哈茨木霉几丁质酶基因的cDNA克隆及表达

为了研究全新几丁质酶基因Chit37(DQ647957)的特性与功能,将该基因在大肠杆菌中进行了外源表达.通过构建哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌丝生长期的cDNA文库及对部分表达序列标签序列的测定与生物信息学分析,成功获得了基因Chit37的全长cDNA序列.该基因的编码框长度为1032bp,编码343个氨基酸,理论分子量为36.6kDa.采用PCR扩增的方法克隆该基因并将其构建到原核表达载体pET28(a+)上,构建了原核表达载体pET-Chit37并转化宿主菌BL21(DE3),菌落PCR及酶切鉴定均证实转化子的正确性,重组蛋白经IPTG诱导后获得表达.优化的表达条件为终浓度0.1mM IPTG诱导培养4h.     

城乡混合有机垃圾快速稳定化及资源化利用技术的研究构想与前景展望

城乡混合有机垃圾包括易腐垃圾及部分农业废弃物,其产量大、成分复杂、含水率及养分含量高,好氧发酵是其资源化处理处置关键技术之一,但在我国因转化效率低、副产物风险不明等原因限制了其应用。针对我国有机垃圾好氧发酵瓶颈问题,项目通过好氧发酵工艺,解析城乡混合有机垃圾好氧发酵微生物代谢网络定向转化的调控原理;研发智屏显示-在线监测-反馈调控等智能一体式快速稳定化技术装备;攻克生物强化水解-微生物碳泵定向转化-功能材料钝化固碳微生物细胞微工厂定向腐殖化、副产物风险评估-原位阻控-再循环利用等增质控污技术,构建资源化产物深加工-分质评估-属性互补等末端对“征”利用技术。集成快速稳定化与资源化利用技术装备模块体系,针对技术模块的互补性、资源可持续利用性特征,建立与区域匹配的对“征”示范工程,形成商业化推广模式。这种围绕有机垃圾好氧发酵原位削减、过程增质控污、末端资源化利用的国家科技重大需求,开展相关研发与工程示范,旨在为我国城乡混合有机垃圾资源化处理提供技术支撑。