食品安全免疫层析检测技术研究进展

免疫层析技术(immunochromatography assay, ICA)不仅有效结合了层析法卓越的分离能力以及常规免疫分析方法的高度特异性,而且简单、快速、灵敏,为现场即时筛查提供一种理想的技术手段。近年来,免疫层析技术在食品安全检测中不断更新、完善和发展,包括标记材料、信号增强、高通量和定量分析等的技术革新,显示出巨大的发展潜力和广阔的应用前景。本文总结归纳了ICA在食品安全检测中的最新应用进展,汇总分析了ICA在我国食品安全领域标准化的情况,并讨论了ICA现有的不足以及在未来应用中的发展方向,以期为我国食品安全快速检测的发展提供技术参考。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

磺胺类抗生素分子印迹制备技术与应用进展

分子印迹技术是一种可以特异性地从样品中将待测物分离和富集,降低样品中复杂基质对待测物检测结果的干扰,提高仪器检测精度的前处理技术,现已广泛应用于动物性食品中的兽药残留检测领域。磺胺类抗生素作为最常被检出的兽药之一,其检测方法的优化有着重要研究意义。本文聚焦了近年来磺胺类抗生素分子印迹技术的发展趋势,包括新型功能单体、交联剂和致孔剂的选用,聚合方法的优化以及其应用模式从传统固相萃取材料到快速检测产品的转变,阐述了该技术的优势和目前存在的问题,为磺胺类抗生素分子印迹聚合技术的发展提供参考。     

直接竞争ELISA法检测蜂蜜中氯霉素残留

建立蜂蜜中氯霉素直接竞争酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。以抗氯霉素单克隆抗体为包被原,氯霉素-辣根过氧化物偶联物为标记物,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺作显色底物,对其主要影响因素,如标准品稀释液、包被温度、包被抗体稀释倍数等6个因素进行优化,同时还对该方法的准确性和稳定性进行考察。结果表明:所建立的直接竞争ELISA标准曲线方程式为y=-17.425x+97.509,相关系数R~2为0.991 2,IC_(50)值为0.63 ng/mL,检出限和线性检测范围分别为(0.04±0.01)ng/mL和0.10~4.17 ng/mL;另外整个检测反应过程耗时约为40 min。蜂蜜样品的检出限和定量限分别为0.15 ng/g和0.33 ng/g,添加回收率在97.58%~100.94%之间,批内变异系数和批间变异系数均小于11%,表明该方法具有高精确度和稳定性。     

基于二氧化锡/碳化硅空心球纳米链的电化学传感器检测食用油中黄曲霉毒素B1

在电极基底和抗体探针修饰生物相容性良好的二氧化锡/碳化硅空心球纳米链、聚苯胺纳米线、金纳米颗粒等纳米材料,放大电化学信号,提高检测灵敏度,构建黄曲霉毒素B_1直接竞争检测电化学传感器。结果表明:该传感器对黄曲霉毒素B_1的检测线性范围为3.81pg/mL～1.00μg/mL,检出限为1.13pg/mL。传感器具有良好的稳定性、重现性和特异性,对食用油的检测添加回收率在84.6%～107.6%,变异系数在5.42%～10.49%,可应用于食用油中黄曲霉毒素B_1的快速筛查。     

邻苯二甲酸二甲酯免疫层析快速检测试纸的研制

邻苯二甲酸酯类塑化剂是一类具有生殖毒性的环境激素类物质,通过违规添加或迁移而造成食品污染问题颇为严峻,开发适合现场的塑化剂快速监测方法非常重要。本研究以邻苯二甲酸二甲酯(DMP)为对象,建立了DMP的胶体金标记免疫层析检测试纸方法。采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记DMP多克隆抗体,制备了金标抗体;采用棋盘法和单因素试验确定最佳包被浓度和二抗浓度分别为3000μg/mL和1600μg/mL,抗体浓度为稀释1.4倍,基于此建立了DMP免疫层析快速检测方法,其检测限为0.4μg/mL,5 min内肉眼可观察到检测结果,与其它结构功能类似物无明显交叉反应,特异性良好,白酒样品添加检测结果与GC-MS法相符。本法快速简单,稳定可靠,适用于实际样品中DMP的现场快速检测。     

花生(油)中黄曲霉毒素的污染、控制与消除

黄曲霉毒素是目前已知的毒性最强的致癌物之一,在富含油料的种子中污染较严重。从调查的原料花生和花生油中黄曲霉毒素的污染情况出发,对国内外花生及其油品中黄曲霉毒素限量和检测方法进行分析,并从花生原料的筛选与脱毒、贮藏与加工过程控制以及成品花生油黄曲霉毒素的脱除3个方面,综述了国内外近年来对花生油中黄曲霉毒素控制与消除方法,以期对国内花生油及其制品控制、消除黄曲霉毒素污染提供参考。     

对硫磷酶联免疫吸附分析方法的建立和评价

通过制备对硫磷的多克隆抗体,建立了对硫磷的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)。通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,获得免疫抗原和包被抗原。使用对硫磷抗血清,经优化条件参数建立了对硫磷的icELISA分析方法。该方法检测线性范围为3.39～533.05ng/mL,最低检测限为0.90ng/mL,对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为75.6%～127.4%,能用于实际样品中对硫磷的检测。     

利用同相等差感应电势法检测膨化食品中阿斯巴甜的研究

利用同相等差感应电势法,向初级线圈施加5 V～20 V激励电压和300 Hz～500 Hz频率的激励参数,探究次级线圈中阿斯巴甜溶液的电学特性。结果发现,0～100 mg/kg阿斯巴甜溶液的瞬时绝对电压与初级线圈激励电压大小呈正相关,但不随频率变化而改变。20 V、300 Hz条件下,100 mg/kg阿斯巴甜溶液电势差较50 mg/kg提高32.46%,当阿斯巴甜质量分数增加时,体系电势差随激励电压增加而增大。阿斯巴甜质量分数、激励电压、频率及体系电势差呈线性相关,相关系数（r）为0.94。利用同相等差感应电势与化学法检测5种市售膨化食品中的阿斯巴甜总含量,其检测结果相对误差均在2.50%以内,同相等差感应电势法具有良好的重复性和准确性。将膨化食品预处理后的料液作为次级线圈,通过同相等差感应电势法测定其电信号特性来量化阿斯巴甜总含量,为膨化食品中阿斯巴甜的检测提供了一种新技术方法。     

基于CoOOH纳米片氧化酶活性的比率荧光传感器检测抗坏血酸

研究建立一种基于羟基氧化钴纳米片（CoOOH）类氧化酶活性的比率荧光传感器,可快速、灵敏、准确地测定抗坏血酸（Ascorbic acid,AA）。在氢氧化钠溶液中,以氯化钴为原料、次氯酸钠为氧化剂,在超声条件下制备具有类氧化酶活性的CoOOH纳米片,并采用透射电子显微镜（TEM）、紫外可见吸收光谱（UV-vis）、X射线衍射（XRD）和傅里叶红外光谱（FT-IR）,对所合成的材料表面形貌、光吸收特性、结晶度以及表面基团进行表征,并通过对照试验对所合成的CoOOH纳米片构建比率荧光传感器的可行性进行验证。以检测体系中CoOOH纳米片浓度及孵育时间为单因素,优化检测AA的最佳条件,并建立相应的标准曲线。结果表明,CoOOH纳米片呈典型的纳米级六边形片状,其他表征结果也与以往报道的相符。CoOOH纳米片最佳工作浓度为39.1 μmol/L,最佳孵育时间为25 min。在最优条件下,428 nm处的荧光强度（F₄₂₈）与568 nm处荧光强度（F₅₆₈）比值F₄₂₈/F₅₆₈与AA浓度在0.5~10.0 μmol/L范围内呈现良好的线性关系,线性方程为y=0.79416x+0.37917（R2=0.9965）,检测限303 nmol/L（RSN=3）。将其应用于果汁饮料样品检测,回收率在88.0%~115.9%之间,且检测结果与国家标准方法的检测结果相符。以上结果表明该传感器对检测AA有较好的选择性和准确度,为AA的快速检测提供一种新思路。