玉米蛋白粉中玉米黄素对人口腔鳞癌细胞株KB增殖的抑制

研究了玉米蛋白粉中玉米黄素的抗肿瘤活性。采用体外培养的人癌细胞株——人口腔鳞癌KB细胞作为对象，观察玉米黄素对抑瘤活性、细胞周期的影响，发现玉米黄素对KB细胞24h的半数抑制浓度IC50为35μmol／L，在20μmol／L时即明显抑制KB细胞的对数生长；细胞周期分析显示时相左移，G1期细胞百分率增多，S期、G2＋M期百分率降低．DNA凝胶电泳显示30μmool／L玉米黄素作用72h能使KB细胞的DNA发生明显的降解．因此从玉米蛋白粉中提取的玉米黄素能明显抑制KB细胞生长，其抗肿瘤活性强，对细胞周期的影响提示G0期阻滞．     

E6-AP对前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究E6相关蛋白(E6-AP)对前列腺癌细胞增殖和细胞周期的影响,阐明E6-AP在雄激素受体通路中的作用机制及在前列腺癌发生发展中的作用.方法:采用电穿孔方法制备tTA及E6-AP稳定转染细胞株;利用强力霉素(DOX)的调节作用,通过MTT实验观察E6-AP过表达及低表达对LNCaP细胞增殖的影响;利用流式细胞仪进行PI单染色检测E6-AP过表达及低表达对LNCaP细胞周期进程的影响.结果:成功构建双质粒稳定转染细胞株,与E6-AP低表达的LNCaP细胞和DOX关闭表达后的稳定株比较,E6-AP过表达的LNCaP细胞数目明显增多(P<0.01),且处于S期的细胞比例明显增大(P<0.01).结论:E6-AP过表达可促进LNCaP细胞增殖并促进细胞进入S期,提示E6-AP与雄激素受体信号通路有密切关联.     

骨髓间充质干细胞对辐射诱发胸腺损伤修复中cyclin-D1和p53基因mRNA转录水平的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对辐射诱发小鼠胸腺损伤修复过程中cyclin-D1和p53基因mRNA转录水平的影响,为阐明BMSCs在肿瘤发生发展过程中的作用提供理论依据。方法全骨髓贴壁法体外分离、培养C57BL/6小鼠BMSCs。将C57BL/6小鼠随机分为3组:正常对照组、辐射组和辐射+BMSCs组,辐射组和辐射+BMSCs组行1.75 Gy X线全身照射,每周1次,连续4周,复制电离辐射诱发的胸腺损伤模型;辐射+BMSCs组末次照射后,经尾静脉注入BMSCs,0.2 ml/只,细胞浓度为2.0×106个/ml。3个月后处死各组小鼠,取胸腺组织,采用RT-PCR法检测各组小鼠胸腺组织cyclin-D1和p53基因mRNA的转录水平,流式细胞术检测细胞周期。结果辐射组小鼠胸腺组织cyclin-D1基因mRNA的转录水平高于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05),而p53基因mRNA的转录水平明显高于正常对照组,且差异有统计学意义(P<0.05)。辐射+BMSCs组小鼠胸腺组织cyclin-D1和p53基因mRNA的转录水平低于辐射组,但差异无统计学意义(P>0.05)。辐射组小鼠胸腺G1期细胞百分比(29.81%)明显低于正常对照组(55.39%),辐射+BMSCs组小鼠胸腺G1期细胞增多(72.08%)。结论 BMSCs可通过抑制cyclin-D1的过度表达和p53基因的突变,使损伤小鼠胸腺细胞停留在G1期进行修复,进而促进组织的修复,抑制肿瘤的增殖。     

雌二醇诱导人正常肝细胞的凋亡以及对细胞周期的影响

目的：观察雌二醇对诱导人正常肝细胞的的凋亡,并且研究其对细胞周期的影响。方法：采用人肝细胞为实验对象,用he染色观察细胞形态学变化;流式细胞记数仪检测细胞周期,AnnexinⅤ/PI双重染色定量检测早期细胞凋亡及Bcl-2/Bax的表达改变。结果：雌二醇48h可以明显抑制正常肝细胞株的增生与活力,诱导细胞的凋亡,且对细胞周期的影响非常显著。结论：其机制可能与Bcl-2/Bax表达的下调有关。     

uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响

目的:检测uPAR抗体对口腔癌HB细胞增殖的影响,并探讨其作用机制.方法:MTT法检测不同浓度的uPAR抗体(20、50、100μg/ml)作用于口腔癌HB细胞,并检测不同作用时间(24、48和72 h)的细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI染色法检测对细胞凋亡的影响;酶联免疫吸附法检测uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D的影响.结果:uPAR抗体能抑制HB细胞的增殖,并呈现浓度和时间依赖关系.uPAR抗体可使HB细胞周期停滞于G0/G1期,随着uPAR抗体作用浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增高.uPAR抗体可促进HB细胞凋亡并呈现一定的浓度依赖关系.uPAR抗体对HB细胞分泌VEGF-D有抑制作用,随着uPAR抗体浓度的增高,其VEGF-D分泌量也逐渐降低.结论:uPAR抗体可抑制HB细胞增殖,其可能机制是使细胞周期停滞于G0/G1期,促进细胞凋亡及减少VEGF-D的分泌.     

硒化卡拉胶联合表阿霉素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察硒化卡拉胶(KSC)和表阿霉素(EPI)联合应用对人肝癌HepG-2细胞生长及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT(噻唑蓝)比色法测定KSC和EPI对HepG-2细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50值及金式指数q判断两者联合作用效果;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A和Cdc25A、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2的表达水平。结果 KSC和EPI可明显抑制HepG-2细胞增殖,且有剂量依赖性。联合组的抑制效果更显著,且优于单一用药组。EPI单独用药48 h的IC50值为3.612 mg/L,与30mg/L KSC联合用药的IC50值降至0.807 mg/L,q值判断两药联合表现为相加作用。倒置显微镜观察给药后细胞形态发生变化,联合组细胞膜破裂呈坏死状。流式细胞术结果表明,两药均可导致S期周期阻滞。Western blot结果显示两药均可使Cyclin A、Cdc25A和Cdk2蛋白表达下调,联合给药组下降更明显。结论 KSC和表阿霉素可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,引起细胞周期S期阻滞,两药联合具有相加效应,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。     

大鼠皮质受损区域Cdk5与细胞凋亡的相关性研究

目的:研究皮质受损区域细胞周期素依赖蛋白激酶5(Cyclin-dependent kinase 5,Cdk5)与细胞凋亡的关系。方法:采用Feeney’s自由落体模型制作大鼠颅脑损伤模型,随机分为2 h、1 d、3 d及7 d组,用免疫组化的方法检测创伤性脑损伤后受损脑皮质区域中Cdk5的表达情况;TUNEL方法检测该区域神经细胞的凋亡情况;Western Blotting方法检测蛋白Cdk5时序表达水平变化的情况。结果:大鼠受损皮质区域Cdk5表达随时间增加而增加,7 d达到高峰;受损皮质区域凋亡阳性细胞变化趋势与Cdk5基本一致;细胞凋亡系数与Cdk5呈正相关性(r=0.88,P<0.05)。对照组无明显变化。结论:大鼠皮质区域损伤可诱导Cdk5数量及激酶活性增加,从而参与神经细胞凋亡。     

吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响

目的: 研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制。方法: 体外培养人宫颈癌Caski细胞株，用RCE-4作为处理因素，MTT法检测细胞增殖活力；流式细胞术检测细胞周期分布；Real-time PCR检测p16、cyclinD1和CDK4 mRNA表达水平；Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平。 结果: RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖，其作用24 h的IC50值为12.33 μmol/L；升高G0/G1期细胞比例，降低S期细胞比例；抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达，降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值，上调p16的mRNA表达，下调cyclinD1和CDK4的mRNA表达。 结论: RCE-4可抑制Caski细胞的增殖，诱导细胞在G0/G1期阻滞，其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路激活有关。     

小鼠Chk1基因RNAi表达质粒的构建与筛选

目的构建并筛选小鼠细胞周期检测点激酶1(Chk1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤的基因治疗探索新途径。方法根据GenBank中登录的Chk1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建Chk1基因RNAi质粒的寡核苷酸,并构建4种重组Chk1RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株。转染后48h,采用RT-PCR技术检测转染细胞中Chk1基因mRNA的转录水平,筛选有效的Chk1RNAi质粒。结果4种重组Chk1RNAi质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确。转染后48h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-Chk1-536的Lewis细胞Chk1基因mRNA的转录水平下降,以其作为后续实验的有效质粒。结论已成功构建并筛选出Chk1基因的iRNA表达质粒,为Chk1基因iRNA治疗肿瘤的研究奠定了基础。     

电离辐射对不同肿瘤细胞细胞周期进程的影响

实验测定了人肝癌细胞系SMMC-7721和hepG2、人卵巢癌细胞系HO-8910和人宫颈癌细胞系Hela受γ射线辐照后的细胞周期阻滞情况,分析了肿瘤细胞DNA损伤后的细胞周期延迟规律和检查点激活的差异。采用^60Coγ射线,剂量率0．30Gy／min,照射剂量3Gy。在照后不同时间收集细胞,用美国贝克曼库尔特公司的流式细胞仪(Coulter Epics XL^TM)测定细胞周期。实验结果如下：