中国株HIV-1融合基因gag-gp120在大肠杆菌中的表达

<正>艾滋病是目前人类最难控制、耗资最大的一类病毒性疾病,引起艾滋病的主要病原为HIV-1。GaP蛋白是HIV-1的主要结构蛋白之一,它在病毒的复制、成熟、感染和形态维持等方面均起着重要的作用,并能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。由于它在不同毒株间相对保守,因此,其诱导的抗体水平在临床上成为HIV感染的主要检测指标。Gp120蛋白是由HIV-1Env蛋白经剪切而形成的,在gp120上的C2区及其羧基末端等都与中和抗体的产生有关,因此,它已作为首选的HIV-1亚单位疫苗和重要的诊断试剂。在大肠杆菌中表达外源基因具有操作简便,成本低廉等优点。尽管有些表达的产物不能被忠实地翻译后加工,但可作为检测和诊断方面的研究。     

遥感科学在干旱环境中的应用

干旱/牧场地区的遥感已发展到能以较低的投资适应这些地区对大尺度陆地管理信息的需要,其应用包括牧场管理、流域分析、抗沙漠化、野生动物栖息地管理,矿物残渣的回收利用、干旱区灌溉农业交界地的管理、野外游览等。干旱地区的一些独特的遥感问题都与稀疏的植被、多样     

抗HIV-1gp120单链抗体的原核表达与初步纯化

目的 在原核细胞表达抗HIV-1gp120单链抗体基因,纯化后检测其活性。方法 将单链抗体基因插入pET28原核表达载体进行诱导表达,对包涵体进行变性复性处理后,利用Ni-NTA金属螯合层析柱对表达的蛋白进行初步纯化,纯化后的单链抗体与gp120标准抗原膜条反应。结果 表达产物主要以包涵体形式存在,最高表达量占菌体总蛋白量的51％,金属螯合层析一步纯化后纯度超过85％。纯化后的单链抗体可以特异地识别gp120标准抗原。结论 在原核细胞表达的单链抗体,复性纯化后具有生物学活性。     

利用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达 HIV-1Gag蛋白

目的在昆虫细胞中表达中国流行株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋白,制备重组 Ｇａｇ蛋白。方法将中国 株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１的 Ｇａｇ全基因序列,克隆到杆状病毒表达载体 ｐｆａｓｔｂａｃＩ中,构建了重组质粒 ｐｆａｓｔＧａｇ。经转座及平板 筛选,提取重组穿梭质粒 Ｂａｃｍｉｄ。经转染Ｓｆ９昆虫细胞后,获得了重组杆状病毒。用 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和间接免疫荧光实验分析表达的目的蛋白。结果重组病毒在昆虫细胞 Ｓｆ９中高效表达了中国株 Ｂ亚型 ＨＩＶ－１ Ｇａｇ蛋 白,表达的重组蛋白具有良好的抗原活性,可与ＨＩＶ－１标准阳性血清及ｐ２４单克隆抗体发生较强的免疫反应。结论 重组表达产物可用于艾滋病的免疫诊断和疫苗研究。     

基于SMES/BESS混合储能抑制风电功率波动的控制策略

针对风能的随机性和波动性,风力发电系统易出现功率波动的问题,采用超导磁储能(SMES)和蓄电池(BESS)混合储能的方式来平抑功率波动,提出了一种改进型混合遗传算法的变参数荷电状态(SOC)分区控制优化策略。基于自适应学习的思想对算法进行了改进,使得算法的收敛速度和精确度得以提高。将储能系统荷电状态剩余量和荷电状态分区限值作为改进后混合遗传算法的目标函数和边界条件。所得目标结果作为滤波器滤波时间常数修正值对其进行修正,从而实现功率二次分配。在Matlab/Simulink中搭建仿真模型验证了该控制策略的有效性。所提控制策略可以对任意时刻SMES和BESS出力进行最优配合,同时能减小电池充放电深度和提高对风电功率波动的平抑效果,且能有效提高混合储能系统的使用寿命。     

外保温复合夹心墙在施工中的应用

叙述了外保温复合夹心墙的优点，重点介绍了外保温复合夹心墙在施工中注意的要点，并讲述了外保温复合夹心墙的工程验收标准。     

DNA表达载体构建及HIV多表位核酸疫苗的设计与表达

目的利用塞姆利基森林病毒(SFV)复制子构建新型真核表达载体,并对含HIV-1中国流行株B亚型核心蛋白p24及多表位MEG嵌合基因的核酸疫苗进行表达与鉴定。方法将含SFV复制子的元件从pSFV-MCS中切下,连入含CMV启动子及增强子的pIRESneo载体中,构建新型真核表达载体pCS,再将含HIV-1 MEGp24基因插入至pCS载体中,构建重组核酸疫苗pCS-MEGp24。用脂质体法将重组质粒转染入BHK-21细胞,进行表达产物的检测。结果间接免疫荧光检测显示,重组质粒转染的BHK-21细胞能有效表达HIV-1 MEGp24,并与HIV阳性血清反应。结论所构建的核酸疫苗可在BHK-21细胞系内进行表达,且MEGp24基因的表达蛋白具有特异性,为构建新型HIV-1中国流行株核酸疫苗的可行性提供了重要实验依据。     

无梁楼盖结构柱帽加固方法的探讨与分析

对已使用了80多年的优秀历史建筑进行结构鉴定和加固设计后，根据该房屋早年的无梁楼盖柱帽加固和现场荷载试验资料，对柱帽加固方法进行了探讨与分析，给同类工程的加固设计提供借鉴。     

表达HIV-1 gp160膜蛋白靶细胞的制备及鉴定

目的获得表达INV-1 gp160膜蛋白的靶细胞,用于HIV-1特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和抗HIV-1重组毒素细胞杀伤活性检测。方法采用PCR方法,从质粒pJen 10中扩增HIV-1 gp160基因,插入pGEM-T载体,测序后克隆入pIRESl neo载体中构建成重组质粒pIRE160,酶切鉴定正确后,转染人肝癌细胞(SMMG-7721),CA18加压筛选至细胞不再死亡为止,并采用Western blot和间接免疫荧光法对制备的靶细胞进行检测。结果HIV-1 gp160在SMMC7721表面表达,并裂解为gp120和gp41蛋白。结论已成功得到稳定表达HIV-1 gp160的靶细胞,且表达的蛋白具有良好的特异性。     

治疗用质粒DNA的纯化工艺

目的探索适合大规模生产治疗用质粒DNA的纯化工艺。方法采用中空纤维柱收菌、碱裂解,再应用中空纤维柱浓缩质粒,经分子筛、亲和、离子交换等层析分离纯化质粒DNA,并应用凝胶电泳、PCR、核酸蛋白检测仪、BCA蛋白检测试剂盒和内毒素检测试剂盒对所纯化的质粒DNA进行全面检定。结果所获得的超螺旋质粒DNA达到样品总质粒的91.2%;质粒DNA总纯度为1.8;内毒素含量小于10EU/mg;几乎检测不到蛋白质残留,未检出基因组DNA残留。各项指标均符合有关质量标准。结论所采用的纯化工艺省时省力,制备的质粒DNA纯度高,适用于大规模生产治疗用质粒DNA。