产角蛋白酶植物内生菌的筛选与鉴定

以不同植物的内生菌为出发菌株进行产角蛋白酶菌株的筛选,通过脱脂牛奶平板、高压蒸煮后的羽毛摇瓶实验及未经处理鸡毛摇瓶实验筛选到一株能够在48h内降解未经高压蒸煮的鸡毛的内生菌,该菌株来源于樟树叶片。通过形态学观察、生理生化实验结合16S rDNA基因序列分析的方法确定该菌株为蜡样芽孢杆菌,命名为Bacillus cereus Z-3。以不同的角蛋白为底物进行发酵培养,酶活力测定结果显示该酶降解角蛋白能力由强到弱的顺序为鸡毛、羊毛、头发。     

蜡状芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化

为提高蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)发酵产蛋白酶的能力,对发酵培养基组成及培养条件进行优化。通过单因素试验研究最适C源及其添加量、最适N源及其添加量、温度、种龄、摇床转速、装液量、pH、时间、接种量等条件对菌株产蛋白酶的影响。在此基础上,利用正交试验设计从9个影响因素中筛选3个主要影响因素,即蛋白胨添加量、温度和装液量;再利用Box-Behnken试验设计进行响应面分析,最终确定蜡状芽孢杆菌发酵产酶条件的最优条件为:蛋白胨添加量7.9g/L,温度26.7℃,装液量56.4mL。优化后,蛋白酶活力达到753.67U/mL,比初始蛋白酶活力(249.50U/mL)提高了2.02倍。     

细菌型豆豉蜡样芽孢杆菌的动态变化研究

采用传统分离鉴定法对细菌型豆豉不同发酵时期蜡样芽孢杆菌污染情况进行动态检测。结果表明,自然发酵过程中,蜡样芽孢杆菌最高达到2.3×104 CFU/g;纯种强化发酵过程中蜡样芽孢杆菌最高达1.1×103 CFU/g,自然发酵豆豉的蜡样芽孢杆菌含量高于纯种强化发酵。豆豉成品中总蜡样芽孢杆菌数量均＜105 CFU/g,短期内不存在食品安全问题。经分析,豆豉成品中蜡样芽孢杆菌主要来源于前发酵豆豉。     

蜡状芽孢杆菌ZJB-07112酰胺酶的分离纯化及其酶学性质

用一株蜡状芽孢杆菌新菌株ZJB-07112 (Bacillus cereus ZJB-07112)发酵生产酰胺酶,经超声波细胞破碎、High Q阴离子色谱、Phenyl-Sepharose疏水色谱等步骤获得了凝胶电泳均一的酰胺酶。用12.5% SDS-PAGE测得该酶的分子量约为60.6 kD。其N端氨基酸序列为ATIRPDDKAI。该酶水解反应的最适pH和最适温度分别为7.5和35 ℃。在pH 7.5条件下,该酶在50 ℃以上容易失活,60 ℃保温30 min后,仅保留10.8%的酶活。除了Hg⁺ 、Ag⁺等重金属离子和尿素外,其他金属离子和EDTA对该酶的活性影响不大。以丙烯酰胺为底物时,该酶的K_m和V_max值分别为2.64 mmol·L^-1和0.6 μmol·min^-1·ml^-1。     

日粮中添加复合微生态制剂对蛋种鸡生产性能的影响

研究日粮中添加复合微生态制剂对蛋种鸡生产性能的影响,试验选用1日龄海兰褐蛋种鸡320只,随机分为4个组,每组4个重复,每重复20只。分别在基础日粮上添加0、50、100、200g/t的复合微生态制剂。结果表明:添加复合微生态制剂组蛋种鸡的平均日采食量都低于对照组,其中100、200g/t复合微生态制剂组在0～3周龄时达显著水平(P<0.05);200g/t复合微生态制剂组蛋种鸡的平均日增重在11～16周龄时显著高于对照组(P<0.05);0～6周龄时,100、200g/t复合微生态制剂组蛋种鸡的料肉比均显著低于对照组(P<0.05)。200g/t复合微生态制剂组平均跖长日增长在4～6周龄时显著高于对照组(P<0.05)。复合微生态制剂添加水平为100g/t的综合效果最佳。     

细菌胞壁破碎条件优化及高肽酶菌株的筛选

为构建细菌总肽酶活力的测定方法,筛选出肽酶高产的益酵细菌,采用单因素试验和L9(34)正交试验,以反应体系中游离氨基酸总量为肽酶活力指标,对细菌细胞破碎条件进行优化并测定供试菌株的总肽酶活力。结果表明,超声-酶解法破碎细菌细胞的最佳条件为:溶菌酶添加量200μL、超声功率400 W、时间4 min、时间间隔3 s。在此条件下测定153株革兰氏阳性杆菌的总肽酶活力,筛选出肽酶高产革兰氏阳性杆菌11株,分别是DF2-1、ZM1-1、ZM2-1、ZM3-1、DF3-1、DF3-2-1、ZMJ-5、ZMJ-2-6、ZMJ-1-1、DFM-4和WCF-2。     

蜡样芽胞杆菌生长特性及大蒜精油对其抑菌活性的研究

主要研究了37℃条件下3种蜡样芽胞杆菌在营养肉汤中的生长状况,建立了37℃下蜡样芽胞杆菌在营养肉汤中的Boltzmann牛长模犁,3条牛长曲线相关系数鼯均大于0．97;检测了不同培养时间蜡样芽胞杆菌的产芽胞情况,结果表明1号菌株和14号菌株较早产芽胞,培养相同时间,产芽胞数：1号菌株,4号菌株〉标准菌株;采用牛沣杯法和平板计数法研究了大蒜精油对蜡样芽胞杆菌的抑制效果,结果表明浓度为lO。的人蒜精油对3种蜡样芽胞杆菌都有很好的抑制效果,3种菌株中l号菌株最难抑制。     

基于环介导等温扩增技术的产呕吐毒素 蜡样芽胞杆菌特异性检测

本研究旨在建立食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速检测方法。基于产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌合成酶基因cesB靶基因,设计4条特异性引物(2条内引物、2条外引物),建立环介导等温扩增技术(LAMP)。然后采用2株产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌、19株蜡样芽胞杆菌和41株非蜡样芽胞杆菌验证了该LAMP具有很好的特异性。LAMP检测的灵敏度在DNA水平上达到1.49 pg/μL,纯菌的灵敏度为5×10~3 cfu/mL。人工污染米饭样品,当起始污染量为2 cfu/g时,37℃增菌培养6 h,用试剂盒法和煮沸法提取的DNA,都可以检出产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌。采用此LAMP方法进行了72份实际样品的检测,检出2份产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌阳性样品,与传统方法一致。因此,本研究建立的LAMP检测方法可应用于食品中产呕吐毒素蜡样芽胞杆菌的快速特异检测。     

木聚糖酶合成菌株的诱变选育

以黑曲霉、蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌为出发菌株,采用紫外物理诱变及紫外物理诱变和紫外亚硝酸复合诱变的方法,选育培养出产木聚糖酶酶活较高的菌株。经过紫外诱变后黑曲霉菌株所产酶酶活为17.3716U/ml;经过复合诱变后黑曲霉菌株所产酶酶活为15.2144U/ml。经过紫外诱变后枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌菌株所产木聚糖酶酶活分别为16.1328U/ml和13.7200U/ml。     

蜡样芽孢杆菌D-11降解粉末壳聚糖制备水溶性低聚糖的研究

为了省去制备胶状壳聚糖的工艺,能有效降解粉末壳聚糖利用到低聚糖的生产,利用自然环境中筛选得到的产壳聚糖酶菌株蜡样芽孢杆菌D-11,进行了基质条件优化实验。结果表明,以筛孔分别为20、40、60、80目的粉末壳聚糖(3±0.5 cm;脱乙酰度98.1%)为基质,培养液含有1%的吐温60时,降解粉末壳聚糖的能力比对照提高12%,当筛孔60目的粉末壳聚糖为碳源(浓度0.6%)时,降解粉末壳聚糖的能力提高62.5%。随着基质每毫克中酶活性的提高,对粉末壳聚糖的分解率也随之增加。同时利用薄层色谱法分析低聚糖的分布,有效证明了该D-11菌株具有降解粉末壳聚糖的能力,且发现壳聚糖酶对基质粉末状态的降解率有选择性。