羟丙基-β-环糊精为手性选择剂,200mmol/L的硼酸/甲醇(V:V=7:3,pH9.7)为电泳缓冲溶液,23kV的分离电压,在30℃下可使橙皮苷对映体达到基线分离,分离度为1.50。分析方法快速简单。