耦合末端盐桥与定点突变的重组腈水合酶催化动力学

双亚基腈水合酶是催化丙烯腈水合生产丙烯酰胺的重要工业酶。通过Discovery Studio 2.5软件对C-末端盐桥耦合定点突变改造的耐热型基因重组腈水合酶NHase^M-TH-SB^M（S344K-S346K-L347E-N362S-435DT436（+））进行盐桥网络分析,发现其全局盐桥总数有所下降,但双亚基界面间盐桥数量提高到7个。在重组大肠杆菌中表达了原腈水合酶NHase^M-TH（TH）、盐桥突变酶NHase^M-TH-SB（SB）和盐桥耦合定点突变的重组酶NHase^M-TH-SB^M（SB^M）,研究了3种酶的催化反应动力学和失活动力学。结果表明,SB^M的腈水合酶活性为543.9 U·mg^-1,比TH提高了31.0%;其米氏方程催化速率常数K_cat比TH提高了20%。SB^M的表观失活常数K_D在25～42℃范围内均明显低于对照TH,在42℃时为TH的68.0%,显示了良好的热稳定性。SB^M是活性和稳定性同时提高的重组腈水合酶。     

用于测定尿激酶原活性的纤溶板法的数字图像处理和分析技术

作为测定尿激酶原活性的常用方法之一的纤溶板具有灵敏度高，可直接显示测量结果的特点。可是这种方法也有人为影响因素多和测量准确度低的问题。本文描述了一种基于传统的纤溶板法的自动数字图像处理和分析技术，构建了一套数字图像处理和分析系统。应用这套系统测定不同浓度的激酶原标准品，所获得的结果接近3个操作员的测量结果的平均值，而且所回归的标准曲线的线性相关系数比传统的方法的测量结果平均高出0．01，提高了测量结果的准确性和客观性。同时由于整套系统采用了半自动的操作方式，也大大减轻了工作人员的劳动强度。     

从微生物细胞中分离提取PHB的方法的综述

介绍和归纳目前文献报导的从微生物细胞中分离提取ＰＨＢ的各种方法，包括溶剂萃取法，化学试剂法，机械破碎法和酶法。对这些方法的优缺点进行了评述，提出发展机械的，物理的，化学的，生物的多种方法相结合以去除菌体中非ＰＨＢ的杂质来分离提取ＰＨＢ半是今后研究的一个方向。     

脉冲筛板萃取柱中两相流体力学的研究

汪家鼎、沈忠耀等曾在1963年提出了脉冲筛板萃取柱中两相流体流动特性的基本关联式:V_d/x+V_c/（1-x）=V_o（1-x）~n。在内径为25mm标准板结构的玻璃柱中测得煤油～水体系的方程指数n=2.2±0.2。并推断n应为两相体系物性的函数。本文是以上工作的继续和深入。研究中采用了四种体系。在各种操作条件下对式中的参数n、V_o与体系物性及分散相液滴平均直径D（3,2）之间的关系进行了探讨。得到了按体系物性和操作参数计算D（3,2）、n和V_o的半经验关联式。利用这些关联式计算的液泛流速与实测值相比,绝大多数误差在±15％以内。     

重组大肠杆菌VG1(pTU14)合成3-羟基丁酸酯-3-羟戊酸酯共聚物的研究

摇瓶培养结果表明,重组大肠杆菌E.coli VG1(pTU14)可以在培养基中加入丙酸的环境下合成聚(3-羟基丁酸-3-羟基戊酸酯)(PHBV),且丙酸的初浓度和加入时间是影响细菌生长、PHBV积累和产品中HV分率的关键因素.在摇瓶补料分批培养中,通过监测细胞生长、PHBV积累和丙酸的消耗过程,优化并确定了丙酸的补料策略.E.coli VG1(pTU14)经过48 h的摇瓶补料分批培养,菌体干重、PHBV浓度、PHBV含量和HV摩尔分率,分别达到16.6g/L、13.1g/L、78.7%和7.2%.PHBV相对于葡萄糖的得率、HV相对于丙酸的得率和PHBV的产率分别为0.327g/g、0.343g/g和0.273g/L/h.     

超临界流体中物质溶解度的研究(Ⅰ)

本文分析了超临界流体萃取过程的特点.认为超临界流体的P-V-T行为可采用某种气体状态方程来描述.在分离作用机理上更近于液液萃取过程.提出了其萃取历程的物理化学模式,据此推导了超临界流体中物质溶解度计算公式.通过对此式的剖析和简化,得到了固体及液体纯物质在超临界流体中溶解度的半理论、半经验计算公式.并用文献发表的实验数据对半经验式的适用性进行验算,获得了较满意的结果,平均偏差≤10%.     

A STUDY ON TWO-PHASE FLOW CHARACTERISTICS IN PULSED SIEVE PLATE COLUMN FOR LIQUID-LIQUID EXTRACTION

In a previous investigation in 1963 Wang and Shen et al,found that the well known flow equationfor pulsed sieve plate column given by J.D.Thornton should be modified and written asV_s=V_d/X V_c/(1-x)=V_0(1-x)~nThis paper is a continuation of the previous works.Four kinds of liquid-liquid system were examinedin this study.The parameters n and V_o,the Sauter mean diameter of dispersed droplets D_(3.2) arc corro-leted in terms of physical properties of the systems and operation variables.Calculated flooding veloci-ties are close to the experimental values with deviation within ±15%.     

EXTRACTION OF INTERFERON-γ USING PEG/K_3PO_4 AQUEOUS TWO-PHASE SYSTEM

The aqueous two-phase system of PEG-4000/K_3PO_4 is selected to extract interferon-γ(γ-IFN)from the broth of homogenized E.coil cells,which were recombined genetically and werefermented in high expressivity.The effects of pH value and the concentrations of PEG and phos-phate on the partition behavious of γ-IFN and contaminating proteins have been investigated.Theresults show that the pH value is the most influential factor effecting the extraction yield of γ-IFN.Under a suitable condition,an effective separation with high yield of γ-IFN can be achieved.     

一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的研究进展

7-氨基头孢烷酸是合成头孢类抗生素的重要中间体,一般由头孢菌素C通过化学法或生物酶法裂解脱去侧链分子制备得到。综述了头孢菌素C酰化酶的来源、特性及其基因的克隆和改造,表达与纯化,固定化及其催化工艺的研究,并展望了一步酶法生产7-氨基头孢烷酸的应用前景。     

生物化工—化学工程的新兴学科

1 生物技术是当代高技术的重要领域工业发达国家资源的高消费、第三世界国家人口的高增长,引起能源紧张、森林锐减、耕地毁坏、草场萎缩、海洋过捞、粮食欠缺、环境污染、气候恶化、天灾增多……,使50多亿人口居住的小小的地球承受着极大的压力,