cp4-epsps基因在毕赤酵母中的表达及鉴定

为建立一种新的外源蛋白安全评估方法,构建转外源基因酵母是关键步骤。本研究以来源于转基因作物的抗除草剂合成酶蛋白CP4-EPSPS为研究模板,首先通过基因优化和化学合成获得cp4-epsps基因,优化后基因密码子适用性指数(CAI)为0.85,GC含量为52%。目的基因克隆至毕赤酵母表达载体p PICZb,经鉴定筛选正确的重组载体p PICZb-EPSPS电击转化至毕赤酵母GS115,cp4-epsps基因通过同源重组方式整合至酵母基因组,PCR扩增酵母基因组筛选得到在正确位点发生同源重组的4株阳性菌株。随后,各阳性菌株分别于28℃、250~300 r/min培养,0.5%甲醇诱导4 d后,提取各组菌株总蛋白,采用SDS-PAGE和western blotting鉴定CP4-EPSPS表达的正确性。CP4-EPSPS单克隆抗体及载体标签C-MYC单克隆抗体的western blotting结果一致显示cp4-epsps基因在毕赤酵母GS115中成功获得表达,大小约50 ku。本实验成功构建了转cp4-epsps基因的毕赤酵母基因工程菌,为下一步开展转基因作物CP4-EPSPS成份的安全评价奠定基础。     

人类乳头瘤病毒特异性抗体单一稀释度ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100及500倍稀释),建立HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,并验证方法的特异性、准确性、线性范围、检测限度及精密性。采用建立的方法检测自然感染HPV及接种疫苗后的血清样本(各28份),并与假病毒中和试验(pseudovirus-based neutralization assay,PBNA)检测结果进行比较。结果 100份阴性血清样本HPV16及HPV18 IgG抗体均为阴性;HPV16及HPV18抗体滴度的平均回收率分别为74%和73%;HPV16及HPV18抗体的定量检测范围分别为0. 049～0. 370 IU/mL及0. 030～0. 231 IU/mL;该方法重复性CV在2. 9%～6. 6%之间,日间精密性CV在7. 7%～11. 9%之间。接种疫苗后的血清样本检测值显著高于自然感染样本(P 0. 05),接种疫苗后的血清样本检测值与PBNA法检测结果具有显著相关性(HPV16和HPV18抗体检测结果的r值分别为0. 727和0. 800)。结论成功建立了HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,且具有较好的特异性、准确性、精密性,可用于HPV疫苗免疫效果评价及疫苗上市后抗体水平的监测。     

无线传感器网络最少数量通信节点定位方法

随机布置的无线传感器网络,通信节点数量和位置影响网络性能。利用免疫理论与矢量量化技术提出了一种具有最少数量特性的无线传感器网络通信节点定位方法。根据生物免疫机制建立无线传感器节点激活模型,基于免疫自适应调节算法确定传递事件信息所需最少通信节点数;以全部节点坐标为矢量,通信节点数为矢量类别,矢量量化后获得的代表矢量即为通信节点在监测区域的位置。仿真结果表明该方法能极大地减少通信节点数量,优化网络空间资源布局。     

土豆中酪氨酸酶的提取及植物精油对其激活作用与动力学研究

本实验采取单因素分析法对土豆中酪氨酸粗酶的提取及反应条件进行优化,采用多巴速率氧化法筛选具有酪氨酸酶激活作用的植物精油,并通过酶动力学实验研究其激活机理。结果表明土豆中酪氨酸酶最佳提取条件为:料液比1:10(g/mL)、磷酸盐缓冲液pH6.8;最佳酪氨酸酶反应条件为:温度35℃、时间13 min、底物L-多巴/粗酶加入量比例5:5。在最佳提取条件与反应条件下筛选15种植物精油中发现百里香、茶树、依兰精油对酪氨酸酶激活作用显著(P>0.05),IC₅₀值分别为0.488、0.429、0.480 mg/mL,接近阳性对照补骨脂素IC₅₀值0.328 mg/mL,动力学实验发现百里香、茶树、依兰精油激活类型分别为非竞争型、混合型、混合型。     

新疆纺织工业水足迹与经济增长的脱钩关系

了解纺织工业水足迹及其与经济发展的脱钩情况，对协调区域经济发展以及进行节水减排具有重要意义。运用水足迹理论测算新疆纺织工业1998—2017年的蓝水足迹和灰水足迹，并运用Tapio脱钩分析模型对1998—2017年蓝水足迹、灰水足迹、水足迹与经济增长之间的关系进行分析。结果表明：新疆纺织工业蓝水足迹1997—2003年和2013—2017年呈下降趋势，增长率分别为-45.39%和-55.80%,2006—2013年呈增长趋势，增长率高达221.85%;灰水足迹2006—2013年呈增长趋势，增长率高达338.03%,2013—2017年呈下降趋势，增长率为-96.47%;新疆纺织工业蓝水足迹、灰水足迹与经济增长之间总体上均呈现弱脱钩，水足迹与经济增长之间呈现水量型弱脱钩；新疆纺织工业蓝水足迹、灰水足迹、水足迹与经济增长之间均未达到稳定、理想的脱钩状态。     

促老年人蛋白质消化吸收方法的研究进展

蛋白质是人体重要的营养物质，蛋白质的长期缺乏会直接或间接导致人体免疫力低下、肌肉衰减、骨质疏松等病症的发生概率增加，这种现象在老年人群中更为突出，从而降低了老年人群的运动及机体代谢能力，直接影响其生活质量，这也增加了我国公共卫生及医疗系统负担，阻碍了“健康中国”战略的稳步推进。目前，对于改善老年人蛋白质摄入不足/缺乏的方式主要有改良食物特性（改变蛋白质结构）、改善身体机能（添加可促进蛋白消化酶分泌的成分）、改变饮食结构（增加寡肽的摄入）以及改变饮食习惯（增加蛋白质摄入量和种类）。本文探讨年龄增长对蛋白质消化吸收能力的影响作用，并总结现有的促进蛋白质消化吸收的方法，同时对未来改善老年人蛋白质消化吸收能力的方法进行展望，以期为促进老年人营养尤其是蛋白质吸收的研究提供参考。     

对肼基苯磺酸的合成工艺研究

作者对对肼基苯磺酸合成路线进行了优化。以对氨基苯磺酸为原料,经过重氮化反应和还原反应,一锅法合成对肼基苯磺酸。选取碱种类、浓盐酸的用量、反应温度3个因素,利用正交实验对反应进行优化,得到最佳反应条件为2 g对氨基苯磺酸用11.5 mL 5%氢氧化钠溶液溶解,再用8.0 mL浓盐酸进行重氮化,之后再还原反应即可得产品,平均收率为75.0%。对优化后的工艺进行中试放大试验,反应条件温和,操作简便,收率稳定,具有一定的工业化应用前景。     

稳定表达胰蛋白酶原的重组MDCK细胞分离流感病毒效果初步分析

目的 初步考察稳定表达胰蛋白酶原的重组MDCK细胞(即MTY6细胞)分离流感病毒的效果。方法 按照世界卫生组织(World Health Organization,WHO)全球流感监测网络和国家流感中心(National Influenza Centers,NICs)推荐的病毒分离方法，使用MDCK和MTY6细胞同步分离包含H1N1、H3N2和B型流感病毒核酸阳性的咽拭子样本共20份，对分离培养液分别使用豚鼠红细胞和鸡血红细胞进行凝集试验，统计比较不同类型红细胞凝集效果，以及不同细胞分离病毒阳性率和血凝素滴度。结果 相同病毒分离物对两种类型红细胞的凝集效果不同，豚鼠红细胞完全凝集时间约为鸡血红细胞2倍，沉积形状呈环状，血凝滴度平均为鸡红细胞的23.6±1.2倍。相同条件下，有3份样本两种细胞均分离阴性，11份样本两种细胞均分离阳性，其余6份样本MDCK细胞分离阴性，而MTY6细胞分离阳性，MTY6细胞分离阳性率较MDCK细胞高30%；分离阳性样本包括H1N1亚型8份，MTY6细胞分离病毒血凝素滴度显著高于MDCK细胞，平均为13.0(1.7,23.0)倍；H3N2亚型和B型各2份，MT...