人热休克蛋白10在毕赤酵母中的表达及纯化

目的在毕赤酵母中表达及纯化人热休克蛋白10(heat shock protein 10,Hsp10)。方法取新鲜人胎盘组织提取总RNA,反转录合成c DNA。以其为模版PCR扩增Hsp10基因片段,构建外分泌重组表达载体pPIC9KHsp10,电击转化毕赤酵母GS115菌株,经组氨酸缺陷筛选,获得阳性菌株pPIC9K-Hsp10/GS115。重组菌经甲醇诱导,SDS-PAGE检测蛋白含量,Western blot分析Hsp10特异性。结果获取了序列正确的Hsp10基因及高表达菌株。表达产物在相对分子质量11 000处可见特异表达条带,Hsp10蛋白表达量为400 mg/L,纯度大于90%;Western blot分析表明,Hsp10具有良好的反应原性和特异性。结论 Hsp10在毕赤酵母GS115中成功表达,为该蛋白的放大生产及应用奠定了基础。     

氧化应激在白发发生中的作用

毛囊干细胞的缺失及减少、毛囊黑素细胞缺陷及减少是白发产生的重要原因,这些均与氧化应激相关。综述了氧化应激在白发发生中的作用,为预防白发提供了新思路。     

缓释胸腺五肽微球的制备及质量评价研究

制备了胸腺五肽微球并进行了体外释药研究.采用复乳-溶剂挥发法,以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为成球材料制备了胸腺五肽微球,并采用正交设计L9（34）对制备工艺进行了优化,观察了微球的表面形貌,测定了微球的粒径、粒径分布、包封率和载药量,最后评价了载药微球的体外释放行为.结果表明：所制备的微球形态完整,平均粒径为（28.47±0.56）μm,微球载药量与包封率分别为（1.53±0.05）%与（57.9±0.7）%;胸腺五肽PLGA微球具有显著的药物缓释作用,体外释放20 d的累积释药率达90%以上.     

GHK及GHK-Cu纯化方法研究

建立高效、快速、简便的纯化GHK和GHK-Cu的方法,以便提高GHK和GHK-Cu的纯度,减少过敏反应。该方法通过离子交换色谱除去GHK及GHK-Cu中的三氟乙酸及部分杂质,再通过反相色谱纯化得到纯度96%的GHK及GHK-Cu醋酸盐。此方法仅需两步纯化,降低了生产成本,不仅能得到纯度大于96%的GHK和GHK-Cu,而且能达到纯化GHK成本低、收率高、产业化的要求。     

二种固相合成艾塞那肽方法比较

介绍了两种艾塞那肽的合成方法,为艾塞那肽规模化生产方法的选择提供有意义的参考。通过采用经典的固相逐个延伸法和固相四片段片段合成方法,并用两种方法分别合成艾塞那肽,对结果进行了分析和讨论。结果表明,综合工艺难度、工艺稳定性、合成成本等方面因素考虑,艾塞那肽合成采用逐个延伸法合成综合效果更优。     

重组人溶菌酶的分离纯化及鉴定

目的建立重组人溶菌酶(human lysozyme,h LYZ)的分离纯化方法,并对纯化产物进行鉴定。方法采用固液分离、膜过滤、疏水层析及离子交换层析对hLYZ进行分离纯化;SDS-PAGE及HPLC法检测hLYZ纯度;按《中国药典》二部(2015版)蛋清溶菌酶效价检查法检测其效价;Western blot法检测其特异性;基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其相对分子质量。结果该分离方法可获得单一组分的重组hLYZ;SDS-PAGE检测纯度达99%,HPLC分析纯度达98. 8%;纯化后的hLYZ可与抗人LYZ抗体特异性结合,活性为1. 2×105 U/mg,相对分子质量为14 697。结论建立的分离纯化方法易操作,成本低,得到的hLYZ纯度大于98%,该分离方法可用于hLYZ的规模化生产。     

GHK对B16细胞内黑色素合成的抑制作用

为探讨甘氨酰组氨酰赖氨酸(GHK)对细胞内黑色素合成的抑制作用以及可能的作用机制,为GHK作为美白化妆品的添加剂提供试验依据,采用液相合成方法制备GHK,研究GHK对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用及对小鼠B16黑素瘤细胞(B16)增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响。结果表明,GHK在质量浓度低于5 g/L时,在培养过程中B16细胞的增殖并没有受到影响,且随着GHK浓度的提高,对B16细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素合成均呈现质量浓度依赖性的抑制作用。说明GHK对B16细胞内黑色素的合成具有显著的抑制作用,是一种高效的黑色素合成抑制剂,在美白化妆品中具有良好的应用潜力。     

重组人超氧化物岐化酶基因工程菌稳定性研究

目的:研究重组人超氧化物岐化酶毕赤酵母基因工程菌的遗传稳定性。方法:基因工程菌连续传代50次,每10代取样保藏菌种,通过对菌株形态、菌落形态、质粒稳定性、目的基因的PCR鉴定,蛋白表达的SDS-PAGE鉴定来评价工程菌的稳定性。结果:在连续传代50代的过程中,菌株、落形态与原始工程菌相比无明显差异,质粒保有率高,PCR鉴定结果显示,重组载体携带目的基因传至50代未消失,SDS-PAGE结果表明,传至50代蛋白表达量无明显差异。结论:该工程菌有良好的遗传稳定性。     

GHK三肽的最新研究进展

GHK(glycyl-L-histidyl-L-lysine)存在于人的血液、唾液、尿液当中并随着年龄的增长下降。通常GHK是与2价铜离子作为复合物来发挥促愈合和修复的功能。GHK可以调节胶原和糖胺聚糖的合成与分解,并且调节金属蛋白酶和它的抑制剂的活性。它刺激胶原、硫酸皮肤塑、硫酸几丁质、小糖蛋白、糖蛋白的合成,它同样能够恢复经过放化疗的成纤维细胞的再生能力。这种分子可以吸引免疫细胞和内皮细胞向受伤部位迁移。它加速皮肤、毛囊、胃肠道、骨组织,和狗的脚垫伤口愈合,它同样可以诱导大鼠、小鼠和猪的全身伤口愈合。在美容产品当中,它能够让松弛的皮肤紧实,并增加弹性,皮肤的密度和坚实度,减少细纹和皱纹,减少光损伤和色素沉着,增加角质形成细胞的增殖。已经证明GHK可以作为治疗性成分在慢性阻塞性肺炎和代谢性癌症中应用。GHK可以上调或者下调至少4000种人类基因,尤其在DNA恢复重建当中发挥重要作用。文章主要关注GHK在皮肤再生领域的最新进展。     

透皮肽纯化方法研究

建立高效、快速、简便的纯化透皮肽的方法,以便提高透皮肽的纯度,减少过敏反应。采用反相聚合物色谱柱去除六胜肽中的杂质,再用DEAE色谱柱除去大批量透皮肽粗品中的三氟乙酸,得到醋酸型的透皮肽。此方法仅需两步纯化,降低了生产成本,不仅能得到纯度大于99%的透皮肽,而且能达到纯化透皮肽成本低、收率高、产业化的要求。