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目的将铜绿假单胞菌外毒素A(Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,PEA)基因突变为无毒性的ntPE基因,并在大肠埃希菌中进行表达。方法利用Primer Premier 5.0软件设计PEA基因引物及PEA基因第553位氨基酸缺失的突变引物,以铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.aeruginosa)基因组DNA为模板,PCR扩增PEA基因,插入pGEM-T载体中,构建重组克隆质粒pGEM-PEA,以其为模板,利用突变引物,扩增ntPE基因(无毒性PEA),插入pET-30a载体中,构建原核表达质粒pET-ntPE,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析。结果测序结果证明已成功获得突变基因;原核表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约69 000,主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的30%,可被小鼠抗PEA单克隆抗体特异性识别,具有较好的抗原性。结论已成功获得无毒性的PEA突变基因,为构建以PEA为蛋白佐剂的融合蛋白疫苗奠定了基础。  相似文献   
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去氧胆酸钠裂解流感病毒的效果研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 研究去氧胆酸钠对流感病毒最佳的裂解条件。方法 流感病毒在不同浓度的去氧胆酸钠作用一定时间后 ,经蔗糖梯度密度离心纯化 ,制备出流感裂解疫苗样品。以电镜观察病毒裂解情况和血液凝集反应 ,测定病毒效价作为评价指标 ,确定最佳裂解条件。结果 裂解纯化后的样品经电镜、SDS PAGE检测表明病毒颗粒完全裂解 ,裂解后的血凝效价收率约为 80 %。结论  0 .8%的去氧胆酸钠作用 12 0min可使流感病毒达到最佳裂解效果。  相似文献   
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