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目的建立MDCK细胞的主细胞库及工作细胞库,并进行检定,同时评价其生物学特性。方法从欧洲细胞保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Culture,ECACC)引进1株MDCK细胞,经传代扩大培养后,分别建立主库及工作细胞库。按照《中国药典》三部(2015版)规定的方法对细胞库进行细胞活力、细胞形态、无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查,并对细胞生长状况、传代稳定性、流感病毒敏感性进行检测。结果建立的MDCK细胞主种子库及工作种子库细胞形态呈不规则的上皮样细胞状,生长状态良好,细胞活率分别为96.0%和95.5%,无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查结果均合格。MDCK细胞生长曲线均呈S型,培养48~96 h进入对数生长期,随后进入平台期。连续传10代48 h细胞活率在93.0%~95.5%之间,较稳定。MDCK细胞对流感病毒较敏感,对B型流感病毒的敏感性高于A型流感病毒。结论建立的主细胞库及工作细胞库各项检测结果均符合《中国药典》规定,具有良好的传代稳定性及流感病毒敏感性。 相似文献
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目的分析森林脑炎病毒不同感染途径对小鼠模型的致病性、病毒分布及增殖动态。方法将适应原代地鼠肾(primary hamster kidney,PHK)细胞的森林脑炎病毒进行10倍系列稀释,取4个连续稀释度的病毒液,分别通过脑腔注射、灌胃、滴鼻、肌肉注射、腹腔注射的感染方式,对昆明小鼠进行攻毒,逐日连续观察14 d,计算半数致死量(median lethal dose,LD50);并分别取攻毒后第3、5、7天发病典型的腹腔感染组小鼠脑、肺、肾脏、肝脏、心脏、小肠、血液7种组织器官,采用蚀斑法检测病毒滴度。结果脑腔、灌胃、滴鼻、肌肉注射和腹腔注射攻毒方式的LD50分别为10、105.1、105、101.2和102PFU/mL。所有攻毒途径小鼠的脑腔中病毒滴度最高,达109PFU/mL,肺组织为106.5PFU/mL,肾脏为105PFU/mL,心脏和肝脏中病毒滴度较低,分别为102和101.5PFU/mL,肠道中出现一过性病毒感染,而血液中病毒滴度最高为105.5PFU/mL。结论森林脑炎病毒可通过多种途径感染小鼠模型,除具有较强易感性的脑组织外,对肺组织细胞同样具有较强的感染性。 相似文献
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目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3. 1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50%时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化。纯化产物进行4%~20%SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确。重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95%以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2. 4 mg/mL。结论成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3. 1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础。 相似文献
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杂多酸催化合成尼泊金丁酯一直是人们研究的热点,我们用乙醚萃取法首先合成Keggin型结构的12-硅钨酸(H4Si W12O40),再以对羟基苯甲酸和正丁醇为原料,用12-硅钨酸为催化剂酯化合成尼泊金丁酯。经过一系列的实验,探索反应的最佳条件,结果表明:当醇与酸的比例为4:1,催化剂用量为醇质量的5%,反应时间为4小时,收率在92%以上。 相似文献
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随着建筑行业的不断发展,我国越来越重视建筑行业的能源和环境等方面。绿色建筑:在建筑的全寿命周期内,最大限度地节约资源、保护环境和减少污染,为人们提供健康、使用和高效的使用空间与自然和谐共生的建筑。2013年1月1日国务院办公厅发布了《绿色建筑行动方案》第八条推动建筑工业化。装配式建筑凭借其安全、节能、环保和可持续发展等优点已然成为我国建筑行业发展的必然趋势。发展预制装配化建筑是改革工程建筑工程建造方式,实现建筑业转型升级,保持持续发展的必经之路。 相似文献
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本文介绍了一种组合式PC轨道梁底模系统,并对其承载情况进行了有限元分析。该系统由一定数量活动块组成,在较大程度上实现了底模系统的标准化和通用化,其每一个活动块可以通过自走行调节位置重组拼装成不同长度不同形状的PC轨道梁底模。通过Ansys有限元分析发现,系统最大变形出现在承载结构上端中间两侧区域;应力集中主要出现在四个区域,由大到小分别为:轴承滚柱内端点线接触区域,轮轴与轴承内端和滚轮外端接触区域,滚轮端部与轮轴接触区域,以及承载结构上端中央两侧区域。从仿真结果可以看出,该系统满足实际工作的需求。 相似文献