基于iTRAQ蛋白组技术的沙门氏菌抗酸性机理的研究

目的:以鼠伤寒沙门氏菌CGMCC 1.1190为对象,研究其经柠檬酸反复胁迫处理诱导的抗酸性机理。方法:CGMCC 1.1190在经柠檬酸调节到pH为2.5的TSB培养基中胁迫处理并转接12次培养后,获得的抗酸性菌株。采用iTRAQ技术对CGMCC 1.1190抗酸性菌株的蛋白组进行分析,通过GO功能注释和富集对差异蛋白进行聚类分析,以及KEGG注释和富集对差异蛋白参与的通路进行联合分析。结果:iTRAQ技术结果显示CGMCC 1.1190抗酸性菌株共2373个蛋白,其中195个差异蛋白中,95个显著下调蛋白和100个显著上调蛋白。GO分析和KEGG分析结果显示CGMCC 1.1190抗酸性菌株高表达应激蛋白相关基因;高表达细胞膜相关蛋白可促进CGMCC 1.1190菌体细胞膜的完整性;高表达鞭毛相关蛋白可增强CGMCC 1.1190菌体的运动能力并促进保护性生物被膜的形成;高表达双组分系统相关蛋白来响应酸信号,通过调控酸激蛋白的产生增强CGMCC 1.1190菌体的抗酸性;低表达ABC转运系统相关蛋白来降低细胞膜对H+的通透性,达到保护菌体的作用;高表达能量代谢途径相关蛋白为CGMCC 1.1190菌体应对酸胁迫提供能量。结论:CGMCC 1.1190在经pH为2.5的柠檬酸胁迫后,能通过蛋白水平的表达变化启动一系列应答机制并生存下来,通过合成一些蛋白质来增强CGMCC 1.1190的抗酸性。     

诱导少孢根霉分泌胞外β-葡萄糖苷酶条件的研究

对少孢根霉在液态发酵后产生的β-葡萄糖苷酶最大酶活时最适工艺条件进行了研究。研究结果表明以吐温-80、吐温-20、曲通-x、聚乙烯醇、V_c、醋酸钠和EDTA作诱导剂,以吐温-80的效果最佳,使用量为100μL/ 100mL时获得最大酶活;麸皮、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、玉米粉作碳源,以麸皮的产酶效果最佳,2%的麸皮使用量获得最大酶活。少孢根霉产β-葡萄糖苷酶最适发酵工艺条件:接种量2%少孢根霉在75mL黄豆芽液体培养基中,加2%的麸皮、调发酵培养基的初始pH值6.0,再加100μL/100mL诱导剂吐温-80,于35℃培养48h。     

菜籽分离蛋白分子质量分布及酶解条件的研究

以脱脂"双低"油菜籽为原料,利用碱溶解酸沉淀法提取菜籽分离蛋白;用SDS-PAGE凝胶电泳研究菜籽蛋白的分子质量的组成;以水解度和氮回收率为考察指标,用响应面分析法拟合了Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白成菜籽肽的二次多项数学模型,优化了酶解菜籽分离蛋白的工艺参数。SDS-PAGE凝胶电泳研究表明利用碱溶解酸沉淀提取的菜籽分离蛋白主要是2S清蛋白。响应面分析法研究的试验结果表明,酶的使用量、pH、酶解温度、酶的使用量与pH的交互作用对Alcalase 2.4L酶解菜籽蛋白的水解度和氮回收率的影响均显著(P0.05)。通过求解菜籽肽的二次多项数学模型的逆矩阵方程,可得Alcalase 2.4L水解菜籽分离蛋白的最佳条件为:酶的使用量0.05 Au/g,pH 9.0,酶解温度54℃;在此酶解条件下,菜籽分离蛋白浓度为5%时,水解5 h,所得的水解度和氮回收率分别为35.12%及52.96%。     

温、湿度对储藏小麦粉中霉菌区系的影响

通过模拟储藏,研究了温、湿度对小麦粉储藏过程中霉菌区系的影响。结果表明,小麦粉储藏一段时间后水分达到平衡状态,且水分与储藏温度和湿度呈显著的二元线性关系。由于储藏温度和小麦粉水分的联合影响,随着储藏时间的延长,霉菌量基本呈下降趋势,通过方差分析,在大多数情况下,温度是影响小麦粉中霉菌量的显著性因素,特别在55%湿度下,霉菌量与温度、储藏时间呈显著的二元非线性关系。在储藏温度≥20℃条件下,湿度是影响小麦粉中霉菌量的显著性因素。另外在不同温、湿度条件下,优势菌始终是白曲霉,但比例略有差异。     

小麦粉中植物酯酶提取、纯化及应用研究

从小麦粉中提取植物酯酶,用70%饱和硫酸铵对植物酯酶进行纯化,酶催化反应温度在45℃、pH4.5~5.5时酶活性最大,酶催化反应动力学显示10m in内反应呈线性关系。利用有机磷农药能抑制植物酯酶酶促反应的机理,建立了快速测定粮食中有机磷农药残留的方法。测定有机磷农药残留反应体系最大吸收峰是在480nm之间,最适乙酸-β-萘酯用量为1.0mL;在农药浓度在0.1~1.0mg/kg之间时,所到之处得到的吸光值与农药浓度呈线性相关;在青菜汁、茶叶汁和大米提取液回收率分别为89%、84%和93%。     

固定化酶制备麦胚蛋白粉操作单元研究

中空球形壳聚糖经3%戊二醛活化后与真菌α-淀粉酶在室温反应2h,冰箱静置过夜,制备固定化α-淀粉酶.固定化α-淀粉酶最适催化温度为60℃,最适pH值为5.0,相对酶活力为7.4%.固定化α-淀粉酶连续使用15d,酶活力未下降,生产麦胚蛋白质的纯度达89%,得率为79%.     

两步法制备大豆异黄酮操作单元研究

麸皮、玉米粉等成分，按1：1加矿泉水，灭菌后接种3％菌种，30℃发酵5d，刚缓冲液提取β-葡糖糖苷酶。常用氮源和2．5％乳酸对菌种产酶无影响。纯化的β-葡糖糖苷酶最适pH为4．4～4．8，最适催化温度60℃，最适催化时间30min。用含2％CaCO3的60％乙醇在50℃提取豆粕中苷类物质，用石油醚、氯仿去除杂后，再用正丁醇精提豆粕中苷类。用特制碎胶柱分离正丁醇液，用丙酮等洗脱获高纯度大再异黄酮糖苷。用β-葡糖糖苜酶水解片黄酮糖苷，经超滤、固定化细胞等处理，制备高纯度大豆异黄酮甙元。     

酸法提取菜籽多糖的抗氧化活性研究

为进一步开发利用菜籽资源,本研究从菜籽饼粕中以酸法提取菜籽多糖并对其抗氧化性进行研究。测定指标包括还原能力、DPPH自由基清除能力、羟自由基(.OH)清除能力和超氧阴离子自由基(O-2.)清除能力。结果表明:酸法提取菜籽多糖具有一定的清除.OH、DPPH自由基的能力及还原能力,而且其抗氧化能力与多糖的质量浓度成正相关性;其中,当多糖质量浓度为2mg/mL时,DPPH自由基清除能力能达到49.9%;当多糖质量浓度为4mg/mL时,.OH的清除能力能达到30.4%;但其对于O-2.几乎没有清除作用。     

稻米储藏期间陈化机制研究

稻米的陈化是一个复杂的过程,包括物理化学特性变化.稻米中主要成分有淀粉、蛋白质、脂肪,这些成分影响稻米的蒸煮和食用品质.在稻米储藏期间尽管淀粉、蛋白质、脂肪的总量基本上不发生变化,但它们的结构却发生了变化,这些变化影响到米饭的凝胶、糊化特性、风味和质地.本文综述了稻米的物理、化学特性以及储藏期间物理、化学特性的变化及其变化对稻米食用品质的影响.     

近红外光谱法快速测定菜籽油酸值和过氧化值波长的优化

将近红外光谱技术和化学计量法结合建立模型,并采用内部交叉验证方法来评价所建模型的性能,优化近红外光谱法快速测定菜籽油酸值(AV)及过氧化值(POV)的波长。结果表明,波长范围在4 935.478~5 733.949 nm时,RMSEC、SECV、R~2和RCV值分别为0.245、0.060、0.975和0.987,适合建立测定AV的近红外模型;而波长范围在5 760.950~6 557.493 nm时,上述4个指标分别为0.124、0.061、0.987和0.993,适合建立测定POV的近红外模型。为建立一级菜籽油AV和POV近红外光谱快速检测方法提供理论依据。