重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。     

水泥生产企业价值链分析与应用

近年来，在新型干法水泥飞速发展的同时，许多传统的水泥企业通过改革和重组．基本建立了现代企业制度．开始摆脱传统管理理念的束缚．为管理创新带来较大的契机。但从总体水平来看．水泥生产企业的管理水平、管理理念与其他行业相比．仍存在着一定的差距。当前．随着国家宏观调控效果的显现，市场需求增速减缓．水泥行业新一轮产品同质化的竞争将更为     

重组人白细胞介素-4融合蛋白在大肠杆菌中诱导表达的影响因素

目的　提高人重组白细胞介素 4 (rhIL 4 )在大肠杆菌中的表达量。方法　研究rhIL 4的体外诱导条件 ,包括诱导时间、IPTG浓度、诱导温度、菌体密度对表达量的影响。结果　最佳表达条件是诱导时间为 4h ,诱导温度为 4 2℃ ,A6 0 0 为 0 7～ 1 0 ,而IPTG的浓度对表达量无显著影响。结论　诱导时间、诱导温度和菌体密度的优化能提高外源基因在大肠杆菌中的表达产量。     

大规模生产重组酵母乙肝疫苗工艺介绍

<正> 本文介绍国外利用重组DNA酵母工业化生产乙肝疫苗工艺,希望对引进、消化和改进国外技术有所启发。一、酵母表达HBsAg的特性电镜观察发现,重组酵母表达的HBsAg在未经化学处理的情况下自发地构成平均直径为22nm的球形颗粒。这些颗粒含有未糖基化的HBsAg多肽和主要由酵母特有的磷脂构成的脂基。其氨基酸的构成、羟基和氨基酸末端序列分析、质谱仪分析的肽谱等表明,重组酵母忠实地表达和生产了HBsAg。酵母生产的HBsAg在细胞内以颗粒形成存在,其中的亚单位通过非共价键不紧密地结合在一起。     

用于害虫治理的重组杆状病毒

杆状病毒是一类非常有益的病毒。它们不感染人或植物,但对于许多昆虫种类可以提供有效的自然生物控制。杆状病毒和噬菌体一样对基础病毒学和生物学研究来说是一种最有用的工具,杆状病毒在基础研究和医学应用方面也是蛋白质表达的多用途载体。作为表达体系的载体,杆状病毒具有表达率高和生物活性等众多优点。在北美,杆状病毒用于防治害虫可以追溯到1930年之前,即应用欧云杉锯角叶蜂的多角体病毒(NPV)防治松树害虫。之     

高效表达干扰素α1b(IFN-α1b)工程菌的高密度发酵及干扰素纯化

目的 在构建高效表达IFN-α1b重组大肠杆菌工程菌的基础上,建立适合该工程菌的发酵和纯化工艺。方法 采用高密度培养方法(HCDC)和柱层析纯化技术。结果 发酵密度A_(600)可达70,表达量为菌体总蛋白的30％左右。经破菌、离心、离子交换和分子筛凝胶过滤得到IFN-α1b纯品,FPLC测定纯度为100％,活性为4.99×10~7 U/ml,比活为2.5×10~7 U/mg,均符合2000版《中国生物制品规程》要求。结论 已建立了适用于规模化生产的发酵纯化工艺。     

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。     

应用免疫策略对蒙脱石HIV DNA疫苗免疫作用的研究

目的运用Prime—Boost策略,研究蒙脱石(MMT)DAN疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法选用3H-TdR掺入法测定MMT和DNA联合免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖反应;采用ELISA试剂盒检测血清中的抗体和细胞因子。结果使用痘苗病毒和/或加入MMT加强免疫DNA疫苗后,均可以提高其体液和细胞免疫功能。结论“Prime-boost-boost”免疫方案在小动物模型中取得了较好的免疫效果。