HIV-2型gp105、gag核酸疫苗构建与免疫学研究

目的 构建含 HIV－2 gp 105和 gag基因的核酸疫苗，并评价其免疫效果。方法 将 HIV－2 gp 105型和gag 基因克隆到核酸疫苗载体 pcDNA3．l（＋）中，构建重组核酸疫苗质粒。通过间接免疫荧光试验在细胞水平上检测gp105和ggg基因的表达产物。重组核酸疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4+、CD8+淋巴细胞亚类数，用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体。结果 构建了3种重组核酸疫苗质粒pcgag、pcgp105和pcgag-gp105-gp105，转染BHK细胞后都能表达外源蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，并诱导产生抗HIV-2特异性抗体，其中pcgag-gp105的免疫效果较pcgag和pcgp105显著。结论 构建的重组核酸疫苗质粒均能诱导机体产生免疫反应，含有融合基因的pcgag-gp105免疫效果最显著。     

HIV-2 Gp105基因重组鸡痘病毒的构建及鉴定

目的　研制预防HIV -2的重组鸡痘病毒活载体疫苗。方法　将HIV -2Gp10 5基因插入鸡痘病毒转移载体pUTA2复合启动子的下游 ,构建鸡痘病毒转移载体pUTA2 Gp10 5。将该重组质粒与鸡痘病毒 (FPV) 2 82E4株共转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,进行同源重组。通过 3次BrdU加压筛选 ,以PCR、RT PCR、IFA和Westernblot鉴定重组病毒。结果　从重组鸡痘病毒的基因组和总RNA中能扩增出大小为 6 5 3bp的目的基因 ;感染重组病毒的CEF细胞与特异性荧光抗体发生阳性反应 ;表达产物与人HIV- 2血清发生阳性反应 ,目的蛋白相对分子质量约为10 5 0 0 0。结论　成功获得 1株重组鸡痘病毒 ,可正确表达HIV 2Gp10 5基因。     

SARS病毒S2蛋白在毕赤酵母中的表达及鉴定

目的研究用毕赤酵母菌表达SARS病毒S2蛋白亚单位。方法依据GenBank中SARS基因组序列,采用人工合成的方法合成SARS病毒刺突蛋白S2亚单位的基因(1590bp),再与CTL表位基因(195bp)重组后,将其克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组表达质粒pPIC9K-S2,转化毕赤酵母GS115,并经MD和MM平板筛选及PCR鉴定,得到阳性重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-S2。经诱导、表达,并对表达产物进行分析、鉴定。结果所构建的重组质粒pPIC9K-S2正确,在毕赤酵母中可高效表达,其表达产物与阳性SARS血清产生特异性反应。结论SARS病毒刺突蛋白S2亚单位可在毕赤酵母中高效表达,产物具有良好的抗原特异性。     

输变电设备智能化关键技术及发展趋势分析

本文从智能化相关技术电网中的应用情况出发,纵观智能技术的应用发展变迁,结合输变电体系的具体情况,针对当前存在于该领域中的几类主要智能技术给出了必要分析。     

基于SMES/BESS混合储能抑制风电功率波动的控制策略

针对风能的随机性和波动性,风力发电系统易出现功率波动的问题,采用超导磁储能(SMES)和蓄电池(BESS)混合储能的方式来平抑功率波动,提出了一种改进型混合遗传算法的变参数荷电状态(SOC)分区控制优化策略。基于自适应学习的思想对算法进行了改进,使得算法的收敛速度和精确度得以提高。将储能系统荷电状态剩余量和荷电状态分区限值作为改进后混合遗传算法的目标函数和边界条件。所得目标结果作为滤波器滤波时间常数修正值对其进行修正,从而实现功率二次分配。在Matlab/Simulink中搭建仿真模型验证了该控制策略的有效性。所提控制策略可以对任意时刻SMES和BESS出力进行最优配合,同时能减小电池充放电深度和提高对风电功率波动的平抑效果,且能有效提高混合储能系统的使用寿命。     

外保温复合夹心墙在施工中的应用

叙述了外保温复合夹心墙的优点，重点介绍了外保温复合夹心墙在施工中注意的要点，并讲述了外保温复合夹心墙的工程验收标准。     

DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达

目的利用塞姆利基森林病毒(SFV)复制子构建新型真核表达载体,并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定。方法将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下,连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中,构建新型真核表达载体pCS,再将含HIV-1 MEGp24基因插入至pCS载体中,构建重组核酸疫苗pCS-MEGp24。用脂质体法将重组质粒转染入BHK-21细胞,进行表达产物的检测。结果间接免疫荧光检测显示,重组质粒转染的BHK-21细胞能有效表达HIV-1 MEGp24,并与HIV阳性血清反应。结论所构建的核酸疫苗可在BHK-21细胞系内进行表达,且MEGp24基因的表达蛋白具有特异性,为构建新型HIV-1中国流行株核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。     

利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达 HIV-1Gag蛋白

目的在昆虫细胞中表达中国流行株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白,制备重组 Ｇａｇ蛋白。方法将中国 株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１的 Ｇａｇ全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体 ｐｆａｓｔｂａｃＩ中,构建了重组质粒 ｐｆａｓｔＧａｇ。经转座及平板 筛选,提取重组穿梭质粒 Ｂａｃｍｉｄ。经转染Ｓｆ９昆虫细胞后,获得了重组杆状病毒。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白。结果重组病毒在昆虫细胞 Ｓｆ９中高效表达了中国株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋 白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性,可与ＨＩＶ－１标准阳性血清及ｐ２４单克隆抗体发生较强的免疫反应。结论 重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究。     

治疗用质粒DNA的纯化工艺

目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。     

HIV-1表面糖蛋白gp120 DNA疫苗质粒的构建与表达

目的 构建含HIV-1表面糖蛋白基因的真核表达质粒,并在Hela细胞内表达。方法 在核酸疫苗载体质粒 pVAX1中插入gp120基因,构建真核表达质粒pVAXGP。在体外用脂质体法将重组质粒转染Hela细胞,并用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验和Dot-ELISA对表达产物进行检测。结果 间接免疫荧光试验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹试验和Dot-ELISA结果均显示,重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gp120蛋白。结论 已成功地构建了真核表达质粒,且表达的蛋白具有良好的反应原性和特异性。