南美白对虾肝胰腺蛋白提取方法优化及无水保活环境胁迫对细胞凋亡蛋白的影响

为提高Western Blotting结果的可靠性，以蛋白溶出率和凝胶电泳蛋白条带完整性为指标，比较提取液种类、研磨方式、酶抑制剂种类及其体积分数和提取时间对南美白对虾肝胰腺蛋白提取效果的影响。采用优化后的提取方法获得高质量蛋白样品，并采用Western Blotting法分析无水环境胁迫后南美白对虾肝胰腺组织中细胞凋亡信号通路相关蛋白的表达水平。结果表明：RIPA裂解液作为提取溶剂所得的蛋白溶出率高于水提和磷酸盐缓冲液，电动匀浆和液氮研磨所得蛋白条带更完整，4%蛋白酶磷酸酶混合抑制剂能有效抑制肝胰腺内源酶引起的蛋白降解；采用Western Blotting法分析无水保活期间南美白对虾肝胰腺蛋白，发现低温诱导休眠的同时会引起细胞轻微凋亡，且凋亡水平呈应激时间依赖性增加，环境胁迫解除后有所回调。     

盐分胁迫对烤烟叶片亚细胞结构及生理生化指标的影响

  目的  探究不同浓度NaCl和Na₂SO₄溶液对烤烟叶肉细胞超微结构以及对叶片抗氧化系统的影响。  方法  利用透射电镜对不同浓度的盐溶液处理下烤烟叶肉细胞进行观察，并检测其抗氧化酶活性。  结果  在低浓度盐溶液（100 mmol/L NaCl和50 mmol/L Na₂SO₄）处理条件下，烤烟叶肉细胞壁厚度有所减小，细胞内各细胞器无明显变化。中等浓度NaCl（200 mmol/L）处理条件下，烤烟叶肉细胞的叶绿体背膜边缘模糊，嗜锇颗粒增多，淀粉粒含量减少；线粒体内出现空泡，嵴减少，部分膜结构边缘模糊；细胞核核仁密度降低，核膜凹凸不平。中等浓度Na₂SO₄（100 mmol/L）处理条件下，叶绿体基粒片层间空隙增大；线粒体形态饱满，但内膜凹陷；细胞核染色质分布均匀，但核仁边缘模糊。高浓度NaCl（400 mmol/L）使烤烟叶肉细胞叶绿体基粒片层结构失去完整性；线粒体结构瓦解，几乎没有完整结构的嵴。高浓度Na₂SO₄（200 mmol/L）处理条件下，叶绿体肿胀，变为球形，内膜及部分基粒片层溶解，淀粉颗粒进一步减少；线粒体内膜溶解，基质密度降低；细胞核核仁解体，甚至溶解消失。随着NaCl和Na₂SO₄浓度的升高，过氧化氢酶活性逐渐增强；丙二醛含量和超氧化物歧化等酶活性先升高后降低；过氧化物酶活性先降后升之后再降低。  结论  烤烟对Na₂SO₄溶液的耐受能力强于NaCl溶液。      

基于ERT技术的硫酸钡颗粒形成过程研究

采用电阻层析成像技术(ERT)实时监测反应器内横截面电导率变化,进而考查络合法形成球形硫酸钡颗粒的过程中溶液电导率变化趋势。在拟均相条件下,根据ERT实时监测、采集、分析硫酸钡颗粒生成过程中电导率变化情况,得出电导率变化曲线,并采用扫描电子显微镜方法观察随着反应时间变化硫酸钡颗粒的形态变化情况。实验结果表明,使用ERT监测电导率变化可以得出不同浓度条件下电导率变化趋势及其浓度条件下的最适宜反应时间,并验证了采用电阻层析技术(ERT)对研究硫酸钡颗粒的形成具有较高的灵敏度,可用于研究硫酸钡颗粒的形成最适宜时间;用扫描电子显微镜观察络合法合成硫酸钡最开始形成一种梭型颗粒,随着钡离子的缓慢释放,硫酸钡颗粒不断生长,最终得到粒度均匀、分散性良好的球形硫酸钡颗粒。     

白藜芦醇对人髓母细胞瘤细胞Daoy增殖的影响及其作用机制

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)Daoy细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法体外培养Daoy细胞,用不同浓度的Res(10、20、40、80μmol/L)作用不同时间(24、48和72 h),CCK-8法检测Res对Daoy细胞的增殖抑制率;电镜观察Res对细胞内自噬溶酶体的形成情况;Cathepsin D活性检测试剂盒检测Cathepsin D活性;Western blot法检测Daoy细胞中Beclin 1、LC3、p62和溶酶体相关膜蛋白2(lysosomeassociated membrane proteins 2,LAMP2)的表达及3-甲基腺嘌呤(3-MA)和巴弗洛霉素A1(Bafilomycin A1)对Res作用的影响。结果 Res作用后,Daoy细胞的增殖抑制率随Res浓度的升高及作用时间的延长呈升高趋势;随着Res浓度的升高,Daoy细胞内自噬溶酶体形成数量、Cathepsin D酶活性、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2蛋白的表达均呈上升趋势,p62蛋白表达下降。3-MA作用后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值、Beclin 1、LAMP2的蛋白表达水平明显下降(P <0. 05),p62的表达水平明显上调(P <0. 05);Bafilomycin A1处理后,Beclin 1、p62及LAMP2表达明显降低(P <0. 05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显增高(P <0. 05)。结论 Res可抑制髓母细胞瘤细胞Daoy的增殖,其机制可能与Res促进自噬形成与成熟过程有关。     

龙眼核活性脂质的分析及其细胞增殖活性研究

研究了龙眼核活性脂质的组成及其细胞增殖活性。以龙眼核为原料,经超声辅助提取、氯仿萃取、硅胶柱层析分离后得到富含植物甾醇和神经酰胺的活性脂质组分CEP-2;定性定量分析脂质中的活性成分,并在细胞水平上考察龙眼核活性脂质对人皮肤成纤维细胞(HSF)、人永生化角质形成细胞(Ha CaT)增殖活性的影响。结果表明:CEP-2中主要含有三萜类、神经酰胺类、鞣质及酚类物质,总甾醇含量为518. 26 mg/g,神经酰胺含量为2. 65 mg/g; CEP-2在质量浓度为40μg/m L时,HSF细胞的存活率为105. 28%;在质量浓度为100μg/m L时,对HaCaT细胞表现出明显的细胞增殖活性(p 0. 001),细胞存活率为114. 21%。