应用于转基因食品检测的PCR技术及其进展

近几年全球转基因作物种植面积连年大幅度增加,随之产生的转基因食品更是琳琅满目,然而在转基因食品安全性尚无定论情况下,转基因食品的检测技术便显得尤为重要。在转基因食品检测中,PCR技术由于具有快速、灵敏、准确等一系列优点,从而得到了迅猛发展。本文介绍了转基因食品检测中使用的各种PCR技术,并根据它们各自的原理对其优缺点进行了比较和探讨,同时阐述了检测过程中应该注意的一些问题。此外,一些新技术与PCR的结合,对PCR技术的完善和发展提供了有力的支持,并在转基因食品检测中取得了良好的效果。     

婴幼儿配方乳粉中微量碘测定方法的比较

本文采用气相色谱法(GC)、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、离子色谱法(IC)分别测定了婴幼儿配方乳粉中碘的含量。通过多方面因素对比:前处理的方式、碘的测定种类、方法线性范围、回收率、检出限、精密度等,得出电感耦合等离子体质谱法前处理操作简便,受奶粉复杂基质干扰最小,在1~50μg/L线性范围内,相关系数可达到0.999以上。回收率在95.9%~103.7%之间,RSD为0.6%~2.2%,检出限为0.6μg/100g,最适合用于婴幼儿配方乳粉中微量碘的实验室常规分析。     

两种酸奶后酸化期风味物质的比较研究

比较了传统双菌发酵酸奶和高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）与双菌复配发酵酸奶在后酸化过程中pH、双乙酰、乙醛及4种有机酸（柠檬酸、丙酮酸、乳酸、甲酸）的变化情况。试验结果显示,以上两种酸奶在后酸化期双乙酰和乙醛含量基本保持一致而有机酸含量差异较大。三菌复配型酸奶中甲酸含量较高而柠檬酸含量较低,其它两种有机酸在两种酸奶中的含量比较接近。上述结果表明,以德式乳杆菌保加利亚亚种（Lb.delbrueckiisubsp.bulgaricus）和嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）复配一定比例高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌为发酵剂制作的酸奶保持了酸奶原有的醇香,还形成了一定独特的风味特点。     

高活性副干酪乳杆菌冻干菌粉的制备及工艺优化

目的:优化副干酪乳杆菌多种冻干保护剂的配比和真空冷冻干燥工艺参数,提高发酵剂的活菌含量,为冻干菌粉的制备提供指导。方法:以存活因子为指标,通过单因素实验筛选大分子保护剂、糖类、聚合物类、抗氧化剂类保护剂,应用正交试验优化保护剂配比,并通过单因素分析冷冻干燥的工艺参数,采用扫描电子显微镜观察冻干菌体形态。结果:副干酪乳杆菌冻干保护剂配方为:脱脂奶粉15%,蔗糖20%,聚乙烯吡咯烷酮(PVP K-30) 7%,谷胱甘肽(GSH)1.3%;真空冷冻干燥的工艺参数为在15℃下预处理2 h,保护剂pH为6.5,菌液和保护剂的比例为1∶1.5 (v/v),冻干厚度为0.5 cm,预冻方式为在液氮(-196℃)下处理15 min。在此条件下,副干酪乳杆菌经真空冷冻干燥后存活因子达(0.998±0.001),活菌数为(2.35±0.02)×1011CFU/g。经电镜观察发现菌体形态饱满,结构完整。结论:研究结果表明优化后的冻干保护剂及冻干工艺参数适用于副干酪乳杆菌菌体的保存,菌体活性保持良好,该工艺具有良好的应用推广前景。     

植物乳杆菌NDC75017抗氧化活性研究

目的：研究酸奶中所筛选的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）NDC75017在不同体系中的抗氧化作用模式。方法：测定了活细胞、无细胞提取物、胞外分泌物及菌体灭活物质的自由基清除能力、总抗氧化能力（totalantioxidant capacity,T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase,T-SOD）活性、还原能力和金属离子螯合能力。结果：株菌能够耐受一定浓度的过氧化氢（H2O2）,无细胞提取物的超氧阴离子自由基（O2－•）和DPPH自由基清除能力最强,胞外分泌物的羟自由基（•OH）清除作用最好。无细胞提取物和胞外分泌物的T-AOC效果最佳,与另外两组差异显著（P＜0.05）。胞外分泌物的GSH-Px和T-SOD酶活性最高,明显比无细胞提取物和菌体灭活组效果好（P＜0.05）。4 组样品都具有还原能力和金属离子螯合能力,但Cu2+螯合能力不如Fe2+螯合能力效果好。结论：菌株具有抗氧化活性,其抗氧化本质可能与其具有金属离子螯合能力、提供电子和清除自由基等作用模式有关。     

乳用动物乳腺特异性miRNAs研究进展

乳用动物具有重要的经济价值,其乳腺的健康发育至关重要。miRNA是一种重要的转录后调控的非编码RNA,参与调控哺乳动物乳腺发育和泌乳。就近年来奶牛与奶山羊乳腺特异性miRNAs研究工作做一概述,为未来miRNAs在乳腺生物学上的深入研究提供理论基础和研究思路。     

Taqman探针实时PCR检测金黄色葡萄球菌的研究

建立了Taqman探针实时PCR方法,针对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。研究所设计的引物具有良好的特异性,而且Taqman探针实时PCR方法检测sea基因的灵敏度高,最低检出限为69 fg,并且该方法可在8 h内完成人工污染乳中金黄色葡萄球菌的检测,最低检出限为83 cfu/mL。研究所建立的方法具有特异性强、灵敏性高及操作简便等优点,适宜于牛乳中金黄色葡萄球菌污染的调查及监测。     

基因芯片在益生菌筛选及功能性分析方面的应用

基因芯片技术是鉴别微生物最有效的手段之一,它不仅可以高效、快速、准确地筛选出益生菌,而且可以对其作用宿主后产生的益生功能进行分析.本文阐明了基因芯片的原理以及近年来基因芯片技术在益生菌筛选和功能性分析方面的应用.     

环介导等温扩增-无电加热法检测乳中阪崎克罗诺杆菌

设计了一个无电加热器,利用氧化钙和水的化学反应提供热源,建立一种检测乳中阪崎克罗诺杆菌的环介导等温扩增无电检测体系,同时以阪崎克罗诺杆菌的ITS序列为靶基因,设计特异性引物,使其能够实现快速、高效的现场检测婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌,最终通过琼脂糖凝胶电泳法对检测结果进行判定。利用上述建立的无电检测体系,进行阪崎克罗诺杆菌灵敏度实验并与传统用电加热器法进行对比,在不同环境温度下进行测试。结果表明,利用该无电检测体系和基于传统电加热器检测阪崎克罗诺杆菌纯培养物的灵敏度均为2.6×10~2CFU/m L,且人工污染的婴儿配方奶粉中阪崎克罗诺杆菌的灵敏度均为4.2×10~2CFU/g。该无电检测体系稳定性好,在环境温度为4~37℃时,灵敏度均能达到10~2CFU/g。     

实时RT-PCR检测存活于乳中的单核细胞增多性李斯特菌

单增李斯特菌是一种可在低温下生长、能引起人畜共患病的食源性致病菌.为克服传统PCR检测的假阳性问题,有效的检测单增李斯特活菌,本研究提取单增李斯特菌的总RNA并进行反转录,以单增李斯特菌的必要毒力基因hlyA为靶基因,设计特异性引物和TaqMan探针进行实时PCR检测,研究了检测的特异性和灵敏度,考查了对人工污染牛乳进行检测的应用性.结果表明,所用引物和探针能较好的扩增目的基因,而对其他食源性致病菌无交叉反应.单增李斯特菌经1h增菌,可检出3×102CFU/ml.而经3h增菌,活菌检测限可达30CFU/ml.人工污染牛乳样品经6h增菌,检测限为17CFU/ml.此方法可应用于乳中单增李斯特菌的快速检测和污染状况调查.